張素欣，李 丹，陳 中，張雨溫*，張晉弘，許彥枝

(1.河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院口腔科，河北 石家莊 050011；2.河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院耳鼻喉科，河北 石家莊 050031；3.河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院口腔科，河北 石家莊 050031)

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·論 著·

復(fù)發(fā)性口腔潰瘍患者唾液中TNF-α及IL-6含量及臨床意義

張素欣1，李 丹2，陳 中1，張雨溫1*，張晉弘3，許彥枝1

(1.河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院口腔科，河北 石家莊 050011；2.河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院耳鼻喉科，河北 石家莊 050031；3.河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院口腔科，河北 石家莊 050031)

目的探討復(fù)發(fā)性口腔潰瘍(recurrent aphthous ulceration，RAU)患者唾液中腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)及白細(xì)胞介素6 (interleukin-6， IL-6)含量變化及臨床意義。方法選取RAU患者30例,其中潰瘍期組18例，間歇期組12例； 30例健康志愿者為正常對照組。采用酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測3組唾液中的TNF-α及IL-6含量。結(jié)果3組TNF-α含量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，潰瘍期組和間歇期組高于對照組，而間歇期組高于潰瘍期組(P<0.05)。3組IL-6差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。RAU患者唾液中TNF-α與IL-6含量變化無相關(guān)性(r=-0.090，P=0.638)。結(jié)論唾液中TNF-α含量升高可能是RAU的主要發(fā)病因素之一。

口腔潰瘍；唾液；白細(xì)胞介素6； 腫瘤壞死因子α

復(fù)發(fā)性口腔潰瘍(recurrent aphthous ulceration，RAU)是一種常見的口腔黏膜病，多發(fā)生于角化差的黏膜上，以表淺的、疼痛的、復(fù)發(fā)性、有自愈性的潰瘍?yōu)樘攸c(diǎn)，發(fā)病率為20%～50%，其中70%～87%的患者為輕型阿弗他潰瘍，即口腔黏膜上長有1～5個(gè)直徑在3～10 mm之間的散在潰瘍，潰瘍發(fā)作時(shí)沒有特殊的全身癥狀，但局部明顯的反復(fù)發(fā)作的疼痛，嚴(yán)重影響著患者的飲食、發(fā)音、吞咽及情緒[1]。雖然學(xué)者們在不斷地進(jìn)行研究，但RAU的發(fā)病機(jī)制仍然不甚明了，臨床上為減輕患者痛苦往往依賴于激素類藥物[2]。從已知的RAU發(fā)展過程來看，它的產(chǎn)生可能是外源性或內(nèi)源性抗原刺激角質(zhì)形成細(xì)胞，分泌T細(xì)胞活化因子，進(jìn)而破壞口腔上皮并使其裂解的結(jié)果,但究竟是哪些細(xì)胞因子在RAU的發(fā)病過程中起著決定性的作用，又是什么原因?qū)е铝诉@些細(xì)胞因子的改變，目前尚無定論。本研究測定RAU患者唾液中腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)及白細(xì)胞介素6 (interleukin-6， IL-6)的含量，探討RAU的發(fā)病機(jī)制，旨在為臨床治療提供思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年4—10月河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院口腔門診就診的RAU患者30例，其中潰瘍期組18例，間歇期組12例。潰瘍期組男性7例，女性11例，年齡10～35歲，平均(23.5±5.8)歲；間歇期組男性5例，女性7例，年齡18～32歲，平均(24.2±4.1)歲。同時(shí)選取30例健康志愿者為正常對照組，男性10例，女性20例，年齡19～33歲，平均(23.3±3.2)歲。納入標(biāo)準(zhǔn): 所有患者均為在過去1年內(nèi)每月至少發(fā)病1次，發(fā)作時(shí)潰瘍有“紅、黃、凹、痛”特征，無系統(tǒng)性疾病或炎癥性疾病，無其他口腔黏膜病，無牙周病，無頭頸部放療史，近1個(gè)月內(nèi)未服用過任何藥物。受試者均無吸煙史。

本研究獲得醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)和受試者知情同意。

1.2 試劑及儀器 人TNF-α試劑盒、人IL-6試劑盒(美國RD公司)，ELX-800酶標(biāo)儀(美國寶特公司)。

1.3 方法

1.3.1 樣本采集 在上午8：00～11：00采集受試者非刺激性唾液3 mL，3 000 r/min，離心30 min后取上清，-80 ℃保存。

1.3.2 酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測唾液中TNF-α及IL-6含量 所有操作步驟按美國RD公司提供的人TNF-α試劑盒、人IL-6試劑盒說明書進(jìn)行。采用酶標(biāo)儀在450 nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人TNF-α及 IL-6的濃度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)量資料比較分別采用單因素方差分析和SNK-q檢驗(yàn)；相關(guān)性采用Pearson直線相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

3組TNF-α的含量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，潰瘍期組和間歇期組高于對照組，而間歇期組高于潰瘍期組(P<0.05)；3組IL-6含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

Pearson直線相關(guān)分析結(jié)果顯示，RAU患者唾液中TNF-α與IL-6含量變化無相關(guān)性(r=-0.090，P=0.638)。

表1 3組唾液中 TNF-α和IL-6含量比較

組別例數(shù)TNF-αIL-6潰瘍期組1830.15±32.03*#12.77±17.31間歇期組1255.96±33.99*8.65±6.60對照組 309.34±6.369.53±6.95F17.5940.654P0.0000.524

*P<0.05與對照組比較 #P<0.05與間歇期組比較(SNK-q檢驗(yàn))

3 討 論

RAU是一種常見的口腔黏膜病損，特點(diǎn)是無明顯誘因地反復(fù)出現(xiàn)潰瘍性病變，且與身體其他部位潰瘍病或潛在性系統(tǒng)疾病無關(guān)[3]。關(guān)于RAU復(fù)雜的發(fā)病機(jī)制，學(xué)者們之間存有爭論，討論最多的是不同的誘發(fā)因素，如遺傳、免疫、過敏、微生物、消化、內(nèi)分泌、情感或外傷性因素等[4-6]，但這些誘發(fā)因素致病的明確發(fā)病機(jī)制卻缺乏證據(jù)。

TNF-α是由單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞及人腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子，是一種在惡病質(zhì)患者體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的促炎細(xì)胞因子，與動物和人類腫瘤發(fā)生的出血性壞死有關(guān)[7]。關(guān)于TNF-α與RAU的關(guān)系，早期報(bào)道TNF-α很難在RAU患者的血清中檢測到，后來發(fā)現(xiàn)急性期RAU患者外周血白細(xì)胞TNF-α分泌量顯著高于健康人，在潰瘍的組織切片中也已探測到高水平TNF-α的表達(dá)。本研究發(fā)現(xiàn)，潰瘍期RAU患者和間歇期RAU患者唾液中TNF-α水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示TNF-α可能是RAU的發(fā)病因素之一，分析原因如下。①RAU患者口腔黏膜上皮細(xì)胞中TNF-α免疫活性減弱：因?yàn)檎T導(dǎo)TNF-α產(chǎn)生的因素有內(nèi)毒素、病毒、免疫復(fù)合物、神經(jīng)肽P物質(zhì)、IL-1等?？焖俜置诩懊庖哒T導(dǎo)性TNF-α主要來源于肥大細(xì)胞與嗜堿性粒細(xì)胞。TNF-α通過內(nèi)分泌、旁分泌和自分泌發(fā)揮生物學(xué)作用，但TNF-α介導(dǎo)的組織器官病理生理效應(yīng)可能主要取決于特定組織的旁分泌和或自分泌作用。研究證實(shí)，TNF-α與許多自身免疫和炎癥疾病有關(guān)，包括系統(tǒng)性紅斑狼瘡、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病等[8-9]。Sun等[10]認(rèn)為TNF-α(rs1800629和rs1800630)基因型分布的不同是RAU產(chǎn)生的敏感因素。②細(xì)胞黏附分子引發(fā)的細(xì)胞不良反應(yīng)，促使唾液中TNF-α含量升高：以往的研究表明，潰瘍的始動因素是未知抗原刺激黏膜角質(zhì)形成細(xì)胞，釋放細(xì)胞因子和白介素，淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和郎格漢斯細(xì)胞發(fā)生遷移，導(dǎo)致血管細(xì)胞黏附分子1和細(xì)胞黏附分子1過表達(dá)，招募淋巴細(xì)胞聚集，造成上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞浸潤。有些細(xì)胞因子可以刺激主要組織相容性抗原在上皮基底細(xì)胞層過表達(dá)，這些細(xì)胞被T淋巴細(xì)胞識別并引發(fā)細(xì)胞毒性反應(yīng)，上皮細(xì)胞凋亡[11]，激活細(xì)胞介導(dǎo)免疫，TNF-α等炎癥性細(xì)胞因子釋放，最終可能通過NF-κB通路導(dǎo)致口腔黏膜上皮完整性遭到破壞，黏膜出現(xiàn)壞死和潰瘍[12]。③抑制TNF-α分泌水平，可以在一定程度上控制RAU的病情進(jìn)展：如沙利度胺、己酮可可堿、左旋咪唑、前列腺素E[13]可以有效地治療RAU和其潰瘍性疾病如白塞病。但是這些藥物都有嚴(yán)重的不良反應(yīng)，不能廣泛用于臨床，而且目前沒有哪種單一的治療方式是有效的[14]，需要針對患者的個(gè)體差異進(jìn)行個(gè)性化治療，故監(jiān)測RAU患者的TNF-α水平變化，找到特異而低毒的TNF-α抑制劑，進(jìn)行精準(zhǔn)性干預(yù)，是治療RAU亟待解決的問題。

本研究還發(fā)現(xiàn)，與RAU潰瘍期患者相比，RAU間歇期患者唾液TNF-α水平更高。提示與在RAU潰瘍期上皮細(xì)胞裂解和細(xì)胞毒性中的作用相比，TNF-α在愈合階段中的作用更重要，原因可能是細(xì)胞介導(dǎo)免疫的異常激活，造成黏膜自我保護(hù)和抑制能力的平衡被打破，從而使口腔黏膜抵抗病原微生物的能力下降而發(fā)病，TNF-α等細(xì)胞因子可以通過下調(diào)過度的免疫反應(yīng)而抑制炎癥的發(fā)生發(fā)展，且促進(jìn)上皮損傷后修復(fù)，從而使?jié)冄装Y局限，但是因?yàn)闄C(jī)體調(diào)節(jié)的復(fù)雜性，細(xì)胞因子在RAU免疫反應(yīng)中的作用機(jī)制仍在探索中[14]。IL-6是一種由巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞等多種細(xì)胞產(chǎn)生的淋巴因子，能使B細(xì)胞前體成為產(chǎn)生抗體的細(xì)胞；與集落刺激因子協(xié)同，能促進(jìn)原始骨髓源細(xì)胞的生長和分化，增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞的裂解功能。IL-6在免疫應(yīng)答及炎癥反應(yīng)中均起著重要作用，它可以通過細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)影響宿主環(huán)境進(jìn)而作用于腫瘤細(xì)胞，對腫瘤細(xì)胞有抑制和促進(jìn)的雙重作用[15]。本研究檢測出RAU潰瘍期和間歇期患者唾液中IL-6水平與健康人差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示在RAU的發(fā)病過程中，唾液IL-6水平的改變與該病的發(fā)生發(fā)展關(guān)系不密切，出現(xiàn)這種結(jié)果的原因可能是：①IL-6是一種炎性因子, 具有促炎和抗炎的雙重作用；②RAU致病抗原具有多樣性，不同抗原刺激產(chǎn)生不同的細(xì)胞因子；③本研究樣本量小，有待于增加樣本量來進(jìn)一步證實(shí)RAU患者唾液中IL-6水平與健康人的差異；④本研究檢測的IL-6來源于唾液，非血液和組織，樣本來源不同，得出的結(jié)論會存在分歧。Karakus等[5]認(rèn)為在RAU中IL-6水平發(fā)生變化的原因是IL-6 C-174C基因的多態(tài)性，這種基因多態(tài)性的改變決定著IL-6含量的變化。

有報(bào)道認(rèn)為，TNF-α與IL-6等細(xì)胞因子間可能會有協(xié)同作用，TNF-α的增加可引起IL-6等細(xì)胞因子發(fā)生數(shù)量與功能上的變化，從而使細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的平衡受到破壞，機(jī)體產(chǎn)生病理改變，導(dǎo)致潰瘍形成或愈合。但本研究直線相關(guān)分析的結(jié)果并不支持在RAU發(fā)病過程中，TNF-α和IL-6之間有協(xié)同作用的假說，這一點(diǎn)可能與上述IL-6的基因多態(tài)性有關(guān)。

總之，唾液TNF-α的升高是RAU的發(fā)病過程中一個(gè)重要環(huán)節(jié)，可以針對這一點(diǎn)研發(fā)新的低毒有效藥物，減少RAU的復(fù)發(fā)率。唾液IL-6在RAU發(fā)病過程中有升高，具體作用還有待于進(jìn)一步證實(shí)。

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(本文編輯：劉斯靜)

Content and clinical significance of interleukin-6 and tumor necrosis factor-α of saliva in patients with recurrent aphthous ulceration

ZHANG Su-xin1, LI Dan2, CHEN Zhong1, ZHANG Yu-wen1*, ZHANG Jin-hong2, XU Yan-zhi1*

(1.Department of Stomatology, the Fourth Hospital of Hebei Medical University, Shijiazhuang 050011, China； 2.Department of Stomatology, the First Hospital of Hebei Medical University, Shijiazhuang 050031, China; 3.Department of Stomatology, the First Hospital of Hebei Medical Unniversity, Shijiazhuang 050031, China)

Objective To evaluate salivary interleukin(IL)-6 and tumor necrosis factor(TNF)-α of patients with recurrent aphthous ulceration(RAU). Methods A total of 30 patients with RAU were selected as the research subjects, including 18 cases of ulcer and 12 cases of intermittent period. Thrity healthy volunteers were used as normal control. TNF-α and IL-6 levels were determined by using enzyme-linked immunosorbent assay. Results The content difference of TNF-α in the 3 groups was statistically significant, the ulcer phase and the interval group were higher than those in the control group, while the interval group was higher than that of the ulcer group, the difference was statistically significant(P<0.05) . In the IL-6 content, there was no significant difference between the 3 groups(P>0.05). There was no correlation between the levels of TNF-α and IL-6 in saliva of RAU patients(r=-0.090,P=0.638). Conclusion TNF-α content increased in saliva may be one of the main risk factors of RAU etiology.

oral ulcer；saliva；interleukin-6；tumor necrosis factor-alpha

2015-11-23；

2016-01-22

河北省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點(diǎn)課題(20110504)

張素欣(1972-),女,河北石家莊人，河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院副主任醫(yī)師，醫(yī)學(xué)博士，從事口腔疾病診治研究。

*通訊作者。E-mail:649589734@qq.com

R781.5

A

1007-3205(2012)11-1285-04

10.3969/j.issn.1007-3205.2016.11.012