胡曉丹， 任 芳， 南 洋

（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院， 遼寧 沈陽 110032）

實驗研究

清亮飲治療家兔玻璃體積血影響實驗研究

胡曉丹， 任 芳， 南 洋

（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院， 遼寧 沈陽 110032）

目的：觀察清亮飲對家兔玻璃體積血的影響，探討其可能的機制。方法：隨機將30只家兔按照性別分為正常組、模型組和治療組。正常組不給予任何干預(yù)措施，模型組和治療組給予自身血液推注造模，24h后觀察造模是否成功，造模成功后，治療組給予4.9g·kg-1·d-1清亮飲原藥治療，煎煮、濃縮后灌胃，治療8周后，觀察眼底可見度并進行分級評分，同時采用Elisa法檢測玻璃體液中IL-6、TNF-α含量。結(jié)果：與模型組比較，治療組家兔眼底可見度明顯改善（P＜0.05），玻璃液中TNF-α、IL-6的水平顯著降低（P＜0.05，P＜0.01）。結(jié)論：清亮飲對治療家兔玻璃體積血具有顯著作用，其機制可能與調(diào)節(jié)玻璃體液中IL-6、TNF-α水平有關(guān)，

清亮飲； 家 兔； 玻璃體積血； IL-6； TNF-α

玻璃體積血是常見的眼科疾病之一，主要由于外傷、高血壓動脈硬化、糖尿病等引起視網(wǎng)膜、葡萄膜血管等周圍血管組織破裂，血液流出并聚積于玻璃體腔內(nèi)而形成［1］。由于玻璃體自身并無血管，因此，如果長時間內(nèi)積血不被吸收則將引起玻璃體液化、濃縮，同時可出現(xiàn)纖維增殖、視網(wǎng)膜損傷等嚴(yán)重后果，甚至導(dǎo)致失明［2］。在玻璃體積血形成、吸收是一個多種細胞因子參與的過程，其中，IL-6和TNF-α是重要的炎性因子之一，本研究擬觀察清亮飲對家兔玻璃體積血吸收影響及對玻璃體液IL-6、TNF-α的影響，探討其可能的機制。

1 材料與方法

1.1 動物：健康純種日本大耳白兔30只，2～3月齡，體重1.5～2kg，雌雄各半，合格證編號SCXK（遼）2014 -0002，由沈陽藥科大學(xué)實驗動物中心提供，飼養(yǎng)于遼寧中醫(yī)藥大學(xué)SPF級實驗動物中心，自由攝食飲水。

1.2 藥物、試劑與儀器：清亮飲由熟地黃15g，山藥15g，玄參15g，天花粉10g，黨參10g，黃芪20g，茺蔚子10g，白茅根10g組成，氯霉素滴眼和阿托品滴眼液及全部藥材由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科提供。IL -6、TNF-αElisa檢測試劑盒購于南京建成生物工程研究所。酶標(biāo)儀：奧地利，Anthos2010。

1.3 方 法

1.3.1 分組、造模及給藥：30只家兔適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，保持室內(nèi)溫度25℃左右，濕度60%左右。根據(jù)雌雄采用分層隨機分為正常組、模型組、治療組。其中正常組10只不給予任何措施，其余20只家兔進行造模，造模前給予氯霉素滴眼液點眼以預(yù)防感染，并清潔結(jié)膜囊，散瞳后進行結(jié)膜麻醉，抽取自身耳緣靜脈血0.5mL備用，迅速用9號針頭于1點位距角膜緣3mm處直接刺透玻璃體，抽取玻璃體液0.2mL，并迅速注入備用血液0.2mL并立即拔出針頭，無菌棉簽按壓后。造模后用氯霉素滴眼和阿托品滴眼液滴眼24h，24h后觀察造模兔眼，直接檢驗鏡觀察眼底，出現(xiàn)紅細胞聚集于玻璃體凝膠現(xiàn)象，說明造模成功。造模成功后，根據(jù)人與兔等效給藥計量，治療組給予4.9g·kg-1·d-1清亮飲原藥治療，煎煮、濃縮后灌胃，正常組和模型組給予等量生理鹽水灌胃，治療8周。

1.3.2 指標(biāo)檢測及方法：治療8周后，按照文獻記載方法［3］觀察眼底可見度，并按照Forrester 5級分類法記錄積血變化情況，具體為，Ⅰ級：玻璃體完全不透明，Ⅱ級：眼底輕微可見，有輕微紅光反射，Ⅲ級：經(jīng)玻璃體間隙部分眼底可見，Ⅳ級：大部分眼底可見，玻璃體中央透明，周圍可見少量不透明渾濁物體，Ⅴ級：眼底清晰可見，玻璃體清晰透明。并對各組分級情況進行評分Ⅰ級記10分，Ⅱ級記8分，Ⅲ級記6分，Ⅳ級記4分，Ⅴ級記2分，計算各組平均評分。檢查后，氣栓法處死家兔，摘取眼球，收集視網(wǎng)膜及玻璃體液，5000r/ min離心，5min后收集上清液，-80℃保存?zhèn)溆谩２捎肊lisa法檢測玻璃體液中IL-6、TNF-α含量。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析：數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS19.0分析，實驗數(shù)據(jù)用（±s）表示組間比較采用兩獨立樣本t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 眼底可見度情況：治療8周后，模型組家兔玻璃體積血Ⅰ級6例，Ⅱ級2例，Ⅲ級2例，平均評分為（8. 8+1.68）分；治療組家兔玻璃體積血Ⅰ級2例，Ⅱ級2例，Ⅲ級3例，Ⅳ級2例，Ⅴ級1例，平均評分為（6.4± 2.63）分。與正常組比較，模型組總評分明顯升高，眼底可見度明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=-12.213，P ＜0.01），與模型組比較，治療組總評分降低，眼底可見度明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=-3.953，P＜0.05）。

表1 各組家兔眼底可見度分級情況（n=10，分）

2.2 各組家兔玻璃體液IL-6、TNF-α含量變化：治療8周后，與正常組比較，模型組家兔玻璃體液中IL-6、TNF-α含量顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=23.619，P＜0.05；t=11.842，P＜0.01）；與模型組比較，治療組家兔玻璃體液中IL-6、TNF-α含量顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=-9.397，P＜0.05；t=3.207，P＜0.05）。

表2 各組家兔玻璃體液IL-6、TNF-α含量變化（n=10，±s）

表2 各組家兔玻璃體液IL-6、TNF-α含量變化（n=10，±s）

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3 討 論

玻璃體積血主要是由于視網(wǎng)膜或葡萄膜組織血管破裂，血液進入玻璃體引起，是臨床常見的玻璃體病變，目前研究表明，當(dāng)玻璃體積血時，玻璃體內(nèi)出現(xiàn)大量巨噬細胞，發(fā)生炎癥反應(yīng)，生成大量炎性因子，既往研究發(fā)現(xiàn)TNF-α、IL-6在玻璃體積血中發(fā)揮重要作用，IL-6可誘導(dǎo)PVR的發(fā)生，在PVR的發(fā)生初期具有免疫和炎癥反應(yīng)的放大作用，TNF-α則在PVR的啟動和調(diào)控中發(fā)揮重要作用。中醫(yī)學(xué)將本病歸屬于“暴盲”、“云霧移睛”、“血灌瞳神”等研究范疇。目前對本病的治療西醫(yī)主要采取止血、抗凝、激光、手術(shù)等治療方法，中醫(yī)則采用活血化瘀的方法進行治療。

本研究采用筆者在臨床上應(yīng)用治療玻璃體積血的經(jīng)驗方劑“清亮飲”治療家兔玻璃體積血，并檢測其玻璃體液TNF-α、IL-6的水平變化，研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)清亮飲治療8周后，與模型組比較，治療組家兔眼底可見度明顯改善（P＜0.05），玻璃液中TNF-α、IL-6的水平顯著降低（P＜0.05，P＜0.01）。清亮飲由熟地黃，山藥，玄參，天花粉，黨參，黃芪，茺蔚子，白茅根等組成，全方配伍具有活血化瘀明目之功效。研究結(jié)果顯示本方對玻璃體積血具有良好的治療效果，同時能夠降低玻璃液中TNF-α、IL-6的水平，進而起到抑制PVR的形成。

［1］ 彭清華，李建超，張琳.散血明目片對兔玻璃體積血白細胞介素-6表達的影響［J］.中國中醫(yī)眼科雜志，2002，12 （2）：84～86.

［2］ 肖家翔，武艷燕，王文美.護網(wǎng)明目散治療實驗性玻璃體積血對視網(wǎng)膜保護作用的研究［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2010，25（9）：1502～1504.

［3］ 回世洋，張焱，朱寧云.清亮飲對兔眼玻璃體積血的療效及其作用機制研究［J］.江蘇中醫(yī)藥，2015，47（6）：77～79.

Experimental Study on Qing Liang Yin Treating Rabbits Vitreous Hemorrhage

HU Xiaodan， REN Fang， NAN Yang
（The Affiliated Hospital of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Liaoning Shenyang110032，China）

Objective：To observe the effect of qing liang yin for the rabbit vitreous hemorrhage and ex-plore its possible mechanism.Methods：30 rabbits were randomly divided into groups according to gender，model group and treatment group.Normal group was not given any intervention，the model group and the treatment group

autologous blood injection modeling，24h after the observation modeling success，after the model is successful，the treatment group

4.9g/kg/d drink clear the original drug therapy，fried cook and concentrated gavage，8 weeks after treatment，observation fundus visibility and grading，while using Elisa assay vitreous humor IL-6，TNF-α content.Results：Compared with model group，the treatment group rabbits fundus visibility improved significantly（P＜0.05），the molten glass TNF-α，IL-6 levels weresignificantly reduced（P＜0.05，P＜0.01）.Conclusion：Qing liang yin has a significant effect for the treatment of vitreous hemorrhage in rabbits，which may be related to regulating the vitreous humor IL-6，TNF-α levels related.

Qing Liang Yin； Rabbit； Vitreous hemorrhage； IL-6； TNF-α

1006-6233（2016）09-1509-03

A 【doi】10.3969/j.issn.1006-6233.2016.09.043

遼寧省沈陽市科技局課題，（編號：F13-316-1-56）

南 洋