許宗斌

（青海省湟源縣畜牧獸醫(yī)站 西寧 812100）

羊痘（capripox，CP）是由羊痘病毒（capripox virus，CPV）引起羊的一種急性、熱性和高度接觸性傳染病[1]，山羊和綿羊均易感，以皮膚和黏膜發(fā)生痘疹、水皰、膿皰及結(jié)痂為主要特征，年齡越小病死率越高，可引起羔羊大面積死亡，并直接影響感染后康復(fù)羊群的毛皮質(zhì)量，每年都給全球養(yǎng)羊業(yè)和毛皮產(chǎn)業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失[2]。目前，該病在我國多呈散發(fā)性、地方性流行，嚴(yán)重制約著國內(nèi)養(yǎng)羊業(yè)和毛皮產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展，尤其近幾年來，隨著我國養(yǎng)羊業(yè)的規(guī)模化、集約化的快速發(fā)展，該病的發(fā)生與流行呈現(xiàn)增長趨勢[3]。2017年，青海省某藏羊養(yǎng)殖戶的藏羔羊發(fā)生了一起以體溫升高、呼吸困難和全身皮膚出現(xiàn)痘疹等典型病變?yōu)橹饕卣鞯囊卟?，通過臨床癥狀和病理變化觀察等臨床診斷以及PCR檢測等實驗室診斷最終確診為由羊痘病毒感染所致，采取了隔離飼養(yǎng)、疫苗免疫接種及環(huán)境消毒等針對性治療措施，疫情得到了控制，將經(jīng)濟損失降至了最低。

1 材料與方法

1.1 主要試劑

病毒基因組DNA提取試劑盒購自北京百泰克生物科技有限公司；Ex Taq酶、dNTP、DL 2000 DNA Marker購自寶生物工程（大連）有限公司。

1.2 臨床診斷

通過觀察臨床癥狀和病理變化做出臨床初步診斷。

1.3 實驗室PCR檢測

1.3.1 病毒基因組DNA的提取 采取病死羊水皰、痘疹等臨床組織病料加入3倍體積滅菌生理鹽水后充分搗碎、碾磨，12000r/min離心5min，取上清液按病毒基因組DNA提取試劑盒的操作步驟提取臨床病料樣品的病毒基因組DNA。

1.3.2 引物設(shè)計與合成 根據(jù)參考文獻(xiàn)[4]設(shè)計合成羊痘病毒1對特異性檢測引物，預(yù)擴增片段大小為972bp。

1.3.3 PCR擴增 以提取的臨床病料樣品病毒基因組DNA為模板，參照參考文獻(xiàn)[4]的中PCR反應(yīng)體系和PCR反應(yīng)條件進(jìn)行PCR擴增，PCR擴增結(jié)束后取擴增產(chǎn)物通過1%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測。

1.4 治療措施

根據(jù)診斷結(jié)果，采取隔離飼養(yǎng)、環(huán)境消毒和疫苗免疫接種等治療措施。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床診斷結(jié)果

2.1.1 臨床癥狀 發(fā)病羔羊體溫升高至41～42℃，呼吸困難，食欲減退，精神沉郁，眼、鼻流出黏性或膿性液體，發(fā)病2～4d后皮膚無毛或毛少處開始出現(xiàn)痘疹，逐漸形成丘疹，丘疹慢慢擴大為半球狀隆的結(jié)節(jié)，結(jié)節(jié)變成水皰，逐漸變成膿，干燥變成痂塊，病死率達(dá)25%左右。

2.1.2 病理變化 病理變化主要表現(xiàn)為氣管、支氣管及咽喉黏膜具有圓形丘疹，充血水腫、出血；肺臟具有大塊彌漫性的白色干酪樣結(jié)節(jié)；瘤胃、皺胃內(nèi)壁有大小不等的結(jié)節(jié)，糜爛、潰瘍。

2.2 實驗室PCR檢測結(jié)果

PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測顯示在位于972bp處具有特異性擴增條帶，與馬睿麟等[4]報道的大小相符，表明PCR檢測為陽性。

2.3 綜合診斷結(jié)果

結(jié)合臨床癥狀和病理變化觀察等臨床診斷以及PCR檢測等實驗室診斷，確診此次疫病由感染羊痘病毒所致。

2.4 治療措施

確診致病原為羊痘病毒后，采取了無害化處理、隔離飼養(yǎng)、環(huán)境消毒、注射高免血清、疫苗免疫接種及藥物治療等一系列措施，疫情得到了有效控制。

2.4.1 無害化處理 立即上報畜牧獸醫(yī)主管部門，對養(yǎng)殖場進(jìn)行了封鎖，對病死羊的尸體、糞便等污物全部進(jìn)行焚燒、深埋等無害化處理。

2.4.2 隔離飼養(yǎng) 對感染羊和健康羊群進(jìn)行隔離飼養(yǎng)，人員和器具均單獨使用。

2.4.3 環(huán)境消毒 對發(fā)病羊群接觸過的羊舍、飼養(yǎng)場地、器具和水槽等利用4%氫氧化鈉溶液進(jìn)行徹底消毒。

2.4.4 注射高免血清 對發(fā)病羊群肌肉注射羊痘病毒陽性血清，10mL/只。

2.4.5 疫苗免疫接種 對假定的健康羊群緊急接種羊痘弱毒疫苗，1.0mL/只。

2.4.6 藥物治療 為防止繼發(fā)感染，疫苗免疫后7d采用磺胺類藥物進(jìn)行藥物治療。

3 討論

因羊痘的臨床癥狀和病理變化與羊口蹄疫、羊口瘡病毒病等疫病均極其相似[5]，增加了臨床鑒別診斷的難度，根據(jù)臨床癥狀和病理變化等臨床診斷只能提供一個初步的疑似診斷結(jié)果，對該病的確診必須借助實驗室診斷技術(shù)。PCR檢測方法能夠檢測到病原體特定的核苷酸序列，具有極高的準(zhǔn)確性，且操作簡單、檢測快速，是當(dāng)前動物疫病診斷中常用的快速檢測技術(shù)。故本研究利用馬睿麟等[4]的PCR檢測方法對臨床病例進(jìn)行了確診，使本研究的綜合診斷結(jié)果更加可靠、準(zhǔn)確。

羊痘尚無特效的治療藥物，本病的發(fā)生與飼養(yǎng)場衛(wèi)生環(huán)境不良、飼養(yǎng)密度過大、通風(fēng)不良、羊舍陰暗潮濕及羊痘疫苗免疫接種不及時等有很大關(guān)系，建議采取以疫苗免疫接種和加強飼養(yǎng)管理為主的綜合性防控措施，盡量避免該病的發(fā)生。羊場一旦發(fā)生羊痘病毒感染，應(yīng)盡快確診，封鎖疫區(qū)，采取感染羊群注射高免血清，健康羊群緊急免疫接種疫苗等對癥療法，將經(jīng)濟損失降至最低。■

[1] 圖布新畢力格.羊痘的防控措施[J].中國畜牧獸醫(yī)文摘,2016,32(4)：123.

[2] 陳軼霞.羊痘病毒基因組及其功能研究概況[J].中國獸醫(yī)學(xué)報,2015,35(2)：340-344.

[3] 仁措吉.羊痘的流行病學(xué)特征及其診治[J].中國畜牧獸醫(yī)文摘,2015,31(8)：116.

[4] 馬睿麟,張立成,王謝忠.綿羊痘病毒PCR檢測方法的建立[J].畜牧與獸醫(yī),2012,44(8)：67-69.

[5] 張軍鋒,王乃俠.羊痘、羊口瘡及羊口蹄疫的鑒別診斷[J].畜牧獸醫(yī)雜志,2015,34(3)：155-156.