周立蓉（樂山職業(yè)技術(shù)學(xué)院護(hù)理系，四川樂山614000）

Citrin缺陷導(dǎo)致新生兒肝內(nèi)膽汁淤積癥的尿篩查分析

周立蓉
（樂山職業(yè)技術(shù)學(xué)院護(hù)理系，四川樂山614000）

目的 探析Citrin缺陷導(dǎo)致新生兒肝內(nèi)膽汁淤積癥（NICCD）尿液成分篩查的診斷價(jià)值和臨床意義。方法 選取該院自2014年1月至2016年1月收治的27例citrin缺陷導(dǎo)致NICCD患兒，采用濾紙尿氣相色譜/質(zhì)譜法（GC/MS）對(duì)其尿液中的半乳糖、酪氨酸及其代謝物質(zhì)進(jìn)行分析，判斷其在臨床診斷中的價(jià)值。結(jié)果 27例患兒中，有14例（51.9%）存在半乳糖及酪氨酸代謝異常，7例（25.9%）僅表現(xiàn)出半乳糖代謝異常，1例（3.7%）表現(xiàn)出絲蘇氨酸比例倒置，5例（18.5%）尿液成分無任何異常變化。結(jié)論 對(duì)NICCD患兒進(jìn)行尿液篩查，不僅有助于解患兒機(jī)體代謝狀況，而且對(duì)患兒病癥的確診具有積極作用和意義。

膽汁淤積，肝內(nèi)； 嬰兒，新生； 基因，突變； 尿分析； 色譜法

Citrin缺陷導(dǎo)致新生兒肝內(nèi)膽汁淤積癥（NICCD）作為一種先天性遺傳性代謝疾病，在臨床上相對(duì)比較少見［1］。通常情況下，NICCD發(fā)生后，患兒不僅會(huì)存在較為明顯的代謝異常，而且還合并黃疸、肝功能異常及高瓜氨酸血癥、半乳糖血癥、低蛋白血癥等多種代謝疾?。?］，通過尿液成分篩查分析，能夠有效掌握患兒機(jī)體代謝狀況，為疾病的診斷提供有效的信息和幫助，具有積極作用和意義。本研究對(duì)本院收治的27例NICCD患兒進(jìn)行了尿液成分變化的篩查分析，探討其臨床診斷價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2014年1月至2016年1月收治的27例NICCD患兒作為研究對(duì)象，其中男15例，女12例，年齡2～7個(gè)月，平均（3.6±2.3）個(gè)月。

1.2 方法

1.2.1 診斷標(biāo)準(zhǔn) 入選患兒均符合Citrin缺陷導(dǎo)致的NICCD診斷標(biāo)準(zhǔn)［3］：病癥發(fā)生于新生兒或嬰兒時(shí)期，臨床表現(xiàn)為持續(xù)黃疸不退、肝酶變化異常，總膽紅素、直接膽紅素及甲胎蛋白（AFP）含量增高，存在低蛋白血癥，凝血功能障礙，確診為SLC25A13基因突變。排除標(biāo)準(zhǔn)：存在其他代謝異常疾病，資料不全患兒。

1.2.2 檢測(cè)試劑與儀器 新華濾紙、尿激酶及6890N/ 5973GC/MS聯(lián)用儀（日本HITACHI）、正十七烷酸等。

1.2.3 樣本制作 在5 cm×8 cm濾紙上滴加1 mL患兒原尿液，待完全浸透后放置于蔭涼處晾干，并在室溫下進(jìn)行保存。然后進(jìn)行濾紙尿制作，制作完成后，將濾紙進(jìn)行卷曲放置在一次性使用注射器針套內(nèi)，并在注射器中加入1 mL去離子水，在浸透濾紙后靜置15min，進(jìn)行離心去蛋白處理，獲取洗脫尿樣本。

1.2.4 氣相色譜/質(zhì)譜（GC/MS）分析 使用6890N/5973 GC/MS聯(lián)用儀進(jìn)行患兒尿液代謝產(chǎn)物檢測(cè)與分析。首先，選取100 μL保存尿液進(jìn)行解凍、混勻處理，待檢測(cè)分析。然后，取尿液樣本100 μL，加入尿激酶，在37℃水溫下放置40 min，再加入1 mL無水乙醇進(jìn)行混勻后，經(jīng)離心去蛋白處理，將上清液提取放置于玻璃瓶中在37℃干燥真空條件下保存，其余物質(zhì)使用9∶1雙甲基硅烷三氟乙酰胺與三羥甲基氯硅烷在80℃溫度環(huán)境下持續(xù)硅烷化處理40min，對(duì)最終反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行GC/MS分析。對(duì)尿液中的代謝產(chǎn)物通過隨機(jī)質(zhì)譜儀檢索美國國家標(biāo)準(zhǔn)及技術(shù)研究所圖譜庫方式進(jìn)行鑒定分析，并通過峰下面積計(jì)算對(duì)尿半乳糖結(jié)果進(jìn)行分析。

GC/MS分析過程中，溫度設(shè)置為260℃，傳輸溫度設(shè)置為280℃，以高純氦氣作為樣本分析載氣，載氣以恒流狀態(tài)保持1 mL/min的流速進(jìn)行分析應(yīng)用。同時(shí)將離子源溫度設(shè)置為250℃，整個(gè)分析過程通過程序升溫方式，將起始溫度設(shè)置為60℃，并以每分鐘4℃方式進(jìn)行逐漸提升，最高控制在280℃，每個(gè)溫度變化之間保留1 min。最后，進(jìn)樣檢測(cè)以分流方式，每次進(jìn)樣量為1 μL，進(jìn)樣分流比控制為1∶50，以確保檢測(cè)分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1.2.5 檢測(cè)方法 對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行定量、定性分析。其中，對(duì)檢測(cè)成分以該物質(zhì)特征離子峰面積及肌酐特征離子峰面積比值進(jìn)行半定量表示，半定量計(jì)算公式為lg（X+5）。該公式中，X即為檢測(cè)物質(zhì)特征離子峰面積與肌酐特征離子峰面積比值［4］。

2 結(jié) 果

27例患兒中，14例存在半乳糖及酪氨酸代謝異常，約占51.9%；7例表現(xiàn)出半乳糖代謝異常，約占25.9%；1例表現(xiàn)出絲蘇氨酸比例倒置，約占3.7%；5例尿液成分未表現(xiàn)出任何異常變化，約占18.5%。圖1為7例半乳糖代謝異?；純耗蚝Y查結(jié)果變化示意圖。

圖1 半乳糖代謝異?；純旱哪蚝Y查質(zhì)譜圖

3 討 論

臨床上，NICCD作為一種遺傳性代謝疾病，主要是由人體中Citrin蛋白的SLC25A13基因發(fā)生突變而引起的一種常染色體異常疾病［5］。其中，Citrin蛋白中SLC25A13基因正常是位于7q51.3內(nèi)，全長在200 kb左右，包含18個(gè)外顯子和17個(gè)內(nèi)含子，并且該基因編碼中還包含675個(gè)氨基酸Citrin蛋白［6］，而SLC25A13基因突變必然導(dǎo)致Citrin蛋白存在相應(yīng)的缺失變化，從而引起NICCD發(fā)生。臨床研究顯示，NICCD作為一種全球性疾病，在世界范圍內(nèi)都有較為廣泛的疾病情況，而我國NICCD患者從地域范圍上劃分，呈現(xiàn)“北低南高”的特征，其中以湖南、廣東地區(qū)患者數(shù)量最為突出［7］。此外，在臨床研究統(tǒng)計(jì)的遺傳性代謝疾病中，NICCD屬于發(fā)病率較高的一種病癥類型，其患者發(fā)病數(shù)量僅低于甲基丙二酸血癥，近年來臨床研究數(shù)據(jù)顯示，NICCD患者數(shù)量呈現(xiàn)不斷增加的變化趨勢(shì)［8］，對(duì)患者產(chǎn)生的危害越來越突出，因此在臨床研究中也越來越受重視。

通常情況下，NICCD患兒不僅表現(xiàn)出較為明顯的黃疸、肝功能異常等變化，而且多合并有高乳酸血癥、半乳糖血癥和低蛋白血癥、酪氨酸血癥等多種代謝異常病癥［9］。在人體組織中，Citrin作為天門冬氨酸及谷氨酸載體，主要負(fù)責(zé)將天門冬氨酸向細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)，同時(shí)將細(xì)胞質(zhì)內(nèi)谷氨酸及質(zhì)子向線粒體轉(zhuǎn)運(yùn)，而Citrin蛋白在體內(nèi)糖酵解、尿素合成及糖異生、脂類代謝等過程中具有重要作用，而且Citrin蛋白還是上述活動(dòng)的重要參與者，因此，人體內(nèi)一旦出現(xiàn)Citrin蛋白缺陷必然會(huì)導(dǎo)致人體代謝發(fā)生異常，進(jìn)而產(chǎn)生相應(yīng)的疾病。在人體代謝異常中，糖及氨基酸代謝異常是最為常見的2種類型，臨床中可以通過串聯(lián)質(zhì)譜分析法或氣相色譜質(zhì)譜分析法進(jìn)行分析顯現(xiàn)［10］。本研究通過對(duì)本院收治的27例NICCD患兒尿液進(jìn)行篩查分析顯示，半乳糖代謝異常在患兒代謝異常中所占比率最高。由此可見，NICCD患兒臨床中會(huì)發(fā)生以半乳糖代謝異常為主的標(biāo)志性癥狀反應(yīng)［11］，這對(duì)患者病癥診斷及臨床治療具有一定的指導(dǎo)作用和意義。但在實(shí)際研究中，對(duì)臨床檢查存在有半乳糖代謝異常的患兒來講，根據(jù)其氣相色譜質(zhì)譜分析結(jié)果，需要與典型的病理性半乳糖血癥進(jìn)行區(qū)分判斷，以避免影響患兒的診斷和治療。通常情況下，典型的病理性半乳糖血癥多在圍生期發(fā)病，并且在進(jìn)食乳類后幾天內(nèi)即可出現(xiàn)嘔吐、嗜睡、體質(zhì)量不增加或拒食等癥狀，然后繼發(fā)黃疸或肝臟腫大等病癥，臨床中如果不對(duì)患兒的病癥進(jìn)行及時(shí)診斷和治療，繼續(xù)進(jìn)食乳類將會(huì)導(dǎo)致患兒病情進(jìn)一步惡化，進(jìn)而出現(xiàn)腹水或肝衰竭等終末期癥狀。通常情況下，對(duì)病理性半乳糖血癥患兒早期癥狀的診斷，可通過裂隙燈檢查發(fā)現(xiàn)患兒晶狀體內(nèi)白內(nèi)障形成。而典型性半乳糖血癥作為一種染色體隱性遺傳疾病，是由于半乳糖代謝發(fā)生異常所導(dǎo)致的，并且臨床根據(jù)代謝異常狀況可以進(jìn)行不同病癥類型的劃分，臨床中對(duì)半乳糖血癥的早期診斷主要依賴于新生兒篩查、尿液篩查等方式進(jìn)行檢測(cè)判斷。本研究NICCD患兒發(fā)生的半乳糖血癥屬于一種繼發(fā)性病癥，與病理性半乳糖血癥有著根本性區(qū)別。因此，臨床上對(duì)NICCD患兒進(jìn)行尿液篩查分析時(shí)，對(duì)存在半乳糖代謝異?；純海诓“Y診斷分析中應(yīng)注意與半乳糖血癥進(jìn)行區(qū)別，認(rèn)識(shí)到NICCD患兒的半乳糖血癥作為一種繼發(fā)性疾病，與病理性半乳糖血癥在基因突變上存在一定的區(qū)別，可以通過基因檢測(cè)方式將二者進(jìn)行區(qū)分，以準(zhǔn)確判斷患兒的疾病類型，采取有效的治療和控制措施，避免疾病發(fā)生。

本研究結(jié)果顯示，NICCD患兒尿液半乳糖代謝異常發(fā)生率最高，且患兒臨床中可能發(fā)生具有標(biāo)志性的半乳糖血癥，這對(duì)患兒病癥的診斷分析具有很大的幫助。此外，結(jié)合臨床對(duì)NICCD研究情況，NICCD患兒以糖、氨基酸代謝異常最為常見，其中氨基酸代謝異常在NICCD患兒代謝異常中也具有較高的發(fā)生率，這就需要在NICCD患兒病情檢測(cè)診斷中，結(jié)合患兒代謝異常檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行綜合分析判斷，避免影響對(duì)患兒病癥的治療。但需要注意的是，在NICCD患兒氨基酸代謝異常的診斷中，對(duì)酪氨酸血癥患兒的檢測(cè)診斷應(yīng)注意和酪氨酸血癥Ⅰ型進(jìn)行區(qū)別。酪氨酸血癥Ⅰ型作為一種遺傳性代謝異常疾病，其尿篩查結(jié)果以代謝物質(zhì)增高為主要變化。而NICCD患兒的代謝異常，能夠通過相應(yīng)的檢測(cè)方法分析得出，臨床中應(yīng)注意根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，通過進(jìn)一步檢測(cè)進(jìn)行判斷確認(rèn)。

總之，對(duì)NICCD患兒進(jìn)行尿篩查，有助于了解患兒機(jī)體代謝狀況，對(duì)疾病的確診具有積極作用和意義。

［1］江敏妍，劉麗，李秀珍，等.尿GC-MS分析技術(shù)在遺傳代謝缺陷病篩查診斷中的局限性［J］.廣東醫(yī)學(xué)，2012，33（20）：3062-3066.

［2］許玲芬，張衛(wèi)波，馬雪梅，等.串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)在嬰兒膽汁淤積癥病因診斷中的價(jià)值［J］.臨床肝膽病雜志，2015，31（8）：1257-1261.

［3］盧春婷，李佳縈，馮烈，等.Citrin缺陷導(dǎo)致的新生兒肝內(nèi)膽汁淤積癥患兒SLC25A13基因突變與生化指標(biāo)的相關(guān)性研究［J］.中國病理生理雜志，2014，30（5）：859-863.

［4］閆秀梅，黃開宇，李云芳，等.Citrin缺陷引起的新生兒肝內(nèi)膽汁淤積癥兩例臨床特點(diǎn)及家系基因分析［J］.中國全科醫(yī)學(xué)，2013，16（29）：3483-3485.

［5］曾軍，劉麗，彭敏芝，等.Citrin蛋白缺陷所致新生兒肝內(nèi)膽汁淤積癥酰基肉堿譜分析［J］.臨床兒科雜志，2012，30（9）：801-804.

［6］程靜，劉麗，盛慧英，等.Citrin缺陷所致新生兒肝內(nèi)膽汁淤積癥84例分析［J］.廣東醫(yī)學(xué)，2012，33（17）：2559-2562.

［7］溫鵬強(qiáng)，王國兵，陳占玲，等.應(yīng)用高分辨率熔解曲線分析快速篩查和診斷citrin缺陷導(dǎo)致的新生兒肝內(nèi)膽汁淤積癥［J］.中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志，2012，29（2）：167-171.

［8］伍秋頻，王琳琳，陳秀奇，等.Citrin缺陷致肝內(nèi)膽汁淤積癥患兒的血串聯(lián)質(zhì)譜及尿氣相色譜分析［J］.山東醫(yī)藥，2013，53（15）：13-15.

［9］宋元宗，小林圭子.Citrin缺陷導(dǎo)致的新生兒肝內(nèi)膽汁淤積癥［J］.實(shí)用兒科臨床雜志，2010，25（20）：1606-1608.

［10］熊小麗，鄢素琪，丁艷，等.湖北地區(qū)Citrin缺陷導(dǎo)致的新生兒肝內(nèi)膽汁淤積癥臨床研究［J］.中華實(shí)用兒科臨床雜志，2015，30（14）：1064-1068.

［11］王之萍，杜潔.妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥產(chǎn)婦血清膽汁酸、ALT、AST水平變化及對(duì)圍生兒的影響［J］.山東醫(yī)藥，2015，55（2）：48-49.

10.3969/j.issn.1009-5519.2016.16.038

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1009-5519（2016）16-2546-03

2016-05-06）