李曉梅，劉建紅，朱法榮，劉向紅，康麗麗，李曉鶯

(濟(jì)南市兒童醫(yī)院，濟(jì)南 252000)

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缺氧缺血性腦病新生兒血清8-羥基脫氧鳥苷水平變化及其臨床意義

李曉梅，劉建紅，朱法榮，劉向紅，康麗麗，李曉鶯

(濟(jì)南市兒童醫(yī)院，濟(jì)南 252000)

目的 探討8-羥基脫氧鳥苷(8-OHDG)在新生兒缺氧缺血性腦病(HIE)發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法 選擇60例HIE患兒作為觀察組，其中HIE為輕度、中度、重度各20例；同期非HIE，有發(fā)熱表現(xiàn)但排除顱內(nèi)感染的足月新生兒20例作為對(duì)照組。采用高效液相色譜法檢測(cè)兩組出生后1、3、7天血清8-OHDG。結(jié)果 出生后1、3、7天血清8-OHDG(pg/mL)水平：觀察組分別為43.8±2.1、69.9±3.2、34.9±2.8，其中輕度者分別為29.6±4.5、46.2±3.1、20.6±4.5，中度者分別為42.3±3.1、62.6±7.0、37.5±3.1，重度者分別為54.2±2.9、90.2±6.2、47.1±4.1；對(duì)照組分別為25.7±3.1、36.6±4.6、33.1±1.8；觀察組出生后第3天血清8-OHDG水平明顯高于出生后1、7天，相同時(shí)間點(diǎn)觀察組血清8-OHDG水平明顯高于對(duì)照組，P均<0.05；觀察組輕度、中度、重度者相同時(shí)間點(diǎn)兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。結(jié)論 8-OHDG可能參與了HIE的病理生理過程，血清8-OHDG水平可作為判斷HIE病情的指標(biāo)。

缺氧缺血性腦?。恍律鷥?；8-羥基脫氧鳥苷

圍生期各種病理因素導(dǎo)致胎兒機(jī)體的供氧供血減少，可引起機(jī)體組織器官缺氧缺血性損害，其中新生兒窒息是影響神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的重要因素，腦細(xì)胞對(duì)此最為敏感，腦細(xì)胞凋亡在神經(jīng)元變性的病理過程中起至關(guān)重要的作用[1]，由此即可導(dǎo)致新生兒缺氧缺血性腦病(HIE)，HIE輕度者幾乎不留神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥，中重度者病死率高，存活者多遺留智力低下、語言、運(yùn)動(dòng)、認(rèn)知功能障礙等后遺癥。8-羥基脫氧鳥苷(8-OHDG)可評(píng)估體內(nèi)氧化損傷和修復(fù)及氧化應(yīng)激與DNA損傷程度，是目前國(guó)際上公認(rèn)的評(píng)價(jià)DNA氧化損傷和氧化應(yīng)激狀態(tài)的敏感指標(biāo)和生物標(biāo)志物[2～5]。本課題探討HIE患兒血清8-OHDG的水平變化及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 觀察組為2010年2月～2013年2月在我院住院的足月HIE患兒(排除早產(chǎn)因素對(duì)腦發(fā)育的影響)60例，其中男31例、女29例，剖宮產(chǎn)28例、順產(chǎn)32例，胎(周)齡(38.3±1.2)周，體質(zhì)量(3.78±0.42)kg，母親年齡(29.5±1.1)歲。根據(jù)2005年第4屆全國(guó)新生兒學(xué)術(shù)會(huì)議修訂的新生兒HIE的診斷依據(jù)和臨床分度標(biāo)準(zhǔn)[6]，HIE為輕度、中度、重度者各20例。對(duì)照組為同期住院治療的非HIE，有發(fā)熱表現(xiàn)但經(jīng)完善腦脊液檢查最終排除顱內(nèi)感染的足月新生兒20例，其中新生兒肺炎8例、新生兒敗血癥6例、新生兒膿皰瘡6例，男11例、女9例；剖宮產(chǎn)12例、順產(chǎn)8例，胎(周)齡(39.2±0.9)周，體質(zhì)量(3.70±0.54)kg，母親年齡(27.2±1.6)歲。兩組性別、產(chǎn)式、胎齡、體質(zhì)量、母親年齡具有可比性。

1.2 血清8-OHDG檢測(cè) 兩組分別于出生1、3、7天采集靜脈血1.5 mL，3 000 r/min離心10 min分離血清。采用高效液相色譜法[7]檢測(cè)8-OHDG。操作過程中避免任何細(xì)胞刺激， 質(zhì)譜條件：選用的電離源為ESI(+)，采用多反應(yīng)模式進(jìn)行檢測(cè)(MRM)；色譜條件：流動(dòng)相：A=甲醇，B=10 mmol/L醋酸銨含0.1%甲酸的水溶液；A∶B=80∶20 (v/v)，流速：0.6 mL/min；進(jìn)樣量：20 μL。

2 結(jié)果

兩組不同時(shí)間點(diǎn)血清8-OHDG水平比較見表1，觀察組不同病情者血清8-OHDG水平比較見表2。由表1可見，相同時(shí)間點(diǎn)觀察組血清8-OHDG水平明顯高于對(duì)照組，P均<0.05； 觀察組出生3天血清8-OHDG水平明顯高于出生后1、7天。由表2可見，觀察組輕度、中度、重度者相同時(shí)間點(diǎn)血清8-OHDG水平均明顯高于對(duì)照組(P均<0.05)。

表1 兩組不同時(shí)間點(diǎn)血清8-OHDG水平比較

注：與同組出生1天及出生7天比較，*P<0.05；與對(duì)照組同時(shí)間點(diǎn)比較，△P<0.01。

表2 觀察組不同病情者血清8-OHDG水平比較±s)

3 討論

各種圍產(chǎn)期異常的母體、胎盤、臍帶、羊水及胎兒因素等均可引起新生兒窒息，導(dǎo)致機(jī)體多臟器缺氧缺血性損害，腦細(xì)胞對(duì)缺氧最為敏感。新生兒腦組織的生理結(jié)構(gòu)、功能、細(xì)胞間連接、信號(hào)傳導(dǎo)通路等方面均與成人腦組織不同，極易受各種不良因素影響，缺氧后的反應(yīng)也不一樣。缺氧缺血性損傷后機(jī)體可產(chǎn)生大量活性氧自由基(ROS)如羥自由基、單線態(tài)氧等攻擊DNA分子中的鳥嘌呤堿基第8位碳原子而產(chǎn)生的一種氧化性加合物，其可攻擊DNA中的鳥嘌呤使脫氧鳥苷氧化成8-OHDG[8]。自由基一直被認(rèn)為是引起DNA損傷的主要因素之一，可對(duì)生物體產(chǎn)生多種損害作用，其作用機(jī)制主要涉及DNA的損傷。羥自由基和超氧陰離子能直接與DNA分子反應(yīng)，導(dǎo)致DNA鏈斷裂、堿基修飾和DNA蛋白交聯(lián)等氧化性DNA損傷，慢性的神經(jīng)元凋亡在神經(jīng)細(xì)胞的變性中起重要作用，并由此導(dǎo)致腦細(xì)胞凋亡或壞死。Kato等[9]在心血管領(lǐng)域研究證實(shí)8-OHDG是缺氧后DNA分子發(fā)生損傷的生物標(biāo)志。Kang等[10]通過研究孕母及其新生兒也發(fā)現(xiàn)8-OHDG是氧化應(yīng)激損傷的標(biāo)志物。有研究表明，海馬區(qū)蛋白質(zhì)對(duì)氧化應(yīng)激損傷非常敏感，機(jī)體的氧化損傷廣泛存在，主要表現(xiàn)為生物大分子(如DNA、蛋白質(zhì)、脂類等)結(jié)構(gòu)和功能的損傷，氧化性DNA損傷在生物體細(xì)胞老化、死亡的發(fā)生過程中起重要作用[11,12]。

本研究結(jié)果表明，觀察組在病程同一階段存在缺氧缺血性損害后體內(nèi)細(xì)胞出現(xiàn)DNA損傷，血清中8-OHDG生成明顯增多；對(duì)照組血清中8-OHDG雖有一定表達(dá)，但在急性期(住院治療3日內(nèi))及恢復(fù)期(病情好轉(zhuǎn))差異無顯著性。本研究觀察組出生1、3、7天8-OHDG水平均明顯高于對(duì)照組，證實(shí)8-OHDG水平隨缺氧缺血性DNA損傷加重而升高，8-OHDG可能參與了HIE的病理生理過程。本研究觀察組病情輕、中、重者血清8-OHDG水平逐漸升高，提示其腦細(xì)胞缺氧重者細(xì)胞DNA損傷相應(yīng)加重，8-OHDG與病情輕重程度密切相關(guān)，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)血清8-OHDG水平可指導(dǎo)臨床治療及評(píng)估預(yù)后[13,14]。有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，腦缺氧缺血損傷發(fā)生腦梗死再灌注后的12 h 8-OHDG明顯升高，DNA斷鏈可被檢測(cè)出，24 h達(dá)高峰，雖然時(shí)間峰值與臨床結(jié)果稍有出入，但提示8-OHDG可作為DNA的損傷標(biāo)志物在一定程度上反映急性腦損傷程度[15]。本研究發(fā)現(xiàn)，8-OHDG在HIE的不同階段變化趨勢(shì)不同。出生后第1天時(shí)隨著分娩過程及機(jī)體環(huán)境的改變，腦細(xì)胞缺氧得到一定程度改善，但細(xì)胞DNA損傷并未停止，血清中8-OHDG水平開始升高；出生后第3天為新生兒HIE的急性期，8-OHDG水平較出生第1天及恢復(fù)期第7天明顯升高，與疾病的自然病程一致。提示臨床HIE急性期血清8-OHDG升高的患兒腦細(xì)胞損傷較重，盡快改善腦細(xì)胞代謝、防止腦水腫加重可縮小腦損傷面積。

綜上所述，血清8-OHDG水平可作為判斷窒息新生兒是否會(huì)發(fā)生HIE的指標(biāo)，為可用于判斷神經(jīng)節(jié)苷酯的治療效果及對(duì)DNA損傷的修復(fù)作用。

[1] Suganuma H, Arai Y, Kitamura Y, Maternal docosahexaenoic acid-enriched diet prevents neonatal brain injury[J]. Neuropathology, 2010,30(6):597-605.

[2] Fukuda M, Yamauchi H, Yamamoto H, et al. The evaluation of oxidative DNA damage in children with brain damage using 8-hydroxydeoxyguanosine levels[J]. Brain Dev, 2008,30(2):131-136.

[3] 劉海霞.8-羥基脫氧鳥苷在早產(chǎn)兒腦損傷中的臨床意義[J].寧夏醫(yī)學(xué)雜志，2015,10(37)：895-896.

[4] Honda M, Yamada Y, Tomonaga M, et al. Correlation of urinary 8-hydroxy-2′-deoxyguanosine (8-OHdG), a biomarker of oxidative DNA damage, and clinical features of hematological disorders: a pilot study[J]. Leuk Res, 2000,24(6):461-468.

[5] 鄧娟,周華東,陳曼,等.局灶性腦缺血再灌注大鼠神經(jīng)元DNA氧化損傷的研究[J].中國(guó)危重病急救醫(yī)學(xué),2001,13(8):478-480.

[6] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)會(huì)新生兒學(xué)組.新生兒缺氧缺血性腦病診斷標(biāo)準(zhǔn)[J].中華兒科雜志,2005,43(8):584.

[7] 劉仲，于志剛.人尿液8-羥基脫氧鳥苷的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)方法[J].中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2016,50(4)：357-361.

[8] 汪莉君,邵華.8-OHDG檢測(cè)方法研究進(jìn)展[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2007,17(10):5191-5195.

[9] Kato S, Yoshimura K, Kimata T, et al. urinary 8-hydroxy-2′-deoxyguanosine: a biomarker for radiation-induced oxidative DNA damage in pediatric cardiac catheterization[J]. J Pediatr, 2015,167(6):1369-1374.

[10] Kang S, Kim S, Park J, et al. Urinary paraben concentrations among pregnant women and their matching newborn infants of Korea, and the association with oxidative stress biomarkers[J]. Sci Total Environ, 2013,9(1):461-462.

[11] Furukawa A, Kawamoto Y, Chiba Y, et al. Proteomic identification of hippocampal proteins vulnerable to oxidative stress in excitotoxin-induced acute neuronal injury[J]. Neurobiol Dis, 2011,43(3):706-714.

[12] Takizawa Y, MiYazawa T, Nonoyama S, et al. Edaravone inhibits DNA peroxidation and neuronal cell death in neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy Model Rat[J]. Pediatr Res, 2009,65(6):636-641.

[13] Matsubasa T, Uchino T, Karashima S, et al. Oxidative stress in very low birth weight infants as measured by urinary 8-OHdG[J]. Free Radic Res, 2002,36(2):189-193.

[14] 孫詠梅,戴樹栓,襲著平.DNA加合物8-OHDG特性研究[J].上海環(huán)境科學(xué),2001,20(9):409-413.

[15] Liu H, Uno M, Kitazato KT, et al. Peripheral oxidative biomarkers constitute a valuable indicator of the severity of oxidative brain damage in acute cerebral infarction[J]. Brain Res, 2004,1025(1-2):43-50.

山東省醫(yī)藥衛(wèi)生科技發(fā)展計(jì)劃(HD004)。

李曉鶯(E-mail: lxy_jn@sina.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.36.017

R722.1

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1002-266X(2016)36-0054-03

2015-12-28)