張婧婧，王嘯，徐云霞，余永強(qiáng)，錢銀鋒

(安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院放射科，安徽 合肥　230022)

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Angiopep-2介導(dǎo)的雙靶向納米載體研究及其在大鼠C6膠質(zhì)瘤MR顯像中的價(jià)值

張婧婧，王嘯，徐云霞，余永強(qiáng)，錢銀鋒

(安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院放射科，安徽 合肥230022)

目的制備Angiopep-2介導(dǎo)的雙靶向納米載體對(duì)比劑，并從細(xì)胞和動(dòng)物水平評(píng)估其在膠質(zhì)瘤顯像中的價(jià)值。方法制備有和無Ang包裹的聚N,N-二乙基丙烯酰胺納米對(duì)比劑(NP、Ang-NP)。分別測(cè)定C6細(xì)胞株和腦毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞(BCECs)與NP、Ang-NP共培養(yǎng)不同時(shí)間的熒光強(qiáng)度；C6細(xì)胞球?qū)ng-NP攝取率和競(jìng)爭(zhēng)抑制實(shí)驗(yàn)；對(duì)C6膠質(zhì)瘤大鼠模型行標(biāo)注Ang和Gd3+的納米合成造影劑(Ang-NP-Gd)和扎特酸葡酸(DOTA-Gd)增強(qiáng)掃描，比較兩組腫瘤的CNR及對(duì)腫瘤邊界顯示情況。結(jié)果C6細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)Ang-NP-FITC均有明顯的攝??；C6腫瘤球?qū)θM攝取率順序?yàn)椋篈ng-NP>NP>Ang-NP +Angiopep-2；Ang-NP-Gd顯示腫瘤邊界較DOTA-Gd更清晰；CNR隨時(shí)間增大，在12 h達(dá)峰值。結(jié)論Angiopep-2與血管內(nèi)皮細(xì)胞及膠質(zhì)瘤細(xì)胞的低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白-1受體結(jié)合，具有很強(qiáng)的穿透血腦屏障及進(jìn)入腦膠質(zhì)瘤的能力。

磁共振成像/方法;納米共軛體;神經(jīng)膠質(zhì)瘤;分子靶向治療;大鼠,Sprague-Dawley

膠質(zhì)瘤是成人中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的原發(fā)性腫瘤，發(fā)病率為(5～10)/10萬人[1]；膠質(zhì)瘤多呈侵襲性生長(zhǎng)，具有不易早期診斷、治療效果差、易復(fù)發(fā)、高死亡率等特點(diǎn)[2]。目前將Gd與納米聚合物結(jié)合的納米系統(tǒng)是研究腦腫瘤顯像的熱門方法，但是僅僅將藥物與納米粒子連接形成的非靶向納米聚合物對(duì)比劑的顯影效果仍不理想。為了提高納米聚合物靶向效能，納米聚合物需結(jié)合具有特殊功能的配體，常分為細(xì)胞穿透肽和主動(dòng)靶向性配體。前者主要是通過提高細(xì)胞膜通透性，但缺乏對(duì)正常及異常細(xì)胞的選擇性；而主動(dòng)靶向性配體是通過腫瘤細(xì)胞上特殊的靶向受體-配體效應(yīng)而得名，用于增加血腦屏障(brain blood barrier,BBB)的通透性[3]。低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白(low-density lipoprotein receptor-related protein,LRP)在脂蛋白、蛋白酶/蛋白酶抑制劑復(fù)合體、細(xì)胞外基質(zhì)蛋白等介導(dǎo)跨BBB轉(zhuǎn)運(yùn)的配體上高表達(dá)[4]；而Angiopep-2是一種序列類似于LRP的新型多肽，其跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)效率明顯高于轉(zhuǎn)鐵蛋白(Tf)[5-6]，LRP-1受體在血管內(nèi)皮細(xì)胞及膠質(zhì)瘤中均有表達(dá)[7]，增加了Angiopep-2通過BBB轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入腦腫瘤。課題前期已合成經(jīng)Angiopep-2修飾的納米對(duì)比劑，本研究主要從細(xì)胞和動(dòng)物水平評(píng)估其在膠質(zhì)瘤中的顯像價(jià)值，為腦膠質(zhì)瘤的靶向性顯影提供新的研究方向。

1　資料與方法

1.1材料與儀器雙靶向納米聚合物(PDEA)-b-P(OEGMA-co-Gd-co-ANG-co-FITC)(由本課題前期合成)；Angipep-2(強(qiáng)耀多肽公司)；C6細(xì)胞株(中科院生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所)；紅細(xì)胞裂解液(碧云天生物制劑公司)；多聚賴氨酸(美國(guó)Sigma公司)；小牛血清(杭州四季清公司)。熒光分光光度計(jì)F-4600(日本 Hitachi公司)；高分辨透射電子顯微鏡HRTEM(美國(guó) FEI 公司)；1.5T HDx全身超導(dǎo)MRI(美國(guó)GE公司)。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF級(jí)雄性SD大鼠，體質(zhì)量(265±15)g，由安徽省動(dòng)物中心提供，購(gòu)入后在 SPF級(jí)動(dòng)物房喂養(yǎng)，光照/黑暗時(shí)間為12 h/12 h，環(huán)境溫度為25 ℃，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1弛豫率的測(cè)定將alkynyl-DOTA-Gd、CD-PDEA-b-P(OEGMA-co-Gd-co-ANG)分別配成濃度為0、0.005、0.010、0.020、0.030、0.040、0.050、0.060 mmol·L-1，取2 mL裝入5 mL離心管內(nèi)，1.5T MRI，柔性線圈，行自旋回波(spin echo,SE)T1WI掃描，回波時(shí)間(echo time,TE)固定為14 ms，重復(fù)時(shí)間(repetition time,TR)分別設(shè)為300、400、500、600、800、1 000 ms，采集MRI圖像，測(cè)定各濃度兩對(duì)比劑的信號(hào)強(qiáng)度，計(jì)算出各濃度的T1值，將1/T1對(duì)對(duì)比劑濃度作圖，直線的斜率為對(duì)比劑的弛豫度。

1.3.2細(xì)胞對(duì)納米聚合物的攝取率分別以每孔濃度2×105個(gè)C6、腦毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞(BCECs)細(xì)胞接種于細(xì)胞培養(yǎng)皿中。24 h后置換培養(yǎng)基，并分別加入50 mg·L-1ANG-NP-FITC，培養(yǎng)30 min、2、4 h。再將C6細(xì)胞分別與NP-FITC及ANG-NP-FITC培養(yǎng)15、30 min、1、2、4 h后，PBS洗3次，吸去培養(yǎng)液，PBS 洗滌3次，離心收集，配置細(xì)胞懸液，采用流式細(xì)胞儀分析熒光強(qiáng)度。

1.3.3膠質(zhì)瘤腫瘤細(xì)胞球?qū)嶒?yàn)及競(jìng)爭(zhēng)性抑制實(shí)驗(yàn)(1)體外膠質(zhì)瘤腫瘤細(xì)胞球的建立：吸取加有瓊脂糖無血清的DMEM溶液?jiǎn)螌悠戒佊谂囵B(yǎng)皿(直徑90 mm)，然后在每孔內(nèi)加細(xì)胞濃度為2×103含有血清DMEM的細(xì)胞懸液，置于37 ℃、5%CO2的培養(yǎng)箱。培養(yǎng)第4天換液，后每2 d換液一次并觀察細(xì)胞球的生長(zhǎng)狀況;(2)膠質(zhì)瘤細(xì)胞球?qū)﹄p靶向納米粒子的攝取率及競(jìng)爭(zhēng)性試驗(yàn)：將含有異硫氰酸熒光劑(FITC)標(biāo)記的納米聚合物(200 mg·L-1)與膠質(zhì)瘤腫瘤細(xì)胞球分別共培養(yǎng)30 min、4、24 h。用冷PBS清洗膠質(zhì)瘤腫瘤細(xì)胞球4次，采用流式細(xì)胞儀測(cè)量熒光強(qiáng)度。競(jìng)爭(zhēng)抑制實(shí)驗(yàn)將上述C6腫瘤細(xì)胞球與1 mL的Angiopep-2 (200 mg·L-1)先培養(yǎng)60 min后重復(fù)上述操作。

1.3.4大鼠腦C6膠質(zhì)瘤模型的建立采用大鼠腦內(nèi)立體定向尾狀核區(qū)注射法建立C6腦膠質(zhì)瘤模型[8]。

1.3.5雙靶向納米粒子在大鼠膠質(zhì)瘤模型的顯影效果(1)將24只雄性成年SD大鼠隨機(jī)分為3組，每組8只。A組為注射標(biāo)記Angiopep2-NP組，B組為非靶向NP組，C組為空白對(duì)照組;(2)于大鼠膠質(zhì)瘤模型建立后第4天開始，每2 d進(jìn)行一次MRI成像，直至B組全部動(dòng)物均在T1WI上顯示強(qiáng)化的腫瘤;(3)10%水合氯醛麻醉大鼠，行三平面定位掃描后，分別行顱腦及腹部MR軸位及冠狀位T1WI、T2WI掃描；通過鼠尾靜脈A組注入Gd3+濃度為2 mg·kg-1的納米載體，B組注入2 mg·kg-1的Gd-DTPA組。分別于注入后即刻、10、20 min、1、4、12、24、48 h行軸位及冠狀位增強(qiáng)T1WI，掃描參數(shù)：矩陣256×192，F(xiàn)OV 8 cm×8 cm，層厚1 mm，間距0.5 mm。T1WI：FSE序列TR/TE = 300 ms/9.2 ms。T2WI：FSE序列，TR/TE = 2000 ms/126 ms。NEX = 4～6。測(cè)量平掃及增強(qiáng)后腫瘤實(shí)性部分、周圍正常組織的信號(hào)強(qiáng)度，背景信號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)差，計(jì)算對(duì)比噪聲比(contrast noise ratio,CNR)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS16.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。使用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)或者兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1雙靶向納米對(duì)比劑的弛豫率測(cè)量不同TR值、不同濃度Gd3+時(shí)Angiopep2-雙靶向?qū)Ρ葎┘{米載體和Gd-DOTA對(duì)應(yīng)的信號(hào)強(qiáng)度，用軟件計(jì)算出Gd-DOTA、CD-PDEA-b-P(OEGMA-co-Gd-co-ANG)的縱向弛豫率分別為3.1及14.5 mmol·L-1·s-1(圖1、圖2)。

圖1　CD-PDEA-b-P(OEGMA-co-Gd-co-ANG)和Gd-DOTA

圖2　CD-PDEA-b-P(OEGMA-co-Gd-co-ANG)和Gd-DOTA縱向弛豫率曲線

2.2細(xì)胞攝取率在30 min、2、4 h，內(nèi)皮細(xì)胞和C6細(xì)胞均攝取標(biāo)有FITC的靶向?qū)Ρ葎?；隨著時(shí)間延長(zhǎng)，細(xì)胞的熒光強(qiáng)度逐漸增加(圖3)。ANG-NP-FITC熒光強(qiáng)度均明顯高于NP-FITC(圖4)。

注：A～C為標(biāo)有FITC的Angiopep-2修飾的靶向?qū)Ρ葎┡c血管內(nèi)皮細(xì)胞作用30 min、2、4 h后熒光效果；D～F為標(biāo)有FITC的Angiopep-2修飾的靶向?qū)Ρ葎┡cC6細(xì)胞共培養(yǎng)30 min、2、4 h后的熒光效果。

圖3熒光顯像圖

注：C6細(xì)胞與濃度為300 mg·L-1標(biāo)有FITC的CD-PDEA-P(OEGMA-co-GMA(N3))和CD-PDEA-b-P(OEGMA-co-Gd-co-ANG)在不同時(shí)間共培養(yǎng)后的熒光強(qiáng)度變化曲線，ANG-NP-FITC組與NP-FITC組相比，P<0.05。

圖4各組不同時(shí)間共培養(yǎng)后的熒光強(qiáng)度變化曲線

2.3C6腫瘤細(xì)胞球攝取率及競(jìng)爭(zhēng)抑制細(xì)胞培養(yǎng)24～48 h后，由5～60個(gè)細(xì)胞聚集而成的細(xì)胞團(tuán)形成，但仍較疏松且存在游離的單個(gè)細(xì)胞。4 d后，細(xì)胞相互聚集呈球體，此時(shí)球體不易被吸管或其他器械沖散。隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞球體積逐漸增大。流式細(xì)胞儀顯示4 h時(shí)熒光在C6細(xì)胞球邊緣聚集，隨著時(shí)間延長(zhǎng)，膠質(zhì)瘤細(xì)胞球中心靶向?qū)Ρ葎┚奂黠@(圖5)。當(dāng)C6細(xì)胞球與Angiopep-2先作用60 min再加Ang-NP-FITC后，熒光強(qiáng)度較前明顯減低。C6細(xì)胞分別與NP-FITC、Ang-NP-FITC及Angiopep-2+Ang-NP-FITC三組共培養(yǎng)24 h后熒光強(qiáng)度見圖6，ANG-NP組與Angiopep-2+ANG-NP組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。

注：A～C為ANG-NP-FITC與細(xì)胞球共培養(yǎng)30 min、4、24 h后熒光顯像；D～F為200 mg·L Angiopep-2先與C6細(xì)胞球培養(yǎng)60 min后，再加ANG-NP 30 min、4、24 h后熒光顯像。

圖5熒光顯像圖

注：ANG-NP組與Angiopep-2+ANG-NP組相比，*P<0.05。

圖6各組熒光強(qiáng)度對(duì)比圖

2.4MRI測(cè)量靶向?qū)Ρ葎?duì)大鼠腦膠質(zhì)瘤模型靶向強(qiáng)化效果

2.4.1腦膠質(zhì)瘤MRI增強(qiáng)掃描的CNR腦內(nèi)膠質(zhì)瘤模型建立4 d后，行1.5T磁共振分別行T1WI、T2WI序列掃描后，在10 min左右出現(xiàn)輕度強(qiáng)化，12 h時(shí)CNR達(dá)最大值，24 h時(shí)CNR出現(xiàn)下降，48 h時(shí)CNR進(jìn)一步減低(圖7)。

圖7　尾靜脈注射ANG-NP后不同時(shí)間的CNR值

2.4.2大鼠腦膠質(zhì)瘤MRI增強(qiáng)掃描行Angiopep-2修飾的納米聚合物對(duì)比劑尾靜脈注射，10 min后腫瘤出現(xiàn)輕度強(qiáng)化，4 h時(shí)腫瘤輪廓顯示較前清晰，且隨時(shí)間延長(zhǎng)強(qiáng)化越明顯，12 h時(shí)腫瘤呈明顯強(qiáng)化(圖8A)；在4 h左右門靜脈出現(xiàn)強(qiáng)化。而給予常規(guī)對(duì)比劑Gd-DTPA后腫瘤強(qiáng)化程度輕且輪廓顯示較差(圖8B)。

注：A為CD-PDEA-b-P(OEGMA-co-Gd-co-ANG)注射后12 h時(shí)T1WI，腫瘤呈明顯強(qiáng)化，且邊界清晰；B為Gd-DTPA注射后10 min的T1WI，腫瘤邊緣輕度強(qiáng)化，邊界模糊。

圖8大鼠腦膠質(zhì)瘤MR增強(qiáng)

3　討論

本課題使用的靶向納米聚合物對(duì)比劑中的Angiopep-2(TFFYGGSRGKRNNFKTEEY)是一種新型多肽，其相對(duì)分子質(zhì)量為2.4×104，通過血管內(nèi)皮細(xì)胞及膠質(zhì)瘤細(xì)胞上均表達(dá)的LRP-1受體介導(dǎo)增加跨BBB轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入腦組織，因而得名雙級(jí)靶向[9]。Hobbs等[10]證實(shí)納米粒子直徑在200～1 200 nm之間時(shí)有滲透增強(qiáng)和滯留效應(yīng)(enhanced permeability and retention，EPR)；而平均直徑接近100 nm的納米粒子具有更長(zhǎng)的血液循環(huán)時(shí)間且單核細(xì)胞吞噬作用減低。本課題合成的靶向納米聚合物CD-PDEA-b-P(OEGMA-co-Gd-co-ANG)直徑約為130 nm。

本研究合成的靶向納米聚合物對(duì)比劑的弛豫率斜率明顯高于DOTA-Gd，這是由于納米合成聚合物對(duì)比劑體積大使其旋轉(zhuǎn)速率減慢，旋轉(zhuǎn)相關(guān)時(shí)間延長(zhǎng)，因而水質(zhì)子的弛豫速率得到顯著提高。Angiopep-2修飾的靶向納米聚合物在活體內(nèi)的生物學(xué)分布情況與NPs表面修飾有關(guān)。一方面PDEA基團(tuán)是親水性基團(tuán)，納米聚合物能延長(zhǎng)循環(huán)時(shí)間，增強(qiáng)納米聚合物EPR效應(yīng)從而增加納米聚合物的被動(dòng)靶向效應(yīng)；另一方面Angiopep-2修飾后能進(jìn)一步識(shí)別血管及膠質(zhì)瘤細(xì)胞表面的LRP-1受體，介導(dǎo)受體-配體特異性結(jié)合靶向的轉(zhuǎn)運(yùn)效應(yīng)增加，導(dǎo)致腫瘤區(qū)域納米聚合物進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)更多。

大量研究探索能通過BBB和膠質(zhì)瘤的信號(hào)通路，發(fā)現(xiàn)LRP-1受體能在BBB和膠質(zhì)瘤細(xì)胞上同時(shí)表達(dá)[4,11-12]。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)Angiopep-2與LRP-1受體之間有高親和力[13-15]，因此本課題選用Angiopep-2作為穿透BBB和膠質(zhì)瘤的配體。通過流式細(xì)胞儀直觀觀察C6細(xì)胞對(duì)靶向納米聚合物對(duì)比劑的攝取，發(fā)現(xiàn)C6細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞與FITC標(biāo)記的Angiopep-2修飾的靶向?qū)Ρ葎┕才囵B(yǎng)2 h左右出現(xiàn)熒光效應(yīng)，證明C6細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞上均存在LRP-1受體；隨著時(shí)間延長(zhǎng)，C6細(xì)胞與靶向?qū)Ρ葎┳饔媒M的熒光效應(yīng)更明顯，表明隨時(shí)間延長(zhǎng)，Angiopep-2修飾的靶向?qū)Ρ葎┡cLRP-1受體作用更多，因而腫瘤組織的顯影效果更好。所以，Angiopep-2修飾的靶向?qū)Ρ葎?duì)膠質(zhì)瘤的顯影有明顯改善。與文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果一致[14,16]。

不同于單個(gè)細(xì)胞的培養(yǎng)，Zhang等[17]研究表明乏血供的腫瘤球能刺激局部實(shí)體瘤的乏血供區(qū)域，因而更接近實(shí)體瘤內(nèi)局部缺氧、壞死區(qū)域缺血、低滲透效應(yīng)的環(huán)境。Xin等[9]研究發(fā)現(xiàn)用羅丹明B異硫氰酸酯(RBITC)標(biāo)記的ANG-PEG-NP組比RBITC標(biāo)記的PEG-NP組在膠質(zhì)瘤細(xì)胞球內(nèi)的熒光效應(yīng)更明顯，且RBITC標(biāo)記的ANG-PEG-NP組在正常腦細(xì)胞中無明顯熒光表達(dá)，這與本研究結(jié)果相同。本研究采用C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞球模型來評(píng)估靶向?qū)Ρ葎┐┩笇?shí)體瘤的效率，結(jié)果顯示出非靶向?qū)Ρ葎┰贑6細(xì)胞球邊緣聚集，而經(jīng)Angiopep-2修飾的靶向?qū)Ρ葎┰缙谠诩?xì)胞球邊緣聚集，且隨著時(shí)間延長(zhǎng)，熒光效應(yīng)明顯，且膠質(zhì)瘤細(xì)胞球中心區(qū)也可見靶向?qū)Ρ葎┚奂１砻鹘?jīng)Angiopep-2修飾的靶向?qū)Ρ葎┲饕ㄟ^與腫瘤細(xì)胞表面LRP-1受體特異性結(jié)合而具有強(qiáng)穿透性，證明雖然膠質(zhì)瘤實(shí)體腫瘤致密，但靶向?qū)Ρ葎┤阅芡ㄟ^受體介導(dǎo)作用滲透入腫瘤的中心；同時(shí)證明了靶向?qū)Ρ葎?yīng)用于腫瘤的乏血供區(qū)域的價(jià)值。而將Angiopep-2先與C6細(xì)胞作用60 min后，再加入Ang-NP-FITC培養(yǎng)30 min、4 h、24 h后熒光強(qiáng)度明顯減低，與ANG-NP-FITC組熒光強(qiáng)度變化相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明Angiopep-2介導(dǎo)了靶向?qū)Ρ葎┐┩窩6腫瘤細(xì)胞球的效應(yīng)，同時(shí)也證明了C6細(xì)胞球上存在LRP-1受體。比較NP-FITC、Ang-NP-FITC及Ang-NP-FITC+Angiopep-2組分別與C6細(xì)胞球作用24 h的熒光強(qiáng)度順序?yàn)椋篈ng-NP-FITC>NP-FITC>Ang-NP-FITC+Angiopep-2。表明預(yù)先經(jīng)Angiopep-2作用后，前者與LRP-1受體結(jié)合飽和后，靶向?qū)Ρ葎o法再發(fā)揮作用。表明靶向?qū)Ρ葎┲饕ㄟ^與腫瘤細(xì)胞表面LRP-1受體特異性結(jié)合而具有強(qiáng)穿透效率，因而Angiopep-2作為膠質(zhì)瘤靶向?qū)Ρ葎┌邢蛐燥@影的配體存在明顯優(yōu)勢(shì)。

本研究中選取腦膠質(zhì)瘤建模后第4 d行MRI檢查，注射靶向與非靶向?qū)Ρ葎┖螅邢驅(qū)Ρ葎?qiáng)化程度較DOTA-Gd明顯，在20 min時(shí)靶向?qū)Ρ葎┏霈F(xiàn)強(qiáng)化，且隨時(shí)間延長(zhǎng)，膠質(zhì)瘤邊界較后者清晰，強(qiáng)化程度較后者明顯。注射Ang-NP-Gd后CNR在10 min時(shí)出現(xiàn)升高，隨時(shí)間延長(zhǎng)CNR不斷增大，在12 h后出現(xiàn)高峰，24 h時(shí)減低，48 h后進(jìn)一步減低。反映了經(jīng)Angiopep-2修飾的靶向?qū)Ρ葎┚哂邪邢蜃饔糜谘軆?nèi)皮細(xì)胞及腦腫瘤，能穿透血腦屏障，靶向性顯示腦膠質(zhì)瘤，且能較清晰勾畫腫瘤的邊界。同時(shí)，CNR在24 h左右開始出現(xiàn)下降，說明靶向?qū)Ρ葎┑拇x過程，也提供了進(jìn)行增強(qiáng)掃描的時(shí)間段。

綜上所述，細(xì)胞和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，經(jīng)Angiopep-2修飾的雙靶向納米聚合物對(duì)比劑通過與血管內(nèi)皮細(xì)胞及膠質(zhì)瘤細(xì)胞上的LRP-1受體結(jié)合，具有明顯的穿透效應(yīng)，增強(qiáng)掃描具有良好的膠質(zhì)瘤靶向性、且對(duì)腫瘤邊界的顯示清晰，這些發(fā)現(xiàn)能夠?yàn)槟z質(zhì)瘤的檢出和治療提供新的研究思路。

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Angiopep-2 mediated dual-targeting nanoparticle carrier and its value on magnetic resonance imaging of C6 glioma rat

ZHANG Jingjing,WANG Xiao,XU Yunxia,et al

(DepartmentofRadiology,TheFirstAffiliatedHospitalofAnhuiMedicalUniversity,Hefei,Anhui230022,China)

ObjectiveTo prepare Angiopep-2 mediated dual-targeting nanoparticle and to explore its targeting ability at cellular level and in animals.MethodsC6 cells and endothelial cells were incubated with Ang-NP-FITC and NP-FITC at different time,and the fluorescence intensity was assayed.The uptake of C6 glioma spheroids to Ang-NP and its competitive inhibition were observed with flow cytometry.Ang-NP-Gd or NP-Gd was respectively injected in rat C6 glioma model.The CNR of tumors were measured and compared between two groups,and the boundaries of tumors were compared.ResultsThe uptake of C6 cells and endothelial cells to Ang-NP-FITC was obvious.The order of fluorescence intensity of C6 glioma spheroids was Ang-NP-FITC,NP-FITC and Ang-NP-FITC+Angiopep-2 in descending order.With Ang-NP-Gd enhancement,the boundary of tumors was clearer.CNR was increased by time and reached the top at 12 h.ConclusionsAngiopep-2 combined with LDL receptor related protein-1 receptor of vascular endothelial cell and glioma cell,which has very strong ability to penetrate the BBB and enter the brain glioma.

Magnetic resonance imaging/methods;Nanoconjugates;Glioma;Molecular targeted therapy;Rats,sprague-dawley

安徽省自然科學(xué)基金(No 1308085MH166)

錢銀鋒，男，副教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：中樞神經(jīng)系統(tǒng)影像診斷， E-mail：894206876@qq.com

10.3969/j.issn.1009-6469.2016.08.008

2016-04-17，

2016-06-20)