陳亦慧，孟信剛，潘思竹，田春亞，王德飄，胡德禹

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氣相色譜法（GC-ECD）檢測(cè)水稻中的噠螨靈

陳亦慧，孟信剛，潘思竹，田春亞，王德飄，胡德禹*

（貴州大學(xué) 精細(xì)化工研究開發(fā)中心，貴州 貴陽(yáng) 550025）

建立了一種氣相色譜法檢測(cè)水稻(植株、稻殼和糙米)中噠螨靈殘留的方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，噠螨靈添加水平在0.020~5.00 0 mg/kg范圍內(nèi)，植株、糙米和稻殼中噠螨靈的添加回收率在80.13%~98.59%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.40%~8.47%；噠螨靈的最小檢出量2.3×10-11g，該方法在水稻基質(zhì)中的最低檢出濃度為0.005 mg/kg。一年三地田間實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，距末次施藥21 d后，植株、糙米和稻殼中噠螨靈的最終殘留量為<0.05 mg/kg。本文建立噠螨靈在水稻中的檢測(cè)方法符合農(nóng)藥殘留檢測(cè)的要求，且最終殘留數(shù)據(jù)為其在水稻上的合理使用提供重要的科學(xué)依據(jù)。

噠螨靈；水稻；殘留；氣相色譜

噠螨靈，2-叔丁基-5-（4-叔丁基芐硫基）-4-氯噠嗪-3-（2H）酮，日本日產(chǎn)化學(xué)公司于1985年開發(fā)的一種高效、低毒、無內(nèi)吸性的廣譜性噠囔酮類殺蟲劑，通過抑制肌肉組織、神經(jīng)組織和電子傳遞系統(tǒng)中染色體I中谷氨酸脫氫酶的合成，從而發(fā)揮殺蟲作用[1]。它對(duì)所有的食植性害螨都具有明顯的防治效果，而且對(duì)不同生長(zhǎng)期的螨都有效，被廣泛應(yīng)用于水果、蔬菜、經(jīng)濟(jì)作物及觀賞植物上[2-4]，其在作物上的殘留情況受到廣泛關(guān)注。目前，對(duì)于噠螨靈的檢測(cè)分析方法主要是氣相色譜法[5]。此外，也有文獻(xiàn)報(bào)道用高效液相色譜法[6]、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法等。歐盟規(guī)定水稻中噠螨靈的最大殘留限量(MRLs)為0.05 mg/kg，我國(guó)尚未制定噠螨靈在水稻上的最大殘留限量。因此，建立一種水稻中噠螨靈殘留量檢測(cè)的氣相色譜分析方法，為噠螨靈在水稻基質(zhì)中殘留限量的制定和在水稻上的合理使用提供重要的科學(xué)依據(jù)是必要的。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 材料與試劑

噠螨靈標(biāo)準(zhǔn)品，純度99.0%；Celite545硅鎂吸附；丙酮、乙腈、乙酸乙酯、甲苯、氯化鈉、無水硫酸鎂均為分析純；無水硫酸鈉（分析純，450 ℃烘4 h）。

1.2 儀器與設(shè)備

Aglient GC-6890N型氣相色譜(含電子捕獲器)；色譜柱：安捷倫J&W HP-5毛細(xì)管柱（60 m×0.32 mm×0.25 μm）；BUCHI R-210型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；SHZ-D(Ⅲ)型循環(huán)水式真空泵；QL-901型渦旋混合器；ALC-210.4型電子天平；TGL-20B型離心機(jī)；AS-3120型超聲儀；IKAT25型高速植物組織搗碎機(jī)；HY-4型調(diào)速多用震蕩器。

1.3 田間試驗(yàn)

按NY/T788-2004《農(nóng)藥殘留實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)則》要求設(shè)計(jì)試驗(yàn)小區(qū)，分別在貴州、廣西和黑龍江設(shè)最終殘留試驗(yàn)。設(shè)2個(gè)施藥劑量，低劑量為120 ga.i/ha，高劑量為180 ga.i/ha，施藥2~3次，施藥間隔期為7 d，噴液量50 kg/mu；于收獲期倒推施藥，距最后一次施藥7 d、14 d、21 d采樣；每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)小區(qū)，共6個(gè)小區(qū)，每個(gè)小區(qū)面積30 m2，處理間設(shè)保護(hù)帶，另設(shè)清水空白對(duì)照區(qū)，不施藥，采對(duì)照樣。

1.4 測(cè)試方法

1.4.1 色譜分析條件

Aglient GC-6890N型氣相色譜(ECD)；色譜柱：J&W HP-5毛細(xì)管柱(60 m×0.32 mm, 0.25 μm)；載氣(N2)流速2.0 mL/min；進(jìn)洋口溫度為270 ℃；檢測(cè)器溫度為300 ℃；升溫程序：180 ℃保持1 min，以30 ℃/min升至280 ℃，保持8 min，再以10 ℃/min升至300 ℃，保持1 min。進(jìn)樣量2.0 μL，不分流；在此色譜條件下噠螨靈的相對(duì)保留時(shí)間為8.99 min。

1.4.2 樣品的提取

準(zhǔn)確稱取10.0 g糙米樣品于250 mL具塞三角瓶中，加入60 mL乙酸乙酯超聲20 min，抽濾，用10 mL乙酸乙酯洗滌三角瓶，合并濾液，過無水Na2SO4干燥，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮近干。用1 mL丙酮定容，經(jīng)0.22 μm濾膜過濾，待GC檢測(cè)。

準(zhǔn)確稱取5.0 g稻殼樣品于250 mL具塞三角瓶中，用50 mL乙腈振蕩20 min。抽濾，殘?jiān)儆?0 mL乙腈振蕩20 min，用10 mL乙腈洗滌殘?jiān)?，合并提取液，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮近干。用1 mL丙酮定容，經(jīng)0.22 μm濾膜過濾，待GC檢測(cè)。

準(zhǔn)確稱取5.0 g水稻植株樣品于50 mL具塞離心管中，加25 mL乙腈勻漿1 min，加入2 g NaCl和2 g無水MgSO4，渦旋30 s，于6 000 r·min-1離心5 min，殘?jiān)儆孟嗤w積乙腈勻漿1 min，于6 000 r·min-1離心5 min，合并提取液，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮近干，待凈化。

凈化：在Evni-Carb-Cartridges固相萃取柱中加入約2 cm厚的無水Na2SO4，用4 mL乙腈/甲苯(3∶1,/)預(yù)淋洗，將樣品濃縮液轉(zhuǎn)移至凈化柱中，用2 mL乙腈/甲苯(3∶1,/)洗滌，此操作重復(fù)3次。用10 mL乙腈/甲苯(3∶1,/)洗脫，合并洗脫液，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮近干。用1 mL丙酮定容，經(jīng)0.22 μm濾膜過濾，待GC檢測(cè)。

2 結(jié)果與討論

2.1 分析方法的靈敏度和線性范圍

準(zhǔn)確稱取噠螨靈標(biāo)準(zhǔn)品25.6 mg (準(zhǔn)確到0.1 mg)用丙酮配制為253.44 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液儲(chǔ)備液，將253.44 μg/mL的噠螨靈標(biāo)準(zhǔn)品溶液用丙酮稀釋配得一系列相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液，保存于-16 ℃冰箱中。根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)方法，噠螨靈在水稻基質(zhì)中的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，其濃度在0.10~10 μg/mL范圍內(nèi)，在植株、稻殼和糙米中的線性回歸方程分別為：=54 308-74743 (= 0.998 2)，=14 068?1 276.6 (= 0.999 9)，=33 599+28 278 (=0.996 4)。噠螨靈的最小檢出量為2.3×10-11g，該方法在水稻基質(zhì)中的最低檢出濃度為0.005 mg/kg。

2.2 方法的準(zhǔn)確度和精密度

噠螨靈分別在植株、糙米和稻殼空白樣品中添加回收實(shí)驗(yàn)(表1)。由表可知，對(duì)于植株、糙米和稻殼基質(zhì)的3個(gè)濃度添加5個(gè)平行樣品，噠螨靈在植株、糙米和稻殼中的添加回收率在80.13%~98.59%之間，變異系數(shù)在2.40%~8.40%之間，該方法的準(zhǔn)確度和精密度均符合NY/T788-2004《農(nóng)藥殘留實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)則》的殘留檢測(cè)分析要求。

表1 噠螨靈在水稻基質(zhì)中添加回收實(shí)驗(yàn)

2.3 噠螨靈在水稻基質(zhì)中的最終殘留

通過檢測(cè)2014年貴州、廣西和黑龍江三地噠螨靈在不同施藥劑量和不同采樣時(shí)期的最終殘留量，測(cè)定結(jié)果見表2。

圖2 噠螨靈在2014年水稻基質(zhì)中的最終殘留量(=3)

劑量g a.i/ha施藥次數(shù)采收間隔期/d殘留量/mg·kg-1 糙米稻殼植株 貴州廣西黑龍江貴州廣西黑龍江貴州廣西黑龍江 低劑量70.0710.0790.0540.6030.4470.3960.2350.1280.036 2140.0180.0200.0260.0500.0360.0210.0330.024<0.020 210.0170.0150.016<0.020<0.020<0.020<0.020<0.020<0.020 70.0350.1190.0620.1300.1380.9370.1600.0690.248 3140.0300.0380.0380.0240.0880.4750.087<0.0200.024 210.0240.0180.030<0.020<0.020<0.020<0.020<0.020<0.020 高劑量70.0260.1480.0940.5990.3150.8600.9100.9050.243 2140.0190.0670.0500.0330.0250.0380.0610.0590.044 210.0110.0460.045<0.020<0.0200.035<0.020<0.020<0.020 70.0430.2620.2110.1790.8960.4410.5200.6080.423 3140.0200.0770.0760.0310.0440.0730.0360.0920.035 210.0130.0350.041<0.020<0.020<0.020<0.020<0.020<0.020

由表可知，40%吡蚜酮?噠螨靈懸浮劑，用藥量120~180 g a.i/ha，施藥2~3次，距末次施藥7 d、14 d、21 d采樣。噠螨靈在水稻基質(zhì)中的殘留量隨著采樣時(shí)間的增加大體上呈下降趨勢(shì)。其中，在采收14 d，噠螨靈在貴州稻殼和糙米中的殘留量，和采收21 d，噠螨靈在(貴州、廣西和黑龍江)三地植株、稻殼和糙米中的殘留均低于歐盟規(guī)定的最大殘留限量0.05 mg/kg。

因此，40%吡蚜酮?噠螨靈懸浮劑，用藥量120~180 g a.i/ha，施藥2~3次，距最后一次施藥21 d采樣，采收的水稻樣品是安全的。

3 結(jié)束語(yǔ)

本文建立了一種氣相色譜法檢測(cè)水稻和土壤中噠螨靈的殘留分析方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該方法的添加回收率、準(zhǔn)確度和精密度均滿足NY/T788-2004《農(nóng)藥殘留實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)則》的要求。一年三地的最終殘留試驗(yàn)結(jié)果表明，40%吡蚜酮?噠螨靈懸浮劑，用藥量120~180 g a.i/ha，施藥2~3次，距最后一次施藥21 d采樣，噠螨靈在四種基質(zhì)中的最終殘留量均低于于歐盟規(guī)定的最大殘留限量0.05 mg/kg，采收的水稻樣品是安全的。本文研究噠螨靈在一年三地水稻中的最終殘留數(shù)據(jù)為噠螨靈在我國(guó)水稻基質(zhì)中殘留限量的制定和在水稻上的合理使用提供重要的科學(xué)依據(jù)。

[1] Hirata K, Kawamura Y, Kudo M, et al. Development of a New Acaricide, Pyridaben [J]. Journal of Pesticide Science, 1995, 20(2):177-179.

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[3] 張敏恒. 農(nóng)藥品種手冊(cè)精編[M]. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2013.

[4] 高飛. 朱砂葉螨Tetranychus cinnabarinus (Boisduval) 對(duì)噠螨靈的抗性汰選及生化機(jī)理研究[D]. 武漢: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué), 2006.

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Determination of Pyridaben Residues in Rice by Gas Chromatography

CHEN Yi-hui, MENG Xin-gang, PAN Si-zhu, TIAN Chun-ya, WANG De-piao, HU De-yu

(Research and Development Center of Fine Chemicals, Guizhou University, Guizhou Guiyang 550025, China）

An analytical method for determination of pyridaben residue in paddy by gas chromatography (GC-ECD) was established. The recovery of pyridaben in paddy plant, brown rice and rice husk was 80.13%~98.59%,and relative standard deviations were 2.40%~8.47% at the spiking levels of 0.005~5 mg/kg. The limit of detection (LOD) and the limit of quantitation (LOQ) were 2.3 × 10-11g and 0.005 mg/kg, respectively. The field experiment results showed that after the last application for 21 d, the final residues of pyridaben in paddy plant, brown rice and rice husk were0.020~0.022 mg/kg, 0.010~0.046 mg/kg and 0.020~0.035 mg/kg, respectively. The method for determination of pyridaben residues in paddy can meet the requirement of pesticide residue detection, and the field experiment residual data can provide important scientific basis for its reasonable use in paddy.

pyeidaben; paddy; residue; gas chromatography

O 657

A

1004-0935（2017）04-0414-03

貴州大學(xué)研究生創(chuàng)新基金(研理工2015053)

2017-03-01

陳亦慧（1991-），女，土家族，碩士研究生，貴州省貴陽(yáng)市人，研究方向：農(nóng)藥殘留分析。

胡德禹（1965-），女，教授，研究方向：農(nóng)藥殘留分析。