范振濤

（山東省博興縣畜牧獸醫(yī)局 山東 濱州 256500）

豬瘟（Classical swine fever，CSF）是由豬瘟病毒（Classical swine fever virus，CSFV）引起豬的一種高度接觸性、致死性傳染病，是嚴重危害我國養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展的主要疫病，也是多年來我國一直重點防疫的主要疫病[1]。豬瘟疫苗的免疫效果直接影響到豬瘟防疫工作的成敗，而抗體檢測是評價疫苗免疫效果最簡單、最有效的檢測方法[2]。本研究對3個商品化豬瘟抗體檢測試劑盒的優(yōu)缺點進行了比較與分析，旨在為不同實驗室選擇合適的檢測試劑盒提供參考與借鑒。

1 材料和方法

1.1 3種檢測試劑盒來源

豬瘟正向間接血凝（IHA）抗體檢測試劑盒為中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所產(chǎn)品；豬瘟病毒間接ELISA抗體檢測試劑盒為中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所產(chǎn)品；豬瘟病毒阻斷ELISA抗體檢測試劑盒為美國愛德士（IDEXX）公司產(chǎn)品。

1.2 抗原、試驗兔和血清來源

豬瘟活疫苗（兔源）國家參考品購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；2.5～3.0kg健康新西蘭白兔購自博興某養(yǎng)兔場；36份豬瘟疫苗免疫后豬血清樣品由筆者采集并保存。

1.3 檢測方法

1.3.1 中和試驗方法 先測定豬瘟活疫苗（兔源）對兔的最小感染量（MID），然后按照2015年版《中國獸藥典》中豬瘟病毒中和試驗方法[3]對67份豬血清樣品進行檢測。

1.3.2 3種檢測試劑盒 分別按照3種抗體檢測試劑盒使用說明書提供的操作方法與判定標準對67份豬血清樣品進行檢測。

1.4 符合率的計算

以中和試驗方法的檢測結(jié)果作為標準，分別計算3種抗體檢測試劑盒對中和試驗的符合率。

符合率=檢測結(jié)果相同樣品數(shù)/檢測樣品綜述×100%

2 結(jié)果與分析

2.1 總體檢測結(jié)果

如表1所示，67份豬瘟疫苗免疫血清樣品經(jīng)中和試驗、IHA、間接ELISA和阻斷ELISA檢測后，分別檢測出陽性樣品55份、48份、56份和59份，陽性率分別為 82.09%、71.64%、83.58%和88.06%，陽性率均大于我國農(nóng)業(yè)部要求的豬瘟群體免疫合格率≥70.0%的標準，所抽檢的豬群豬瘟疫苗免疫合格。

表1 4種檢測方法的檢測結(jié)果

2.2 3種檢測試劑盒與中和試驗的符合結(jié)果

如表2所示，IHA、間接ELISA、阻斷ELISA與中和試驗的總符合率分別為89.55%、92.53%、94.03%，符合率均較高。其中在陽性抗體的符合率方面，阻斷ELISA與中和試驗的陽性抗體符合率達100%，而在陰性抗體的符合率方面，IHA與中和試驗的陰性抗體符合率達100%。以IHA的符合率最低，敏感性最低，以阻斷ELISA的符合率最高，敏感性最強。

表2 3種檢測試劑盒與中和試驗的符合情況

3 討論

中和試驗是《中國獸藥典》中法定的豬瘟抗體陰性豬篩選方法，可以認為是豬瘟抗體檢測的“金標準”，其準確性無需置疑，但該方法需要用豬瘟活毒工作抗原和試驗兔進行檢測，檢測結(jié)果易受試驗兔個體差異、健康狀況和飼養(yǎng)環(huán)境等因素影響，且檢測周期長、工作量大及成本高。隨著現(xiàn)代分子生物學(xué)和免疫學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，各種豬瘟抗體檢測試劑盒不斷得到開發(fā)和推廣應(yīng)用，本研究中IHA、間接ELISA和阻斷ELISA 3種抗體檢測試劑盒與中和試驗的符合率均在89%以上，3種抗體檢測試劑盒均具有良好的準確性。IHA試劑盒檢測67份豬瘟疫苗免疫豬血清樣品的陽性率為71.64%，明顯低于中和試驗、間接ELISA、阻斷ELISA方法的陽性率，IHA方法采用全病毒作為抗原，受抗原制備過程與病毒純化等方面的限制，導(dǎo)致了IHA方法敏感性較低，同時該方法還存在血清樣品需經(jīng)過滅活處理，檢測結(jié)果肉眼判讀、誤差大等缺陷，但該方法操作簡便、檢測反應(yīng)時間短及無需特殊儀器設(shè)備，特別適合基層實驗室使用。ELISA采用基因工程重組蛋白作為抗原，其檢測的敏感性和特異性均大大提高，本研究中間接ELISA、阻斷ELISA試劑盒檢測67份豬瘟疫苗免疫豬血清樣品的陽性率分別為83.58%和88.06%，阻斷ELISA的敏感性較間接ELISA更高，且ELISA方法具有微量、高通量等優(yōu)點，特別適合臨床大批量樣品的檢測，但ELISA方法尤其是阻斷ELISA方法操作較復(fù)雜，操作人員需要具有一定的獸醫(yī)技術(shù)水平，且需要酶標儀等儀器設(shè)備，隨著我國基層獸醫(yī)實驗室的不斷建設(shè)與完善，ELISA檢測試劑盒將具有廣闊的發(fā)展空間和應(yīng)用前景。綜合來看，3種檢測試劑盒均具有各自的優(yōu)缺點，不同實驗室可根據(jù)自身試驗條件合理選擇，或選擇2種檢測試劑盒聯(lián)合使用，確保檢測結(jié)果的準確與可靠?！?/p>

[1] 祖立闖,李嬌,謝金文,等.豬瘟病毒實驗室檢測方法研究進展[J].養(yǎng)豬,2016(6)：117-118.

[2] 柳清.應(yīng)用抗體檢測對豬瘟免疫效果的評價研究[J].中國動物保健,2017,19(2)：83-84.

[3] 中國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典（2015年版）三部[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社,2015,105.