秦莎莎，余夢(mèng)黎，廖金明，徐愉林，鄭麗嫻，朱原，李蕾，姚暉，張繼平，韓彬

(1.廣東藥科大學(xué) 中藥學(xué)院，廣東 廣州 510006； 2.廣東醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院，廣東 湛江 524023； 3.南方醫(yī)科大學(xué) 中醫(yī)藥學(xué)院，廣東 廣州 510515； 4.南方醫(yī)科大學(xué) 附屬佛山醫(yī)院，廣東 佛山 528000)

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羥基紅花黃色素A與芍藥苷聯(lián)合用藥對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用

秦莎莎1，余夢(mèng)黎2，廖金明3，徐愉林2，鄭麗嫻3，朱原3，李蕾1，姚暉4，張繼平4，韓彬1

(1.廣東藥科大學(xué) 中藥學(xué)院，廣東 廣州 510006； 2.廣東醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院，廣東 湛江 524023； 3.南方醫(yī)科大學(xué) 中醫(yī)藥學(xué)院，廣東 廣州 510515； 4.南方醫(yī)科大學(xué) 附屬佛山醫(yī)院，廣東 佛山 528000)

目的 研究羥基紅花黃色素A(HSYA)與芍藥苷聯(lián)合用藥對(duì)急性局灶性腦缺血再灌注(I/R)損傷大鼠的協(xié)同保護(hù)作用，并探討其作用機(jī)制。方法 110只雄性SD大鼠，隨機(jī)分為6組：HSYA組(5.0 mg/kg)、芍藥苷組(5.0 mg/kg)、HSYA與芍藥苷聯(lián)合用藥組(合用組,各5.0 mg/kg)、銀杏內(nèi)酯組(5 mg/kg)、模型組和假手術(shù)組。采用改良線(xiàn)栓法復(fù)制大鼠大腦中動(dòng)脈栓塞(MCAO)再灌注模型。腦缺血1 h再灌注6 h后進(jìn)行神經(jīng)功能缺失評(píng)分及尾靜脈注射給藥；給藥7 d后進(jìn)行神經(jīng)功能缺失評(píng)分；氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法檢測(cè)腦梗死面積；免疫組化(IHC)法檢測(cè)磷酸化Akt1蛋白的表達(dá)量的變化情況。結(jié)果 與假手術(shù)組比較，模型組大鼠治療前評(píng)分明顯高于假手術(shù)組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，說(shuō)明造模成功；與模型組比較，銀杏內(nèi)酯組、合用組、芍藥苷組和HSYA組能不同程度地抑制大鼠體質(zhì)量下降(P<0.05，P<0.01)，改善腦缺血再灌注大鼠的神經(jīng)功能缺失癥狀(P<0.05，P<0.01)，降低皮質(zhì)區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的損傷程度，減小腦梗死面積(P<0.05，P<0.01)，促進(jìn)磷酸化Akt1蛋白的表達(dá)(P<0.01)；HSYA組、芍藥苷組、銀杏內(nèi)酯組磷酸化Akt1蛋白的表達(dá)較合用組低(P<0.01)。結(jié)論 HSYA與芍藥苷聯(lián)合用藥對(duì)腦缺血再灌注大鼠的腦損傷具有一定的協(xié)同保護(hù)作用，二者聯(lián)合用藥的作用優(yōu)于單獨(dú)用藥，可能與二者聯(lián)合用藥發(fā)揮活血化瘀與神經(jīng)保護(hù)作用有關(guān)。

腦缺血再灌注損傷；羥基紅花黃色素A；芍藥苷

腦卒中是全球第二大、中國(guó)第一大的致死性疾病，具有死亡率、發(fā)病率、致殘率和復(fù)發(fā)率高及并發(fā)癥多的特點(diǎn)。腦卒中分為缺血性和出血性?xún)深?lèi)，其中缺血性卒中約占80%。隨著中國(guó)人口老齡化的進(jìn)程，急性缺血性腦卒中不僅成為中國(guó)第一位死亡原因，且患病率呈上升趨勢(shì)及年輕化趨勢(shì)[1-2]。近年研究發(fā)現(xiàn)羥基紅花黃色素A(HSYA)與芍藥苷單獨(dú)應(yīng)用具有對(duì)抗腦缺血再灌注損傷的作用[3-6]，但未見(jiàn)二者聯(lián)合用藥用于預(yù)防和治療腦缺血再灌注損傷的報(bào)道。本研究通過(guò)改良線(xiàn)栓法復(fù)制局灶性腦缺血再灌注模型，觀察HSYA與芍藥苷聯(lián)合用藥對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)雄性SD大鼠120只，體質(zhì)量180～220 g，廣州中醫(yī)藥大學(xué)(大學(xué)城)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(粵)2013-0020。

1.2 藥品及試劑

羥基紅花黃色素A(Hydroxy safflower yellow A，HSYA)(質(zhì)量分?jǐn)?shù)89.5%，成都康邦生物科技有限公司，批號(hào)160301)；芍藥苷(質(zhì)量分?jǐn)?shù)98%，南京澤朗生物科技有限公司，批號(hào)20150723)；銀杏內(nèi)酯注射液(成都百裕科技制藥有限公司，批號(hào)08150404)；Akt(Phospho-Ser473)抗體(Abcam公司，批號(hào)GR240003-Ⅱ)；4%(φ)多聚甲醛(廣州昂飛生物科技有限公司，批號(hào)153814)；TTC試劑(Sigma公司，批號(hào)206-07-6)。

1.3 主要儀器

高速低溫離心機(jī)(美國(guó) Thermo 公司)；Elx800TM酶標(biāo)儀(美國(guó)伯騰儀器有限公司)；電子分析天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)。

1.4 模型構(gòu)建與分組、給藥

雄性SD大鼠120只，隨機(jī)分為6組：HSYA組(5.0 mg/kg)、芍藥苷組(5.0 mg/kg)、HSYA與芍藥苷聯(lián)合用藥組(各5.0 mg/kg)、銀杏內(nèi)酯組(5 mg/kg)、模型組和假手術(shù)組(假手術(shù)組10只，模型組20只，其余每組20只)。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，禁食不禁水12 h，參照文獻(xiàn)[7]方法沿頸部正中線(xiàn)縱向切口，分離右側(cè)頸總動(dòng)脈(CCA)、頸外動(dòng)脈(ECA)、頸內(nèi)動(dòng)脈(ICA)。使線(xiàn)栓通過(guò)CCA分叉部進(jìn)入ICA，結(jié)扎ICA切口和栓線(xiàn)，1 h后抽出栓線(xiàn)，再灌注6 h，造成大腦中動(dòng)脈栓塞(MCAO)動(dòng)物模型。假手術(shù)組暴露右側(cè)頸部血管，不進(jìn)行栓塞處理，其余同手術(shù)組。給藥前觀察大鼠體征，對(duì)大鼠神經(jīng)功能缺失進(jìn)行評(píng)分。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：無(wú)神經(jīng)病學(xué)征象為0分；提尾時(shí)左前肢不能完全伸直為1分；向左側(cè)轉(zhuǎn)圈為2分；向左側(cè)跌倒為3分；無(wú)自發(fā)活動(dòng)及意識(shí)障礙者為4分。造模成功的標(biāo)志是評(píng)分為1～4分的大鼠，不成功者予以剔除。腦缺血再灌注6 h后尾靜脈注射給藥，每天1次，連續(xù)給藥7 d，假手術(shù)組和模型組給予等量注射用生理鹽水。取材前后進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分。

1.5 大鼠腦梗死面積測(cè)定

末次給藥2 h后，再次進(jìn)行神經(jīng)功能缺失評(píng)分后麻醉大鼠，頸椎脫臼處死大鼠，快速開(kāi)顱取腦，去掉嗅球、低位腦干和小腦，-20 ℃冰箱中冷凍15 min后取出，參照文獻(xiàn)[8]方法進(jìn)行TTC染色。經(jīng)染色后非缺血區(qū)為紅色，缺血區(qū)為白色。用Image-Pro Plus 6.0圖像分析軟件測(cè)量紅、白區(qū)域面積，計(jì)算梗死面積比。梗死面積比=Σ梗死面積/Σ全腦片面積。

1.6 大鼠皮質(zhì)區(qū)病理學(xué)觀察

參照文獻(xiàn)[9]的方法進(jìn)行大鼠腦組織HE染色，光鏡下觀察皮質(zhì)區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。

1.7 大鼠腦梗死區(qū)p-Akt表達(dá)的測(cè)定

大鼠頸椎脫臼處死后，開(kāi)顱取腦，制作石蠟塊及切片，然后嚴(yán)格按照試劑盒的步驟操作，進(jìn)行免疫組化的制片。應(yīng)用Image-Pro Plus6.0 軟件選取相同的棕黃色作為判斷所有照片陽(yáng)性的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)每張照片進(jìn)行分析得出每張照片陽(yáng)性的吸光度值(A)。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 大鼠的一般狀況

假手術(shù)組大鼠毛發(fā)有光澤，飲食飲水正常，精神狀態(tài)佳，手術(shù)24 h后體質(zhì)量持續(xù)上升。模型組大鼠毛發(fā)無(wú)光澤，飲食飲水減少，精神萎靡，手術(shù)后大部分大鼠的體質(zhì)量持續(xù)降低，嚴(yán)重者左側(cè)前肢殘廢，左眼變瞎。各給藥組大鼠的表現(xiàn)介于假手術(shù)大鼠與模型組之間。合用組大鼠的外在表現(xiàn)較HSYA組和芍藥苷組大鼠好。

2.2 HSYA與芍藥苷聯(lián)合用藥對(duì)MCAO再灌注大鼠治療24 h體質(zhì)量變化的影響

與假手術(shù)組比較，模型組大鼠術(shù)后24 h內(nèi)體質(zhì)量明顯減輕，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與模型組比較，銀杏內(nèi)酯組、合用組、芍藥苷組、HSYA組大鼠術(shù)后24 h內(nèi)體質(zhì)量明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)，說(shuō)明各給藥組可以不同程度地抑制局灶性腦缺血再灌注大鼠體質(zhì)量下降；與合用組比較，芍藥苷組、HSYA組大鼠術(shù)后體質(zhì)量明顯減輕，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)，說(shuō)明HSYA與芍藥苷聯(lián)合用藥效果較二者單獨(dú)給藥效果好。見(jiàn)表1。

表1 HSYA與芍藥苷聯(lián)合用藥對(duì)大鼠治療24 h體質(zhì)量變化的影響

組別n治療24h體質(zhì)量變化率/%假手術(shù)組10-3.94±1.57模型組15-16.81±2.73##銀杏內(nèi)酯組12-13.11±2.84**合用組11-11.99±2.40**芍藥苷組13-14.67±1.42*&&HSYA組12-14.31±1.98**&

與假手術(shù)組比較：##P<0.01； 與模型組比較:*P<0.05,**P<0.01； 與合用組比較:&P<0.05，&&P<0.01。

2.3 HSYA與芍藥苷聯(lián)合用藥對(duì)MCAO再灌注大鼠治療前后神經(jīng)功能缺失評(píng)分的影響

與假手術(shù)組比較，模型組大鼠治療前評(píng)分明顯高于假手術(shù)組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，說(shuō)明造模成功。與模型組比較，HSYA組、芍藥苷組、合用組、銀杏內(nèi)酯組大鼠治療前后神經(jīng)功能缺失評(píng)分變化均有顯著變化，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，說(shuō)明各給藥組具有不同程度的改善局灶性腦缺血再灌注大鼠神經(jīng)功能缺失的作用。見(jiàn)表2。

表2 HSYA與芍藥苷聯(lián)合用藥對(duì)大鼠神經(jīng)功能缺失評(píng)分的影響

組別n治療前評(píng)分治療后評(píng)分治療前后評(píng)分變化假手術(shù)組10000模型組101.80±0.63##1.30±0.48##0.30±0.82銀杏內(nèi)酯組82.13±0.990.75±0.47*1.25±0.89**合用組112.00±0.770.46±0.69**1.73±0.65**芍藥苷組92.00±0.500.78±0.44*1.22±0.44**HSYA組92.11±0.930.78±0.67*1.44±0.53**

與假手術(shù)組比較：##P<0.01； 與模型組比較:*P<0.05，**P<0.01。

2.4 HSYA與芍藥苷聯(lián)合用藥對(duì)MCAO再灌注大鼠腦梗死面積的影響

與假手術(shù)組比較，模型組的腦梗死面積顯著增大，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，說(shuō)明造模成功；與模型組比較，銀杏內(nèi)酯組、合用組、芍藥苷組、HSYA組的腦梗死面積均顯著減小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)，見(jiàn)表3、圖1。

表3 HSYA與芍藥苷聯(lián)合用藥對(duì)大鼠腦梗死面積的影響

組別n腦梗死面積比/%假手術(shù)組100模型組1043.46±4.56##銀杏內(nèi)酯組826.35±9.27**合用組1124.12±9.22**芍藥苷組929.45±2.60*HSYA組926.05±10.69**

與假手術(shù)組比較：##P<0.01； 與模型組比較：*P<0.05，**P<0.01。

假手術(shù)組模型組銀杏內(nèi)酯組合用組芍藥苷組HSYA組

圖1 各組大鼠腦缺血再灌注損傷腦組織TTC染色

Figure 1 TTC staining of brain tissue after cerebral ischemia-reperfusion injury in each group

2.5 HSYA與芍藥苷聯(lián)合用藥對(duì)MCAO再灌注大鼠腦組織皮質(zhì)區(qū)病理學(xué)的影響

假手術(shù)組腦組織無(wú)缺血表現(xiàn)，右側(cè)腦結(jié)構(gòu)完整，皮質(zhì)區(qū)結(jié)構(gòu)清晰完整，未見(jiàn)明顯損傷及病變；模型組皮質(zhì)區(qū)大量液化性壞死灶，結(jié)構(gòu)不清晰，神經(jīng)細(xì)胞大量死亡，未見(jiàn)正常神經(jīng)元細(xì)胞；與模型組比較，銀杏內(nèi)酯組、合用組、芍藥苷組和HSYA組皮質(zhì)區(qū)液化性壞死灶較小，壞死神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)量相對(duì)較少；與合用組比較，芍藥苷組和HSYA組液化性壞死灶較大，壞死神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)量相對(duì)較多。見(jiàn)圖2。

2.6 HSYA與芍藥苷聯(lián)合用藥對(duì)MCAO再灌注大鼠腦梗死區(qū)p-Akt(Akt1)表達(dá)的影響

與假手術(shù)組比較，模型組大鼠腦梗死區(qū)p-Akt表達(dá)顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與模型組比較，HSYA組、芍藥苷組、合用組、銀杏內(nèi)酯組大鼠腦梗死區(qū)p-Akt表達(dá)顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與合用組比較，HSYA組、芍藥苷組、銀杏內(nèi)酯組大鼠腦梗死區(qū)p-Akt表達(dá)顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)表4，圖3。

A.假手術(shù)組; B.模型組; C.銀杏內(nèi)酯組; D.合用組; E.芍藥苷組; F.HSYA組。

圖2 各組大鼠海馬皮質(zhì)區(qū)神經(jīng)細(xì)胞HE染色(100×)

Figure 2 HE staining of neurons in hippocampal cortex of each group of rats

表4 HSYA與芍藥苷聯(lián)合用藥對(duì)大鼠腦梗死區(qū)p-Akt1表達(dá)的影響

組別nA假手術(shù)組60.023±0.0013模型組70.040±0.0014##銀杏內(nèi)酯組70.076±0.0030**&&合用組80.104±0.0022**芍藥苷組70.069±0.0019**&&HSYA組70.064±0.0039**&&

與假手術(shù)組比較：##P<0.01； 與模型組比較：**P<0.01； 與合用組比較：&&P<0.01。

A.假手術(shù)組; B.模型組; C.銀杏內(nèi)酯組; D.合用組; E.芍藥苷組; F.HSYA組。

圖3 各組大鼠腦梗死區(qū)免疫組化染色(100×)

Figure 3 IHC staining of neurons in hippocampal cortex of each group of rats

3 討論

腦組織缺血一定時(shí)間后再恢復(fù)血液灌注，腦組織的損傷反而會(huì)進(jìn)一步的加重，這種損傷即是腦缺血再灌注損傷。腦缺血再灌注損傷在腦血管病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起著重要作用，因此保護(hù)腦缺血再灌注損傷是治療腦缺血成功的關(guān)鍵。腦缺血再灌注損傷發(fā)生后，從損傷機(jī)制上看臨床上改善損傷的藥物主要為抗血小板聚集、神經(jīng)保護(hù)劑、抗氧化等藥物[10-11]。腦缺血疾病主要由血栓形成影響，而缺血后炎癥反應(yīng)可導(dǎo)致神經(jīng)功能缺失，因此利用抗血小板藥物抑制血小板激活,不僅可以預(yù)防血栓的形成還可以減輕由血小板激活誘發(fā)的炎癥反應(yīng)[12-13]。

有學(xué)者[14]提出“以組分配伍來(lái)研制現(xiàn)代中藥”的新型模式后，中藥組分配伍不僅受到中醫(yī)藥學(xué)界的關(guān)注而且已成為目前方劑配伍研究的熱點(diǎn)。中藥組分配伍是對(duì)應(yīng)用較為廣泛、療效顯著的中藥或方劑進(jìn)行深入的研究，在藥效成分已知、作用機(jī)制比較明確的前提下，選取中藥的有效部位或有效成分，運(yùn)用現(xiàn)代藥理技術(shù)對(duì)配伍組分進(jìn)行優(yōu)化篩選，最終得到具有最佳治療效果的組成及配比[15]。HSYA與芍藥苷對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用，但作用機(jī)制不同。芍藥苷是赤芍的主要有效單體成分，研究證明其具有抗自由基損傷、抗神經(jīng)毒性、抗血小板聚集、改善微循環(huán)、抗氧化及抗驚厥等作用，國(guó)內(nèi)外的進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)其具有神經(jīng)保護(hù)作用[16]。羥基紅花黃色素A( HSYA) 是紅花的主要有效單體成分，其主要作用是抗血小板聚集(活血化瘀)[17]。

PI3K/Akt信號(hào)通路參與神經(jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)元及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的生存、分化，PI3K/Akt的激活對(duì)腦缺血再灌注損傷具有神經(jīng)保護(hù)作用[18-19]。Akt是PI3K下游主要信號(hào)分子及PI3K信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中重要的靶激酶，是一種絲氨酸(Ser473)/蘇氨酸(Thr308)蛋白激酶[18]，是調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)及抗凋亡的重要分子。Akt1、Akt2及Akt3是Akt的亞型，其作用分別是Akt1促進(jìn)細(xì)胞的增殖、Akt2參與胰島素調(diào)節(jié)代謝的過(guò)程、Akt3對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)及分化起著重要的調(diào)節(jié)作用[19]。在大腦中Akt1、Akt3的表達(dá)豐富，在心臟及棕色脂肪組織中Akt2表達(dá)較大腦中豐富，因此在大腦中Akt1、Akt3的功能比Akt2更重要[20]。激活的Akt能夠向細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)，活化的Akt通過(guò)磷酸化作用激活或抑制下游靶蛋白，進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞的凋亡、增殖、分化、遷移等過(guò)程。

本研究發(fā)現(xiàn)，給藥7 d后各給藥組大鼠的腦梗死面積較模型組小，治療前后神經(jīng)功能缺失評(píng)分變化與模型組相比差異顯著，皮質(zhì)區(qū)的病理變化情況與模型組相比損傷較??；腦缺血再灌注模型復(fù)制成功后模型組大鼠24 h內(nèi)體質(zhì)量明顯下降，這與文獻(xiàn)[21]報(bào)道一致，各給藥組與模型組相比24 h內(nèi)下降較少，給藥2～3 d后體質(zhì)量開(kāi)始增加。腦梗死面積、神經(jīng)功能缺失評(píng)分和造模后體質(zhì)量變化情況可以共同作為評(píng)判腦缺血造模成功的標(biāo)準(zhǔn)及藥物預(yù)防及治療的效果；PI3K/Akt通路的激活對(duì)腦缺血再灌注損傷具有重要的保護(hù)作用，給藥7 d后各給藥組大鼠腦梗死區(qū)磷酸化Akt1的表達(dá)量與模型組相比差異顯著，這與文獻(xiàn)[ 6,16 ]報(bào)道中HSYA、芍藥苷對(duì)腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用一致，合用組大鼠腦梗死區(qū)磷酸化Akt1的表達(dá)量顯著高于HSYA組、芍藥苷組及銀杏內(nèi)酯組，表明HSYA與芍藥苷聯(lián)合用藥可以上調(diào)腦缺血再灌注損傷大鼠腦梗死區(qū)磷酸化Akt1的表達(dá)，合用效果較單獨(dú)用藥效果好。

本研究結(jié)果提示，HSYA與芍藥苷聯(lián)合用藥對(duì)腦缺血再灌注的損傷具有協(xié)同保護(hù)作用，這可能與二者聯(lián)合用藥發(fā)揮活血化瘀與神經(jīng)保護(hù)的作用有關(guān)。

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(責(zé)任編輯：幸建華)

Synergistic protective effect of hydroxy safflower yellow A and paeoniflorin on cerebral ischemia reperfusion injury in rats

QIN Shasha1,YU Mengli2,LIAO Jinming3,XU Yulin2,ZHENG Lixian3,ZHU Yuan3,LI Lei1,YAO Hui4,ZHANG Jiping4,HAN Bin1

(1.SchoolofTraditionalChineseMedicine,GuangdongPharmaceuticalUniversity,Guangzhou510006,China; 2.SchoolofPharmacy,GuangdongMedicalUniversity,Zhanjiang524023,China; 3.CollegeofTraditionalChineseMedicine,SouthernMedicalUniversity,Guangzhou510515,China; 4.TheAffiliatedFoshanHospitalofSouthernMedicalUniversity,Foshan528000,China)

Objective To study the synergistic protection and mechanism of hydroxy safflower yellow A(HSYA) and paeoniflorin in acute focal cerebral ischemia reperfusion injury in rats. Methods 110 male SD rats were randomly divided into six groups,including HSYA group(5.0 mg/kg),paeoniflorin group (5.0 mg/kg),HSYA combined with paeoniflorin group (5.0 mg/kg),gingko lactone group(5.0 mg/kg),the model group and the sham group. The model of rat middle cerebral artery occlusion(MCAO) was replicated by modified thread embolism method. Nerve function loss was scored and drugs were administrated by intravenous injection after 1 h cerebral ischemia and 6 h reperfusion. Neurological deficit was revalued after 7 day treatment. The area of cerebral infarction was detected by triphenyl tetrazolium chloride(TTC) staining. The expression of phosphorylated Akt1 protein was identified by immunohistochemistry(IHC). Results Compared with the sham group,the scores of the pre-treatment rats in the operation group were significantly higher than those in the sham-operation group(P<0.01),indicating that the model was successful. Compared with the model group,the loss of body weight,neurological deficits,cortical cell damage and cerebral infarction area were all attenuated,but the expression of phosphorylated Akt1 was increased in four drug-treated groups(P<0.05 orP<0.01). Meanwhile,compared with the combination of HSYA and paeoniflorin group,the expression of phosphorylated Akt1 was lower in other three groups(P<0.01). Conclusion HSYA combined with paeoniflorin displays a synergistic protection against cerebral ischemia and reperfusion injury,which is better than single drug treatment.

cerebral ischemia-reperfusion injury; HSYA; paeoniflorin

2016-09-01

廣東省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(S2013010012284)；廣東省中醫(yī)藥局課題(20152074)；佛山市醫(yī)學(xué)重點(diǎn)專(zhuān)科培育項(xiàng)目(Fspy2-2015008)

秦莎莎(1989—)，女， 2014級(jí)碩士研究生，Email:1696505488@qq.com；通信作者:張繼平(1964—)，男，研究員，主要從事中藥復(fù)方藥理研究，Email：fszjping@163.com;韓彬(1964—)，男，教授，主要從事方劑配伍及代謝性疾病研究，Email：hblz99@21cn.com。

時(shí)間：2016-11-29 11:10

http://www.cnki.net/kcms/detail/44.1413.R.20161129.1110.008.html

R965

A

1006-8783(2016)06-0747-05

10.16809/j.cnki.1006-8783.2016090101