龍嘉 李黎明 許翠 楊佳 蔣明軍
518035深圳大學(xué)第一附屬醫(yī)院 深圳市第二人民醫(yī)院皮膚科(龍嘉);中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 皮膚病研究所 江蘇省皮膚病與性病分子生物學(xué)重點實驗室(李黎明、許翠、楊佳、蔣明軍)
HPV16E7靶向小干擾RNA對SiHa細(xì)胞增殖凋亡及6種抑癌基因的影響
龍嘉 李黎明 許翠 楊佳 蔣明軍
518035深圳大學(xué)第一附屬醫(yī)院 深圳市第二人民醫(yī)院皮膚科(龍嘉);中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 皮膚病研究所 江蘇省皮膚病與性病分子生物學(xué)重點實驗室(李黎明、許翠、楊佳、蔣明軍)
目的探討HPV16E7在SiHa細(xì)胞株中對抑癌基因(MT1G、NMES1、RRAD、SFRP1、SPARC、TFPI2)的表達(dá)及細(xì)胞增殖能力和凋亡水平的影響。方法SiHa細(xì)胞轉(zhuǎn)染E7SiRNA 48 h后,qPCR檢測E7及6種抑癌基因mRNA水平變化,CCK?8檢測細(xì)胞增殖能力改變,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡水平。結(jié)果SiHa細(xì)胞轉(zhuǎn)染后48 h,qPCR結(jié)果顯示實驗組E7 mRNA顯著降低(0.25±0.036,P<0.05);6種抑癌基因的mRNA水平均顯著增加(MT1G 1.403±0.190、NMES1 1.720±0.060、RRAD 1.390±0.160、SFRP1 1.493±0.120、SPARC 2.157±0.144、TFPI2 2.060±0.122,P<0.05)。細(xì)胞增殖結(jié)果顯示,與陰性對照組及空白組比較,實驗組細(xì)胞增殖能力顯著降低(0.554±0.130,P<0.05),陰性對照組和空白組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。細(xì)胞凋亡結(jié)果提示,實驗組細(xì)胞凋亡細(xì)胞頻率為9.222%較陰性對照組(0.246%)及空白組(0.123%)明顯增加(P<0.05),空白組與陰性對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論HPV16導(dǎo)致細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中,E7可能通過抑制(MT1G、NMES1、RRAD、SFRP1、SPAR、TFPI2)6種抑癌基因的表達(dá)參與作用。
人乳頭瘤病毒16;乳頭瘤病毒E7蛋白質(zhì)類;細(xì)胞增殖;細(xì)胞凋亡;SiRNA;抑癌基因
人乳頭瘤病毒(HPV)在多種腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的作用已得到廣泛認(rèn)同。高危型HPV感染是受染細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化的必要條件,其中>50%的HPV相關(guān)腫瘤與HPV16相關(guān),因此針對HPV16的研究最為廣泛,E6/E7基因是發(fā)揮致癌作用的主要分子,E6/p53?E7/pRB路徑是致病的重要機(jī)制之一。越來越多的研究提示,除了上述途徑之外,HPV16還可能通過其他途徑直接或間接導(dǎo)致細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化[1?3]。Sova等[4]通過生物芯片技術(shù),分析HPV16陽性腫瘤細(xì)胞株,結(jié)果顯示,23種基因的表達(dá)出現(xiàn)顯著變化,其中,金屬硫蛋白1G(metal?lothionein 1G,MT1G)、正常黏膜食管特異性蛋白1(normalmucosaofesophagus?specific 1gene,NMES1)、Ras相關(guān)GTP酶(ras?related GTPase gene,RRAD)、分泌型卷曲相關(guān)蛋白1(secreted frizzled?related protein 1 gene,SFRP1)、富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(secreted protein acidic and rich in cysteine,SPARC)、組織因子通路抑制劑2(tissue factor pathway inhibitor 2,TFPI2),6種基因表達(dá)顯著降低,因而認(rèn)為它們在腫瘤發(fā)展過程中發(fā)揮抑癌基因作用。高危型HPV的持續(xù)感染是細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的必要條件,我們推測這6種基因表達(dá)水平的降低可能與HPV16感染相關(guān),但該研究結(jié)果尚未見報道。我們用HPV16E7小干擾RNA(SiRNA)沉默SiHa(HPV16陽性)細(xì)胞內(nèi)的HPV16E7蛋白,研究沉默前后細(xì)胞的增殖及凋亡的變化,及上述6種基因表達(dá)的變化,為進(jìn)一步研究相關(guān)基因的功能,深入探討HPV 16致病機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
1.材料:SiHa細(xì)胞株(本實驗室保存),DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清、胰蛋白酶、OPTI?MEM(美國 Gibco公司)。Lipofectamin2000、Trizol?Reagent(美 國Invitrogen公司),Prime ScriptTMRT reagent Kit(日本 Takara公司),QuantiFast SYBR Green PCR試劑盒(德國Qiagen公司),CCK?8試劑盒(日本同仁化學(xué)研究所),Annexin V?FITC凋亡檢測試劑盒(美國eBioscience公司)。
2.SiRNA及PCR引物:由美國Invitrogen公司設(shè)計及合成HPV16 E7靶向SiRNA(序列為CAGAGGA GGAGGAUGAAAUAGAUGG),經(jīng)Blastn(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)驗證。使用Primer Premier 5.0設(shè)計HPV16E7、6種抑癌基因及β肌動蛋白的qPCR定量引物(表1),由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。
1.SiHa細(xì)胞培養(yǎng)及分組:復(fù)蘇后于DMEM培養(yǎng)基(10%胎牛血清)培養(yǎng)細(xì)胞(37℃、5%二氧化碳),胰酶消化傳代,3次傳代后進(jìn)行下一步實驗。傳代后SiHa細(xì)胞分為實驗組、陰性對照組和空白組。實驗組細(xì)胞轉(zhuǎn)染E7 SiRNA,陰性對照組轉(zhuǎn)染空載體,空白組未轉(zhuǎn)染。
2.SiHa細(xì)胞轉(zhuǎn)染及形態(tài)學(xué)觀測:按Lipofectamin2000試劑盒說明書要求進(jìn)行轉(zhuǎn)染,將細(xì)胞接種至6孔板,轉(zhuǎn)染前2 h更換OPTI?MEM無血清細(xì)胞培養(yǎng)基。將SiRNA或空載質(zhì)粒(100 pmol)和Lipofectamine 2000(6 μl),分別加至 250 μl的無血清培養(yǎng)基中,室溫靜置5 min混勻2種懸液,室溫靜置20 min。最后將SiRNA混合液加至6孔板中,于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。轉(zhuǎn)染6 h后,更換為含血清培養(yǎng)基。用相差顯微鏡對轉(zhuǎn)染后48 h的3個組SiHa細(xì)胞進(jìn)行觀察。
3.qPCR檢測mRNA水平:
(1)RNA提取:洗滌轉(zhuǎn)染細(xì)胞,每孔加1 ml Trizol試劑,細(xì)胞完全裂解后移至1.5 ml離心管,室溫放置10 min。每管加入200 μl氯仿,混勻15 s,靜置后離心。新微量離心管取上層水相,每管加入500 μl預(yù)冷異丙醇混勻,室溫靜置10 min后離心。每管加入1 ml 75%冰乙醇洗滌,室溫自然干燥,將所得RNA溶于DEPC水中,備用。
表1 HPV16 E7、6種抑癌基因及β肌動蛋白的qPCR定量引物
(2)反轉(zhuǎn)錄:按說明書在無RNA酶的PCR管中配制如下反應(yīng)體系:RNA樣品1 μg,Mix 4 μl,水補(bǔ)充反應(yīng)體系至20 μl。將反應(yīng)體系輕混勻,將反應(yīng)體系置入PCR儀,設(shè)置循環(huán)模式(37℃15 min,85℃5 s)。完成后所得cDNA于4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
(3)qPCR檢測mRNA水平變化:Qu按antiFast SYBR GreenPCR試劑盒說明書要求于冰上在96孔板中配制如下反應(yīng)體系:PCR Master Mix 10 μl,引物F/R各0.5 μl,cDNA 1 μl,雙蒸水8 μl。分別加入96孔板,輕輕混勻。設(shè)置循環(huán)模式如下:50℃2 min;95℃ 5 min;95℃ 20 s,60℃ 30 s(40個循環(huán));95℃15 s,60 ℃ 60 s,5 ℃ 15 s。
4.增殖活性檢測:按CCK?8試劑盒說明操作,分組方法參照上述實驗分組,各組均設(shè)3個復(fù)孔。于96孔板中每孔加入5×103個細(xì)胞,定容至100 μl,培養(yǎng)過夜。次日進(jìn)行轉(zhuǎn)染(方法同前)。轉(zhuǎn)染后48 h每孔加入10 μl CCK?8試劑,繼續(xù)培養(yǎng)1 h。后用紫外分光光度儀檢測每孔450 nm波長的吸光度A值。
5.細(xì)胞凋亡檢測:按Annexin V?FITC凋亡檢測試劑盒說明書操作。取轉(zhuǎn)染后48 h細(xì)胞,將原細(xì)胞培養(yǎng)液吸出至干凈離心管內(nèi)。洗滌貼壁細(xì)胞后加入1 ml 0.25%胰蛋白酶消化細(xì)胞1~2 min。加入之前收集的原細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打使之形成單細(xì)胞懸液。移至15 ml離心管,離心后棄上清,用PBS重懸細(xì)胞并計數(shù)。取5×104個重懸的細(xì)胞,離心后棄上清,加入195 μl Annexin V?FITC結(jié)合液后加入5 μl Annexin V?FITC混勻。室溫避光孵育10 min,離心后棄上清。加入190 μl Annexin V?FITC結(jié)合液及10 μl碘化丙錠染色液,混勻后避光放置。隨即用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的凋亡情況。
6.統(tǒng)計學(xué)方法:實驗結(jié)果取3次重復(fù)均值。用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。數(shù)據(jù)以±s表示,用單因素方差分析分析組間的顯著性。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
倒置光學(xué)顯微鏡下可見轉(zhuǎn)染前細(xì)胞生長狀態(tài)良好,多數(shù)細(xì)胞貼壁生長,細(xì)胞形態(tài)呈梭形或星形(圖1A);轉(zhuǎn)染48 h后,3個組間細(xì)胞貼壁情況無明顯差別,但實驗組(圖1B)及陰性對照組(圖1C)細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)大量空泡,空白組(圖1D)未見明顯空泡。另實驗組細(xì)胞匯合度較陰性對照組及空白組(圖1D)低,大量細(xì)胞形態(tài)由梭形或星形變?yōu)閳A形。
為進(jìn)一步明確SiRNA干擾效果、對E7表達(dá)的影響,以及E7沉默后對6種抑癌基因的影響,我們用qPCR對3個組細(xì)胞中相關(guān)基因的mRNA表達(dá)水平進(jìn)行分析。實驗結(jié)果顯示(圖2),與陰性對照組(0.963±0.040)及空白組(0.990±0.017)相比,實驗組E7 mRNA顯著降低(0.25±0.036,P<0.05);6種抑癌基因的mRNA水平均顯著增加(MT1G 1.403±0.190、NMES1 1.720 ± 0.060、RRAD 1.390 ± 0.160、SFRP1 1.493 ± 0.120、SPARC 2.157 ± 0.144、TFPI2 2.060±0.122,P<0.05),陰性對照組和空白組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
轉(zhuǎn)染后48 h,收集3個組SiHa細(xì)胞,利用CCK?8試劑分析細(xì)胞增殖情況(圖3)。與陰性對照組及空白組相比較,實驗組細(xì)胞增殖顯著降低(0.554±0.130)(P<0.05)。陰性對照組(1.028±0.236)和空白組(1.220±0.126)之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
圖1 轉(zhuǎn)染前后SiHa細(xì)胞生長狀態(tài)(倒置光學(xué)顯微鏡×400) 1A:轉(zhuǎn)染前,細(xì)胞形態(tài)呈梭形或星形;1B:實驗組(轉(zhuǎn)染siRNA 48 h后),胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)大量空泡;1C:陰性對照組(轉(zhuǎn)染空載體后48 h),胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)大量空泡;1D:空白組(未轉(zhuǎn)染、連續(xù)培養(yǎng)48 h后)未見明顯空泡
流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡頻率(圖4)。結(jié)果提示,3個組細(xì)胞凋亡的頻率均較低,但實驗組細(xì)胞凋亡頻率為9.222%較實驗組及空白組顯著增加(P<0.05),空白組與陰性對照組凋亡頻率分別為0.246%及0.123%,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
圖2 轉(zhuǎn)染后48 h,qPCR分析mRNA表達(dá)水平
圖3 轉(zhuǎn)染后48 h細(xì)胞增殖情況
RNA干擾在細(xì)胞體內(nèi)對于基因的調(diào)控以及防御外界病毒的入侵起到了重要作用,主要是通過促進(jìn)相關(guān)mRNA降解而達(dá)到使基因沉默的結(jié)果[5]。E6/p53?E7/pRB路徑是HPV16導(dǎo)致細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的重要路徑之一,其中E7與pRB蛋白結(jié)合使轉(zhuǎn)錄因子E2F被釋放,后者激活基因轉(zhuǎn)錄,促進(jìn)了眾多細(xì)胞增殖相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄,從而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡受抑制及細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化[6?7]。但近年的研究表明,HPV16E7除了通過E7/pRB途徑導(dǎo)致細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化及腫瘤的發(fā)生外,還可通過其他途徑直接或間接導(dǎo)致腫瘤的形成。如E7可以和其他RB相關(guān)的pocket蛋白結(jié)合,如p107及p130等,導(dǎo)致這些蛋白通過泛素途徑降解[8]。此外E7蛋白基因的表達(dá)還可導(dǎo)致多種細(xì)胞周期負(fù)向調(diào)控信號失效,如TGF?β介導(dǎo)的生長抑制、p16介導(dǎo)的細(xì)胞周期停滯、p21和p27介導(dǎo)的G1/S轉(zhuǎn)換阻滯等[9]。
Sova等[4]利用HPV16陽性腫瘤細(xì)胞株及相關(guān)臨床標(biāo)本,采用生物芯片測序等技術(shù),得出MT1G,NMES1,RRAD,SFRP1,SPARC和TFPI2基因與腫瘤的發(fā)生和形成密切相關(guān),這6種基因均為高甲基化,mRNA表達(dá)降低,發(fā)揮抑癌基因功能。我們推測HPV16 E7可能與上述抑癌基因高甲基化導(dǎo)致的表達(dá)降低有關(guān),因此我們用E7靶向SiRNA沉默SiHa細(xì)胞株中的E7,研究沉默前后上述6種抑癌基因的表達(dá)、細(xì)胞生長狀況及細(xì)胞凋亡情況的變化,以期進(jìn)一步研究E7的功能。
本實驗結(jié)果表明,E7 SiRNA可以成功導(dǎo)致HPV16 E7mRNA表達(dá)降低75%左右。與此同時,發(fā)現(xiàn)6種抑癌基因的mRNA水平均明顯升高,與陰性對照組及空白組有顯著差異。該結(jié)果提示,HPV16 E7與抑癌基因的低表達(dá)相關(guān),但其作用機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。我們推測E7可能與甲基化酶發(fā)生直接或間接的作用,使得這些基因的甲基化水平升高,進(jìn)而導(dǎo)致其mRNA表達(dá)降低。HPV16陽性腫瘤細(xì)胞系需要通過不斷增殖且保持抗凋亡性以維持細(xì)胞惡性狀態(tài)[10]。在一些病毒相關(guān)腫瘤,抗細(xì)胞凋亡的活動通常來自病毒蛋白[11]。因此,我們通過CCK?8檢測增殖活性改變,并且通過流式細(xì)胞儀檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞凋亡改變。實驗結(jié)果表明,實驗組腫瘤細(xì)胞的增殖活性較陰性對照組及空白組明顯下降,凋亡水平較陰性對照組及空白組明顯升高。進(jìn)一步說明E7可以促進(jìn)細(xì)胞增殖維及抑制細(xì)胞凋亡,從而維持腫瘤細(xì)胞惡性狀態(tài)。
圖4 轉(zhuǎn)染后48 h流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡頻率 4A:實驗組;4B:陰性對照組;4C:空白組
本研究的結(jié)果表明,HPV16E7不僅可以導(dǎo)致靶細(xì)胞的增殖和凋亡發(fā)生改變,而且可導(dǎo)致抑癌基因的mRNA表達(dá)均降低。HPV 16是否通過與DNA甲基化酶的直接和或間接的作用,使目的基因的甲基化水平升高,mRNA表達(dá)降低,進(jìn)而發(fā)揮HPV 16的致病功能,尚待進(jìn)一步研究。
[1]Au YCL,Tsang WP,Tsang TY,et al.HPV?16 E6 upregulation of DNMT1 through repression of tumor suppressor p53[J].Oncol Rep,2010,24(6):1599?1604.
[2]Hanprasertpong J,Tungsinmunkong K,Chichareon S,et al.Correlation of p53 and Ki?67(MIB ?1) expressions with clinicopathological features and prognosis of early stage cervical squamous cell carcinomas[J].J Obstet Gynaecol Res,2010,36(3):572?580.DOI:10.1111/j.1447?0756.2010.01227.x.
[3]Pan H,Griep AE.Temporally distinct patterns of p53?dependent and p53?independent apoptosis during mouse lens development[J].Genes Dev,1995,9(17):2157?2169.
[4]Sova P,Feng Q,Geiss G,et al.Discovery of novel methylation biomarkers in cervical carcinoma by global demethylation and microarray analysis[J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prev,2006,15(1):114?123.DOI:10.1158/1055?9965.EPI?05?0323.
[5]Agrawal N,Dasaradhi PV,Mohmmed A,et al.RNA interference:biology,mechanism,and applications[J].Microbiol Mol Biol Rev,2003,67(4):657?685.
[6]Yang HJ.Aberrant DNA methylation in cervical carcinogenesis[J].Chin J Cancer,2013,32(1):42 ?48.DOI:10.5732/cjc.012.10033.
[7]Lindel K,Rieken S,Daffinger S,et al.The transcriptional regulator gene E2 of the Human papillomavirus(HPV) 16 influences the radiosensitivity of cervical keratinocytes[J].Radiat Oncol,2012,7:187.DOI:10.1186/1748?717X?7?187.
[8]Shin MK,Sage J,Lambert PF.Inactivating all three rb family pocket proteins is insufficient to initiate cervical cancer[J].Cancer Res,2012,72(20):5418?5427.DOI:10.1158/0008?5472.CAN?12?2083.
[9]Vallejo?Ruiz V,Velázquez?Márquez N,Sánchez?Alonso P,et al.Human papillomavirus E7 oncoprotein and its role in the cell transformation[J].Rev Med Inst Mex Seguro Soc,2015,53 Suppl 2:S172?177.
[10]Evan GI,Vousden KH.Proliferation,cell cycle and apoptosis in cancer[J].Nature,2001,411(6835):342 ?348.DOI:10.1038/35077213.
[11]Ting AH,Schuebel KE,Herman JG,et al.Short double?stranded RNA induces transcriptional gene silencing in human cancer cells in the absence of DNA methylation[J].Nat Genet,2005,37(8):906?910.DOI:10.1038/ng1611.
(本文編輯:吳曉初)
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Effects of a small interfering RNA targeting HPV16E7 on proliferation and apoptosis of SiHa cells and expressions of six tumor suppressor genes
Long Jia,Li Liming,Xu Cui,Yang Jia,Jiang Mingjun
Department of Dermatology,Shenzhen Second People's Hospital,The First Affiliated Hospital of Shenzhen University,Shenzhen 518035,China(Long J);Institute of Dermatology,Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College;Jiangsu Key Laboratory of Molecular Biology for Skin Diseases and STIs,Nanjing 210042,China(Li LM,Xu C,Yang J,Jiang MJ)
ObjectiveTo evaluate effects of human papilloma virus(HPV)16E7 on expressions of six tumor suppressor genes(including MT1G,NMES1,RRAD,SFRP1,SPARC and TFPI2)in a cell line SiHa,as well as on its proliferation and apoptosis.MethodsSiHa cells were divided into two groups to be transfected with a small interfering RNA targeting HPV16E7(E7SiRNA,experimental group)and an empty vehicle(negative control group)respectively,with SiHa cells receiving no treatment serving as the blank control group.After 48 hours,qPCR was performed to measure the mRNA expressions of E7 and six tumor suppressor genes,CCK?8 assay to evaluate cellular proliferative activity,and flow cytometry to assess apoptosis of SiHa cells.ResultsAt 48 hours after the transfection,the experimental group showed significantly decreased E7 mRNA expression(0.25±0.036,P< 0.05),but increased mRNA expressions of the six genes(MT1G 1.403±0.190,NMES1 1.720±0.060,RRAD 1.390±0.160,SFRP1 1.493±0.120,SPARC 2.157±0.144,TFPI2 2.060±0.122,allP<0.05).The proliferative activity of SiHa cells was significantly decreased(0.554±0.130vs.1.028±0.236 and 1.220±0.126,bothP<0.05),but the apoptosis rate was significantly increased(9.222%vs.0.246%and 0.123%,bothP< 0.05)in the experimental group compared with the negative control group and blank control group.No significant differences were observed between the negative control group and blank control group in proliferative activity or apoptosis rate of SiHa cells(bothP> 0.05).ConclusionE7 may participate in HPV16?induced cellular malignant transformation by suppressing the mRNA expressions of 6 tumor suppressor genes,including MT1G,NMES1,RRAD,SFRP1,SPAR and TFPI2.
Human papillomavirus 16;Papillomavirus E7 proteins;Cell proliferation;Apoptosis;SiRNA;Tumor suppressor genes
Jiang Mingjun,Email:drmingjunjiang@163.com
2016?03?02)
蔣明軍,Email:drmingjunjiang@163.com
10.3760/cma.j.issn.0412?4030.2016.10.009
國家自然科學(xué)基金(31470274);江蘇省臨床醫(yī)學(xué)研究中心項目(BL2012003);中央級公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費(2016RC310025)
Fund programs:National Natural Science Foundation of China(31470274);Clinical Research Center Program of Jiangsu Province(BL2012003);Special Fund for Basic Scientific Research Business of Central Public Research Institutes(2016RC310025)