韋媛，林麗，陳碧艷，王梁，陳秋莉，陳少科，何升

(廣西壯族自治區(qū)婦幼保健院，南寧530003)

?

廣西地區(qū)中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血的發(fā)病情況及表型特征

韋媛，林麗，陳碧艷，王梁，陳秋莉，陳少科，何升

(廣西壯族自治區(qū)婦幼保健院，南寧530003)

目的 探討廣西地區(qū)人群中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血的檢出率及表型特征。方法 選擇14 204例血液標(biāo)本，用跨越斷裂點(diǎn)PCR(Gap-PCR)檢測α、β地中海貧血常規(guī)24種基因型，用Gap-PCR檢測中國型Gγ(Aγδβ)0地中海貧血缺失型基因，用血常規(guī)檢測和血紅蛋白(Hb)電泳分析表型特征。結(jié)果 在14 204例標(biāo)本中共檢出中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血雜合子10例、中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血復(fù)合β-地中海貧血1例，總檢出率為0.07%。中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血雜合子中無貧血癥狀7例，輕度貧血3例；血液學(xué)結(jié)果顯示紅細(xì)胞平均體積(MCV)及紅細(xì)胞平均Hb含量(MCH)降低，Hb電泳結(jié)果顯示HbA2正常，HbF升高。結(jié)論 廣西地區(qū)人群中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血的檢出率為0.07%；其表型特征為Hb正?；蜉p微降低，MCV、MCH降低，HbA2正常并HbF升高。

地中海貧血；中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血；篩查；基因型；表型特征；廣西壯族自治區(qū)

地中海貧血又稱為珠蛋白生成障礙性貧血，是由于珠蛋白基因缺陷導(dǎo)致珠蛋白鏈合成障礙而引起的遺傳性溶血性疾病。根據(jù)肽鏈合成障礙不同通常分為α、β、γ和δβ-地中海貧血。δβ-地中海貧血是一組因基因發(fā)育階段特異性表達(dá)失控導(dǎo)致胎兒出生后血紅蛋白F(HbF)持續(xù)增高的地中海貧血，其遺傳異質(zhì)性很大[1]。根據(jù)基因缺陷背景的不同，δβ-地中海貧血可分為缺失型和非缺失型兩大類。缺失型涉及β-類珠蛋白基因簇多個成員不同程度的大片段DNA缺失。我國報道的δβ-地中海貧血大片段缺失型有中國型、廣州型、云南型、比利時型及東南亞型遺傳性持續(xù)性胎兒Hb增高癥[2～5]，其中我國最常見的δβ-地中海貧血為中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血。本研究通過對廣西地區(qū)14 204例標(biāo)本進(jìn)行血液學(xué)和基因型分析，探討該地區(qū)中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血的發(fā)病情況及表型特征。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2015年1月～2016年4月在廣西壯族自治區(qū)婦幼保健院、廣西壯族自治區(qū)婦產(chǎn)醫(yī)院、廣西壯族自治區(qū)兒童醫(yī)院要求進(jìn)行地中海貧血基因檢測的受檢者14 204例，其中男7 269例、女6 935例，年齡10～55歲，近3個月無輸血史，均來自南寧、賀州、百色等14個轄市，包括壯、漢、苗、瑤等7個民族。

1.2 基因檢測 采集受檢者肘部外周血2 mL，置于EDTA抗凝管，按全血基因組DNA提取試劑盒說明書用Lab-Aid 820核酸提取儀(廈門百維信生物公司)提取基因組DNA。先采用跨越斷裂點(diǎn)PCR(Gap-PCR)檢測α-地中海貧血4種缺失型基因(含-Thai)、α-地中海貧血3種點(diǎn)突變基因和β-地中海貧血常見17種突變基因，試劑盒均購于深圳益生堂生物公司。采用Gap-PCR檢測中國型Gγ(Aγδβ)0地中海貧血缺失型基因，Gγ(Aγδβ)0缺失上游引物：5′-GGCATATATTGGCTCAGTCA-3′，Gγ(Aγδβ)0缺失下游引物：5′-TCAACAATTATCAACATTACACC-3′；正常內(nèi)對照下游引物：5′-CTTGCAGAATAAAGCCTATC-3′[6]。PCR反應(yīng)體系25 μL：2×mix 12.5 μL，ddH2O 6.5 μL，上游引物2 μL，下游引物1 μL，內(nèi)對照下游引物1 μL，DNA模板2 μL。擴(kuò)增反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性5 min，94 ℃變性1 min，59.7 ℃退火30 s，72 ℃延伸90 s，共35個循環(huán)，最后72 ℃延伸10 min。正常對照擴(kuò)增目的片段為682 bp，缺失擴(kuò)增目的片段為508 bp。

1.3 血常規(guī)及Hb分型檢測 采集受檢者肘部外周血4 mL，取2 mL置于EDTA抗凝管，用邁瑞B(yǎng)C-2000血液分析儀檢測紅細(xì)胞參數(shù)，包括Hb、紅細(xì)胞平均體積(MCV)及紅細(xì)胞平均Hb含量(MCH)等。另取外周血2 mL置于枸櫞酸鈉抗凝真空管，用Capillarys 2 flex piercing全自動電泳儀分析Hb，包括HbA2、HbF。

2 結(jié)果

14 204例受檢者中共檢出11例中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血，檢出率為0.07%。其中中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血雜合子10例、復(fù)合β-地中海貧血1例。10例中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血雜合子均表現(xiàn)為小細(xì)胞低色素(MCV<80 fL，MCH<28 pg)；Hb正常7例，Hb輕度降低3例；HbA2未見異常，HbF明顯升高(10.8%～22.3%)。中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血復(fù)合β-地中海貧血1例，表現(xiàn)為中重型地中海貧血表型，Hb 83.8 g/L，MCV 61.8 fL，MCH 19.4 pg，HbA2降低，大部分為HbF(98.8%)。見表1。

表1 11例Gγ(Aγδβ)0地中海貧血標(biāo)本的血液學(xué)參數(shù)及基因型

注：β-*為βChinese(Aγδβ)0/βN。

3 討論

δβ-地中海貧血依據(jù)其分子缺陷類型和表型特征分為五種類型：(δβ)0-地中海貧血、GγAγ(δβ)0-地中海貧血、Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血、(εγδβ)0-地中海貧血和Hb Lepore[7]。缺失型δβ-地中海貧血因涉及的有關(guān)功能基因(如Gγ、Aγ、δ和β-基因等)直接缺失而影響基因表達(dá)，也可由β-類珠蛋白基因簇中參與基因調(diào)控的座位控制區(qū)以及其他一些具有增強(qiáng)子作用的超敏位點(diǎn)的缺失而導(dǎo)致[8]。中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血最初由Mann等[9]于20世紀(jì)70年代首次報道，其缺失范圍累及β-珠蛋白基因簇Aγ、ψβ、δ和β-基因下游具有增強(qiáng)效應(yīng)的DNA序列以及3′-HS-1區(qū)域，缺失長度為78.9 kb[10]。β-類珠蛋白基因簇中含有2個表達(dá)γ-珠蛋白肽鏈的γ-基因(Gγ和Aγ)，其表達(dá)水平直接影響Gγ和Aγ的比例及HbF含量。出生后本應(yīng)關(guān)閉的γ-基因因δβ-地中海貧血攜帶者的β-基因缺失而替代β-基因的功能，其產(chǎn)物(γ-珠蛋白肽鏈)與α-基因產(chǎn)物(α-珠蛋白肽鏈)生成HbF(α2γ2)[1]。相較于云南型純合子僅有輕度貧血[11]，中國型純合子臨床上則有中重度貧血表現(xiàn)，依賴輸血維持生命[12]。中國型缺失斷裂點(diǎn)的3′端位于云南型3′端斷裂點(diǎn)的下游約10 kb，這段缺失區(qū)域中包含了以上提到的增強(qiáng)子。增強(qiáng)子的距離效應(yīng)學(xué)說可很好地解釋這種差異：位于β基因下游遠(yuǎn)端的增強(qiáng)子序列因基因的大段丟失而被帶到了鄰近γ基因的位點(diǎn)，此增強(qiáng)子可對Gγ基因產(chǎn)生正向調(diào)節(jié)，從而使γ鏈的表達(dá)水平升高[1]。

本研究中廣西地區(qū)的10例中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血缺失雜合子表現(xiàn)為無貧血或輕度貧血，HbA2在正常范圍(2.3%～2.9%)，HbF則明顯升高(10.8%～22.3%)，與覃麗波等[13]報道的廣西地區(qū)情況相比，血液學(xué)參數(shù)范圍更大。這可能是因為本研究病例較多。雖然中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血缺失雜合子臨床癥狀輕微，但當(dāng)復(fù)合β-地中海貧血時，出現(xiàn)中度至重度貧血，臨床表型類似于中間型或重型β-地中海貧血。本研究有1例中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血復(fù)合β-地中海貧血(病例11)，中度貧血(83.6 g/L)，MCV 61.8 fL，MCH 19.4 pg，HbF 98.8%，6個月時出現(xiàn)貧血癥狀，肝脾大，依賴輸血,與相關(guān)文獻(xiàn)[14～16]報道相似。檢測出的中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血且配偶為β-地中海貧血攜帶者4例，均給予及時回訪及充分臨床指導(dǎo)，在其孕期對胎兒進(jìn)行產(chǎn)前診斷，分別檢測出正常胎兒2例、中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血雜合子胎兒1例及中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血復(fù)合β-地中海貧血雙重雜合子胎兒1例。

當(dāng)Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血復(fù)合其他β-地中海貧血時，表現(xiàn)為中重型地中海貧血表型，臨床比較容易發(fā)現(xiàn)。而當(dāng)單純攜帶中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血時，多數(shù)人未有貧血表現(xiàn)，血象僅表現(xiàn)為小細(xì)胞低色素和HbF升高，且常規(guī)17種β-地中海貧血檢測結(jié)果正常，臨床極容易漏診。當(dāng)發(fā)現(xiàn)MCV、MCH降低，HbA2未見明顯異常而HbF明顯增高時，或夫妻雙方基因型與重型地中海貧血患兒基因結(jié)果不符合時，應(yīng)考慮存在中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血或其他缺失型δβ-地中海貧血的可能。本研究從14 204例臨床標(biāo)本中檢出11例中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血，人群發(fā)病率為0.07%，與Xiong等[17]報道的調(diào)查結(jié)果相似，為廣西地區(qū)地中海貧血的流行病學(xué)調(diào)查提供新的佐證。廣西是地中海貧血高發(fā)地區(qū)，人群中β-地中海貧血攜帶率高達(dá)6.43%[18]。如夫妻雙方一方為中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血，另一方為β-地中海貧血，應(yīng)給予充分的遺傳咨詢，建議產(chǎn)前診斷，以避免重型地中海貧血患兒的出生，達(dá)到優(yōu)生優(yōu)育的目的。

[1] 徐湘民.見于中國人的HPFH和δβ-地中海貧血的分子基礎(chǔ)[J].中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志,1998,15(5):315-317.

[2] Lin M, Wen YF, Wu JR, et al. Hemoglobinopathy: molecular epidemiological characteristics and health effects on Hakka peoplein the meizhou region , southern China[J]. PLoS One, 2013,8(2):e55024.

[3] Xu XM, Li ZQ, Liu ZY, et al. Molecular characterization and PCR detection of a deletional HPFH: application to rapid prenatal diagnosis for compound heterozygotes of this defect with beta-thalassemia in a chinese family[J]. Am J Hematol, 2000,65(3):183-188.

[4] So CC, So AC, Chan AY, et al. Detection and characterisation of beta-globin gene cluster deletions in Chinese using multiplex ligation-dependent probe amplification[J]. J Clin Pathol, 2009,62(12):1107-1111.

[5] Chen W, Zhang X, Shang X, et al. The molecular basis of beta-thalassemia intermedia in southern China:genotypic heterogeneity and phenotypic diversity[J]. BMC Med Genet, 2010(25):11-31.

[6] Craig JE, Barnetson RA, Prior J, et al. Rapid detection of deletions causing δβ-thalassemia and hereditary persistence of fetal hemoglobin by enzymatic amplification[J]. Blood, 1994,83(6):1673-1682.

[7] Carrocini GC, Ondei LS, Zamaro PJ, et al. Evaluation of HPFH and δβ-thalassemia mutations in a Brazilian group with high Hb F levels[J]. Genet Mol Res, 2011,10(4):3213-3221.

[8] Bollekens JA, Forget BG. δβ-thalassemia and hereditary persistence of fetal hemoglobin[J]. Hematol Oncol Clin North Am, 1991,5(3):399-422.

[9] Mann JR, MacNeish AS, Bannister D, et al.Delta-beta-thalassemia in a Chinese family[J]. Br J Haematol,1972,23(4):393-402.

[10] 王春芳,韋傳東,雷茗，等.Gγ+(Aγδβ)0-地中海貧血復(fù)合β-地中海貧血家系的表型與基因型分析的警示[J].中國兒童保健雜志,2015,23(11):1191-1193.

[11] Zhang JW, Song WF, Zhao YJ, et al. Molecular characterization of a novel form of (Aγδβ)0-thalassemia deletion in a Chinese family[J]. Blood, 1993,81(6):1624-1629.

[12] 張俊武,吳冠蕓,趙艷君，等.與胎兒珠蛋白基因持續(xù)表達(dá)有關(guān)的(Aγδβ)0-地貧純合子及雜合子的分子鑒別[J].生物化學(xué)雜志,1991,7(3):333-338.

[13] 覃麗波,陳萍,陳文強(qiáng)，等.廣西地區(qū)Gγ(Aγδβ)0-珠蛋白生成障礙性貧血的研究[J].實用兒科臨床雜志,2012,27(15):1151-1153.

[14] 杜麗,秦丹卿,王繼成，等.5個家系δβ地中海貧血的家系分析及產(chǎn)前診斷[J].分子診斷與治療雜志,2015,7(1):27-32.

[15] 李堅,李東至.β-地中海貧血合并δβ-地中海貧血一個家系的產(chǎn)前診斷[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志,2008,16(5):66-49.

[16] 李志琴,莫秋華,鐘雄林，等.一個β-地中海貧血復(fù)合δβ-地中海貧血家系的表型與基因型分析[J].中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)志,2001,18(4):310-313.

[17] Xiong F, Sun M. Molecular epidemiological survey of haemoglobinopathies in the Guangxi Zhuang Autonomous Region of southern China[J]. Clinical Genetics, 2010,78(2):139-148.

[18] 徐湘民,張新華,陳荔麗,等.地中海貧血預(yù)防控制操作指南[M].北京:人民軍醫(yī)出版社,2011:28.

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.37.019

R556.6

B

1002-266X(2016)37-0058-03

2016-05-10)