朱向陽，王香花

(湖南省益陽醫(yī)專附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，湖南 益陽 413000)

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ILK在宮頸癌組織中的表達(dá)及宮頸癌細(xì)胞侵襲能力的影響

朱向陽，王香花

(湖南省益陽醫(yī)專附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，湖南 益陽 413000)

目的探討整合素鏈接激酶(ILK)在宮頸癌組織中的表達(dá)情況及其與宮頸癌細(xì)胞的侵襲能力的相關(guān)性。方法采用免疫組化法對湖南省益陽醫(yī)專附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科收集的59例宮頸上皮瘤變(CIN)標(biāo)本、44例術(shù)后病例確診的宮頸癌標(biāo)本及30例病理檢查為正常宮頸組織的標(biāo)本進(jìn)行檢測，分析ILK在上述幾種組織標(biāo)本中的表達(dá)水平，并分析ILK表達(dá)與宮頸癌患者的臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果宮頸癌組織中的ILK表達(dá)陽性率(86.36%)顯著的高于CINI級標(biāo)本的(62.5%)、CINⅡ～Ⅲ級標(biāo)本的(65.71%)及正常宮頸組織標(biāo)本的(23.33%)(χ2值分別為5.144、4.725、29.737，均P<0.05)。CINⅠ級標(biāo)本患者的ILK表達(dá)陽性率(62.5%)、CINⅡ～Ⅲ級標(biāo)本的(75.71%)均顯著的高于正常宮頸組織標(biāo)本(23.33%)(χ2值分別為8.472、11.675，均P<0.05)。ILK在宮頸癌組織中的表達(dá)與宮頸癌的低分化程度、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、深度的肌層浸潤具有相關(guān)性(χ2值分別為5.173、4.810、4.020，均P<0.05)，與年齡、FIGO分期、組織學(xué)類型無顯著相關(guān)性(χ2值分別為0.275、1.991、0.129，均P>0.05)。結(jié)論ILK在宮頸癌組織中顯著的高表達(dá)，同時與宮頸癌的分化程度、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、深度的肌層浸潤具有相關(guān)性。

整合素鏈接激酶；宮頸癌組織；宮頸癌細(xì)胞；侵襲能力

[Abstract]ObjectiveToinvestigatetheexpressionofintegrinlinkedkinase(ILK)incervicalcancertissuesanditscorrelationwiththeinvasiveabilityofcervicalcancercells.MethodsByusingimmunohistochemicalmethodexpressionsofILKweredetectedinspecimensof59casesofcervicalintraepithelialneoplasia(CIN), 44casesofcervicalcancerdiagnosedaftersurgeryand30caseswithnormalcervicaltissuescollectedinAffiliatedHospitalofHunanMedicalCollegeinYiyangCity.TherelationshipbetweentheexpressionofILKandclinicalandpathologicalfeaturesofcervicalcancerpatientswasanalyzedaswell.ResultsThepositiveexpressionrateofILKincervicalcancertissues(86.36%)wassignificantlyhigherthanthatinspecimensfrompatientswithCINⅠ (62.5%),frompatientswithCINⅡ-Ⅲ (65.71%)andfromnormalcervicaltissue(23.33%) (χ2valuewas5.144, 4.725and29.737,respectively,allP<0.05).ThepositiveexpressionrateofILKinCINⅠsamples(62.5%)andCINⅡ-Ⅲsamples(75.71%)wassignificantlyhigherthanthatinnormalcervicaltissuespecimens(23.33%) (χ2valuewas8.472and11.675,respectively,bothP<0.05).TheexpressionofILKincervicalcancertissueswascorrelatedwithlowdifferentiationdegree,lymphnodemetastasisanddeepmyometrialinvasion(χ2valuewas5.173, 4.810and4.020,respectively,allP<0.05),butnotcorrelatedwithage,FIGOstageandhistologicaltype(χ2valuewas0.275, 1.991and0.129,respectively,allP>0.05).ConclusionTheexpressionofILKissignificantlyhighincervicalcancertissues,anditiscorrelatedwiththedegreeofdifferentiation,lymphnodemetastasisanddeepmyometrialinvasion.

[Keywords]integrinlinkedkinase(ILK);cervicalcancertissue;cervicalcancercell;invasionability

宮頸癌作為女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，其病死率一直維持在較高水平，有報道大陸地區(qū)女性宮頸癌術(shù)后5年生存率不足30%，而臨床上有關(guān)宮頸癌預(yù)后判斷的指標(biāo)較少，僅僅依靠婦科腫瘤指標(biāo)對于預(yù)后進(jìn)行判斷遠(yuǎn)遠(yuǎn)滿足不了宮頸癌特別是根治性手術(shù)后相關(guān)臨床預(yù)后的判斷[1]。而整合素鏈接激酶(integrinlinkedkinase，ILK)近幾年被發(fā)現(xiàn)在胃癌、膀胱癌以及宮頸癌中異常表達(dá)[2]。本研究通過對59例宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervicalintraepithelialneoplasia，CIN)標(biāo)本、44例宮頸癌標(biāo)本及30例正常宮頸組織標(biāo)本的研究，揭示整合素鏈接激酶對于宮頸癌相關(guān)臨床預(yù)后的潛在參考價值。

1對象與方法

1.1研究對象

選取湖南省益陽醫(yī)專附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科收集的59例宮頸上皮瘤變(CIN)標(biāo)本、44例術(shù)后病例確診的宮頸癌標(biāo)本及30例病理檢查為正常宮頸組織的標(biāo)本作為研究對象。CIN組標(biāo)本59例，其中CINⅠ級24例、CINⅡ級20例，CINⅢ級15例，年齡30～70歲，平均年齡(49.24±10.67)歲；宮頸癌標(biāo)本44例，年齡37～67歲，平均年齡(51.26±9.47)歲，根據(jù)國際婦產(chǎn)聯(lián)盟(InternationalFederationofgynecologyandobstetrics，F(xiàn)IGO)分期：Ⅰ期8例、Ⅱ期17例、Ⅲ期12例、Ⅳ期7，分化程度：高分化18例、中分化13例、低分化13例，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移18例、未出現(xiàn)轉(zhuǎn)移26例。正常宮頸組織標(biāo)本30例，年齡41～65歲，平均年齡(50.48±6.92)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①宮頸癌組織標(biāo)本、宮頸上皮瘤變組織標(biāo)本為本院手術(shù)后切除后經(jīng)病理學(xué)明確診斷的標(biāo)本；②正常宮頸組織標(biāo)本為本院門診實(shí)施婦科檢查，取活組織經(jīng)病理檢查正常的標(biāo)本；③所有研究對象近期未接受激素類等藥物治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①未進(jìn)行明確的病理學(xué)診斷的患者；②近期應(yīng)用抗病毒、激素類藥物治療的患者。3種類型的宮頸組織標(biāo)本患者的年齡構(gòu)成差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。

1.2標(biāo)本采集

宮頸癌組織標(biāo)本、宮頸上皮內(nèi)瘤變標(biāo)本以及正常宮頸組織標(biāo)本均為本院婦科有經(jīng)驗(yàn)的宮頸領(lǐng)域?qū)＜也杉?，采集過程較為一致，其中宮頸癌標(biāo)本為宮頸癌根治性手術(shù)切除的部分原位宮頸腫瘤組織，CIN組織為本院婦科陰道鏡門診CIN病變患者術(shù)中切除的部分宮頸病變組織，而正常宮頸組織為本院婦科門診超聲聚焦治療門診對于宮頸糜爛以及部分宮頸息肉患者術(shù)中切除的部分宮頸組織，所有患者均知曉本次研究并簽署相關(guān)知情同意書。標(biāo)本采集后統(tǒng)一放置4℃冰箱保存。

1.3檢測方法

采用免疫組化技術(shù)檢測整合素鏈接激酶在宮頸癌、宮頸上皮內(nèi)瘤變以及正常宮頸組織中的表達(dá)，操作過程采用標(biāo)準(zhǔn)的石蠟切片法，整合素鏈接激酶相關(guān)一抗以及二抗均為南京凱基生物科技有限公司生產(chǎn)，二抗孵育后相關(guān)熒光的檢測采用熒光顯微鏡觀察(荷蘭phenom飛納高分辨率熒光顯微鏡)。

1.4免疫組化判定標(biāo)準(zhǔn)

免疫組織化學(xué)法的結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)，ILK陽性表達(dá)細(xì)胞表現(xiàn)為細(xì)胞漿黃色、棕黃色著色，按照著色強(qiáng)度進(jìn)行分級，共分為4級。0分：無色；淡黃色：1分；棕黃色：2分，褐色：3分；顯微鏡下染色陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)：1%～25%：1分；26%～50%：2分；51%～75%：3分；>75%:4分；兩個得分項(xiàng)目相加為最終評分，(-)為總分<3分，陰性表達(dá)；(+)為3分，弱陽性表達(dá)；(++)為4分，中陽性表達(dá)；(+++)為5分及以上，強(qiáng)陽性表達(dá)。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2結(jié)果

2.1不同類型的組織標(biāo)本中整合素鏈接激酶的表達(dá)情況

宮頸癌組織中的ILK表達(dá)陽性率86.36%顯著的高于CINⅠ級標(biāo)本、CINⅡ～Ⅲ級標(biāo)本及正常宮頸組織，且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為5.144、4.725、29.737，均P<0.05)。CINⅠ級標(biāo)本患者的ILK表達(dá)陽性率、CINⅡ～Ⅲ級標(biāo)本的陽性率均顯著的高于正常宮頸組織標(biāo)本，且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為8.472、11.675，均P<0.05)。CINⅠ級標(biāo)本患者的ILK表達(dá)陽性率與CINⅡ～Ⅲ級標(biāo)本患者的陽性表達(dá)率之間差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.064，P>0.05)，見表1。

免疫組化染色圖見圖1(×200倍)，圖1A為正常宮頸組織的免疫組化染色圖，可見幾乎沒有黃色著色，圖1B為CINⅠ級標(biāo)本可見胞漿呈淡黃色著色，圖1C為CINⅢ級標(biāo)本可見胞漿呈淺黃色著色，著色程度較CINⅠ級標(biāo)本略深，圖1D為宮頸低分化鱗癌免疫組化染色，呈深棕黃色著色。

表1不同類型的組織標(biāo)本中ILK的表達(dá)情況(n)

Table 1　Expressions of ILK in different types of　tissue specimens(n)

圖1不同類型的宮頸組織免疫組化染色圖(×200倍)

Fig.1Immunohistochemicalstainingofdifferenttypesofcervicaltissues(×200倍)

2.2宮頸癌組織中整合素鏈接激酶表達(dá)情況與患者的臨床及病理特征的關(guān)系分析

ILK在宮頸癌組織中的表達(dá)與宮頸癌的低分化程度、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、深度的肌層浸潤具有相關(guān)性(均P<0.05)，與年齡、FIGO分期、組織學(xué)類型無顯著相關(guān)性(均P>0.05)，見表2。

表2宮頸癌組織中ILK表達(dá)情況與患者的臨床及病理特征的關(guān)系分析[n(%)]

Table 2 Relationship between ILK expression and clinical　and pathological features of cervical cancer tissue[n(%)]

(轉(zhuǎn)下表)

(續(xù)上表)

臨床及病理因素例數(shù)(n) ILK表達(dá)性質(zhì) 陰性(%)弱陽性(%)χ2PFIGO分期1.9910.158 Ⅰ+Ⅱ255(20.00)20(80.00) Ⅲ+Ⅳ191(5.26)18(94.74)分化程度5.1730.023 高分化185(27.78)13(72.22) 中+低分化261(3.85)25(96.15)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移4.8100.028 是18018(100.00) 否266(23.08)20(76.92)組織學(xué)類型0.1290.720 鱗癌324(12.50)28(87.50) 腺癌122(16.67)10(83.33)肌層浸潤4.0200.045 深205(25.00)15(75.00) 淺241(4.17)23(95.83)

3討論

3.1整合素鏈接激酶臨床研究背景

整合素鏈接激酶為絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，迄今為止已被發(fā)現(xiàn)在多種生物中廣泛存在，而在人染色體上包含著3個結(jié)構(gòu)上高度保守的區(qū)域，包括錨蛋白結(jié)構(gòu)結(jié)合區(qū)域、蛋白激酶結(jié)構(gòu)激活區(qū)域以及依靠血小板以及白細(xì)胞相關(guān)抗原的同源激活結(jié)構(gòu)域[3]。整合素鏈接激酶能與整合素β亞單位的結(jié)合，通過異常激活下游PI3K/PKB/AKT信號通路來調(diào)控細(xì)胞核內(nèi)相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的水平，進(jìn)而影響細(xì)胞間信號傳遞、改變細(xì)胞間緊密連接的狀態(tài)、促進(jìn)細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變并導(dǎo)致細(xì)胞間上皮間連接蛋白表達(dá)水平的顯著下調(diào)。相關(guān)研究證實(shí)在上皮性惡性腫瘤中，整合素鏈接激酶顯著參與到了發(fā)生發(fā)展過程[4]。因整合素鏈接激酶可以通過PI3K信號通路激活上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換(epithelial-mesenchymaltransition，EMT)來促進(jìn)上皮細(xì)胞間質(zhì)內(nèi)細(xì)胞波形蛋白表達(dá)的上調(diào)，且整合素鏈接激酶可以通過改變細(xì)胞間緊密連接的狀態(tài)，降低上皮細(xì)胞內(nèi)E-cadherin的表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞向間質(zhì)部位侵襲[5]。而關(guān)于整合素鏈接激酶對于宮頸癌、宮頸上皮內(nèi)瘤變的相關(guān)發(fā)生發(fā)展機(jī)制的研究較少[3]，本研究重在揭示整合素鏈接激酶在宮頸相關(guān)惡性或潛在惡性疾病中的作用。

3.2整合素鏈接激酶在宮頸宮頸上皮內(nèi)瘤變中的異常表達(dá)

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CINⅡ～Ⅲ級以及CINⅠ級宮頸病變組織中的整合素鏈接激酶表達(dá)水平顯著高于正常宮頸組織，而宮頸癌中整合素鏈接激酶的表達(dá)水平顯著高于宮頸上皮內(nèi)瘤變以及正常宮頸組織，提示整合素鏈接激酶可能參與到了宮頸組織從正常-宮頸上皮內(nèi)瘤變-宮頸癌的發(fā)展過程。宮頸癌以及CIN宮頸病變組織中整合素鏈接激酶的表達(dá)主要位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)?？紤]整合素鏈接激酶主要依靠異常激活細(xì)胞間信號傳遞來促進(jìn)細(xì)胞向間質(zhì)部位侵襲。本研究并未發(fā)現(xiàn)CINⅡ～Ⅲ級以及CINⅠ級宮頸病變組織中整合素鏈接激酶表達(dá)水平的差異，考慮到宮頸病變發(fā)展過程中ILK對于PI3K以及下游信號通路的激活存在一致性的過程，而并不隨著宮頸上皮病變的程度呈現(xiàn)活化水平的差異。ILK導(dǎo)致的細(xì)胞核周邊miRNA135異常聚集以及宮頸上皮細(xì)胞由G0期快速通過S期而進(jìn)入G1期，而細(xì)胞調(diào)控等方面并不具有組織病理學(xué)分層分析差異，在宮頸組織在由CINI級發(fā)展至CINIII級的過程中并無明顯蛋白激活水平的差異[6]。

3.3整合素鏈接激酶與宮頸病變相關(guān)臨床病理特征的關(guān)系

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，ILK在宮頸癌組織中的表達(dá)與宮頸癌的低分化程度、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、深度的肌層浸潤具有顯著相關(guān)性，Han[4]也發(fā)現(xiàn)，整合素鏈接激酶在膀胱癌侵犯子宮以及盆腔后腹膜的組織中異常高表達(dá)，且隨著膀胱癌侵潤肌層深度的增加，ILK的表達(dá)水平呈現(xiàn)了指數(shù)級別的擴(kuò)增。而于涓瀚等[7]學(xué)者在肺小細(xì)胞癌中也發(fā)現(xiàn)，ILK的表達(dá)異常高于其他亞型的肺部腫瘤如腺癌。本研究發(fā)現(xiàn)ILK隨著宮頸癌分化程度的惡化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生以及肌層清潤深度的增加，ILK的陽性表達(dá)顯著上調(diào)，提示了ILK可能廣泛參與到了宮頸癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移以及侵襲的過程。本次研究并未發(fā)現(xiàn)ILK在不同宮頸癌臨床分期以及不同宮頸癌組織病理分型的陽性表達(dá)的差異，考慮ILK導(dǎo)致的PI3K/PKB/AKT信號通路的激活并不隨著不同宮頸癌細(xì)胞亞型的差異而出現(xiàn)激活水平的差異，宮頸鱗癌以及腺鱗癌等病理壓型腫瘤并無ILK的差異，而不同F(xiàn)IGO分期并未顯著反應(yīng)宮頸癌的侵襲、惡性分化等細(xì)胞功能學(xué)的改變[8]。同時考慮到本研究的樣本量較少，以及ILK檢測時采用的抗體靈敏度的差異、熒光顯微鏡的熒光觀察效果均可能影響到ILK的陽性表達(dá)水平。

綜上所述，整合素鏈接激酶在宮頸上皮內(nèi)瘤變以及宮頸癌組織中異常陽性表達(dá)，并隨著宮頸癌組織惡性分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及肌層侵潤的進(jìn)展，ILK表達(dá)水平顯著上調(diào)，這些均提示了ILK可能顯著參與到了宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過程，并可能作為宮頸癌預(yù)后的重要參考指標(biāo)。

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[專業(yè)責(zé)任編輯：安瑞芳]

Expression of ILK in cervical cancer tissues and its influence on cervical cancer cell invasion

ZHU Xiang-yang, WANG Xiang-hua

(Affiliated Hospital of Hunan Medical College in Yiyang City, Hunan Yiyang 413000, China)

2015-06-12

朱向陽(1977-)，女，主治醫(yī)師，碩士，主要從事婦科腫瘤研究。

王香花，主任醫(yī)師。

10.3969/j.issn.1673-5293.2016.01.030

R737.33

A

1673-5293(2016)01-0087-03