劉麗華, 周春嬌，蔣紅梅，王輝憲，楊華武，趙國(guó)玲

(1 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院, 湖南　長(zhǎng)沙　410128；2 湖南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司，湖南　長(zhǎng)沙　410000)

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黃龍膽根黃酮類(lèi)化合物的提取、純化工藝研究

劉麗華1, 周春嬌1，蔣紅梅1，王輝憲1，楊華武2，趙國(guó)玲2

(1 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院, 湖南長(zhǎng)沙410128；2 湖南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司，湖南長(zhǎng)沙410000)

通過(guò)單因素與正交實(shí)驗(yàn)研究了微波輔助乙醇溶劑法提取黃龍膽根黃酮類(lèi)化合物的最佳工藝條件，優(yōu)化了大孔樹(shù)脂對(duì)所得黃酮類(lèi)化合物進(jìn)行純化的工藝。得出提取最佳工藝條件為：微波功率300 W，微波時(shí)間8 min，乙醇濃度35%，料液比1:20。在此條件下，得率為32.19%，粗提物總黃酮含量為1.97%。通過(guò)靜態(tài)實(shí)驗(yàn)，選出最佳純化樹(shù)脂為AB-8大孔樹(shù)脂；通過(guò)動(dòng)態(tài)實(shí)驗(yàn)，得出吸附分離黃龍膽根黃酮類(lèi)化合物工藝參數(shù)為：上樣液流速2.00 mL/min，洗脫劑流速2.00 mL/min。經(jīng)純化后總黃酮含量為20.17%。

黃龍膽；黃酮類(lèi)化合物；微波輔助法；提?。患兓?；大孔樹(shù)脂

黃龍膽(學(xué)名黃秦艽,龍膽科，黃秦艽屬)，是重要的藥用植物[1-2]，其根和莖入藥具有清熱、瀉肝、定驚之功效。研究發(fā)現(xiàn)黃酮類(lèi)化合物的功效是多方面的，它是一種很強(qiáng)的抗氧化劑[3-4]，許多黃酮類(lèi)成分具有止咳、祛痰、平喘、抗菌、抗炎[5]、抗過(guò)敏[6]等活性。目前，偶有關(guān)于龍膽科植物黃酮類(lèi)化合物的提取、含量的測(cè)定[7-8]、純化[9]以及其中的各種成分分析[10-11]的報(bào)道，未有系統(tǒng)的關(guān)于黃龍膽中黃酮類(lèi)化合物的提取及純化工藝研究方面的報(bào)道。本文擬研究利用微波輔助乙醇溶劑法提取黃龍膽根黃酮類(lèi)化合物的最佳工藝條件，并優(yōu)化利用大孔樹(shù)脂對(duì)提取所得的黃酮類(lèi)化合物進(jìn)行純化的工藝。

1　材料、試劑與儀器

黃龍膽根，產(chǎn)自河北(曬干粉碎，過(guò)40目篩備用)；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，中國(guó)食品藥品檢定研究院；無(wú)水乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉，均為分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品；D101、HPD-100、HPD-300、AB-8、S-8等5種大孔吸附樹(shù)脂，均為上海藍(lán)季科技發(fā)展有限公司產(chǎn)品。

ST-08多功能粉碎機(jī)，永康市帥通工具有限公司；SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵，鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司；RE52C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司DJ-5002；電子天平，美國(guó)康州HZ電子科技有限公司；UV-2450紫外分光光度計(jì)，日本島津公司；LWMC-205可調(diào)功率微波化學(xué)反應(yīng)器，南京凌江科技開(kāi)發(fā)有限責(zé)任公司。

2　實(shí)驗(yàn)方法

2.1黃龍膽根黃酮類(lèi)化合物的提取

2.1.1標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備

準(zhǔn)確稱(chēng)取干燥至衡重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品20.00 mg，用無(wú)水乙醇溶解并定容于100 mL容量瓶中，搖勻得濃度為0.20 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。移取上述蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0.00 mL，0.50 mL，1.00 mL，2.00 mL，3.00 mL，3.50 mL，4.00 mL，5.00 mL于8支10 mL容量瓶中，分別加入5%亞硝酸鈉溶液0.3 mL，搖勻放置6 min后再各加入10%硝酸鋁溶液0.3 mL，搖勻放置6 min 后再各加入4% NaOH溶液4 mL，最后用無(wú)水乙醇定容至10 mL。以無(wú)水乙醇為空白參比，用紫外分光光度計(jì)于510 nm[12]處測(cè)定吸光度值，以吸光度Y為縱坐標(biāo)，蘆丁濃度X為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

2.1.2單因素實(shí)驗(yàn)

采用微波輔助乙醇溶劑提取法提取黃龍膽根中的黃酮類(lèi)化合物。通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)以提取液吸光度值為指標(biāo)考察微波時(shí)間、微波功率、乙醇濃度、料液比、提取次數(shù)等因素對(duì)提取效果的影響。

稱(chēng)取5 g黃龍膽根粉末5份，分別置于500 mL圓底燒瓶中，各加不同濃度乙醇水溶液100 mL，在不同微波功率、不同微波時(shí)間、不同料液比條件下，進(jìn)行提取，將提取液抽濾后用80%乙醇分別定容至100 mL，取該溶液0.5 mL于10 mL容量瓶中加顯色劑顯色(同2.1.1操作，下同)，用無(wú)水乙醇定容后，于510 nm處測(cè)吸光度，比較提取液的吸光度值，結(jié)果表明：微波時(shí)間、微波功率、乙醇濃度、料液比等因素對(duì)提取效果有顯著影響。

2.1.3正交實(shí)驗(yàn)方案

根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，設(shè)計(jì)4因素3水平的正交實(shí)驗(yàn)[12-13]，對(duì)微波輔助乙醇溶劑法提取黃龍膽根黃酮類(lèi)化合物的工藝條件進(jìn)行優(yōu)化，正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)如表1所示。

表1　黃酮類(lèi)化合物提取L9(34)因素、水平設(shè)計(jì)

2.2提取物的純化

2.2.1黃龍膽根總黃酮粗提液的制備

稱(chēng)取黃龍膽根粉末800 g，分多次按所得的最佳工藝條件提取黃龍膽根總黃酮，合并提取液濃縮至800 mL，取該溶液0.5 mL于10 mL容量瓶中加顯色劑，用無(wú)水乙醇定容后于510 nm 處測(cè)吸光度，依據(jù)2.3公式可計(jì)算出其總黃酮濃度，所得黃龍膽根總黃酮粗提液用于以下純化實(shí)驗(yàn)。

2.2.2樹(shù)脂的篩選

準(zhǔn)確稱(chēng)取經(jīng)預(yù)處理[14]的5種干樹(shù)脂各3 g，分別置于250 mL具塞三角瓶中，加入黃酮類(lèi)粗提液各100.00 mL(2.2.1提取得到)，置于搖床中，20 ℃，90 r·min-1(溫度與頻率下同)，振蕩吸收12 h，測(cè)定吸附后剩余液中黃酮類(lèi)化合物濃度，按式(1)、式(2)分別計(jì)算吸附量Q1[15]和吸附率q1。將已吸附飽和的5種樹(shù)脂過(guò)濾，分別置于250 mL具塞三角瓶中，加入100.00 mL 70%乙醇溶液，置于搖床中，解吸附6 h，測(cè)定解吸液中黃酮類(lèi)化合物濃度，按式(3)、(4)分別計(jì)算解吸量Q2和解吸率q2。根據(jù)吸附量、吸附率和解吸量、解吸率對(duì)5種大孔樹(shù)脂進(jìn)行篩選。

Q1(mg/g)=(C0-C1)V1/M

(1)

(2)

Q2(mg/g)=C2V2/M

(3)

(4)

式中：Q1——吸附量,mg/g

q1——吸附率

Q2——解吸量,mg/g

q2——解吸率

C0——吸附原液黃酮類(lèi)化合物質(zhì)量濃度,mg/mL

C1——吸附后剩余液中黃酮類(lèi)化合物質(zhì)量濃度,mg/mL

C2——解吸液中黃酮類(lèi)化合物質(zhì)量濃度,mg/mL

V1——吸附液原液體積,mL

V2——乙醇體積,mL

M——干樹(shù)脂質(zhì)量,g

2.2.3吸附液pH對(duì)吸附效果的影響

準(zhǔn)確稱(chēng)取經(jīng)預(yù)處理的AB-8樹(shù)脂3.00 g，共5份，分別置于250 mL具塞三角瓶中，分別加入pH為3、4、5、6、7的黃酮類(lèi)粗提液100.00 mL，置于搖床中振蕩12 h，測(cè)定吸附后剩余液中黃酮類(lèi)化合物濃度，計(jì)算吸附量，比較靜態(tài)條件下不同pH值對(duì)吸附效果的影響。

2.2.4最大吸附量的考察

準(zhǔn)確稱(chēng)取經(jīng)預(yù)處理的AB-8樹(shù)脂3.00 g，共5份，分別置于250 mL具塞三角瓶中，分別加入pH=6的黃酮類(lèi)粗提液40 mL、70 mL、100 mL、130 mL、160 mL，置于搖床中振蕩12 h，測(cè)定吸附后剩余液中黃酮類(lèi)化合物濃度，計(jì)算吸附量，確定靜態(tài)條件下的最大吸附量。

2.2.5吸附時(shí)間對(duì)吸附效果的影響

準(zhǔn)確稱(chēng)取經(jīng)預(yù)處理的AB-8樹(shù)脂3.00 g，置于250 mL具塞三角瓶中，加入pH=6的黃酮類(lèi)粗提液160 mL，置于搖床中振蕩12 h，每隔1 h測(cè)定溶液中黃酮類(lèi)化合物濃度，計(jì)算吸附量，考察靜態(tài)條件下吸附時(shí)間對(duì)吸附效果的影響。

2.2.6乙醇濃度對(duì)解吸附效果的影響

準(zhǔn)確稱(chēng)取經(jīng)預(yù)處理的AB-8樹(shù)脂3.00 g，共5份，分別置于250 mL具塞三角瓶中，分別加入pH=6的黃酮類(lèi)粗提液100 mL，置于搖床中振蕩9 h，測(cè)定吸附后剩余液中黃酮類(lèi)化合物濃度，計(jì)算吸附量。然后取出樹(shù)脂分別置于層析柱中，用去離子水將飽和吸附樹(shù)脂洗至流出液無(wú)色，再分別置于250 mL具塞三角瓶中并加入100 mL濃度為50%、60%、70%、80%、90%的乙醇溶液解吸6 h，測(cè)定解吸液中黃酮類(lèi)化合物濃度，計(jì)算解吸量，比較靜態(tài)條件下不同濃度乙醇對(duì)解吸附效果的影響。

2.2.7乙醇體積對(duì)解吸附效果的影響

準(zhǔn)確稱(chēng)取經(jīng)預(yù)處理的AB-8樹(shù)脂3.00 g，共5份，分別置于250 mL具塞三角瓶中，分別加入pH=6的黃酮類(lèi)粗提液100 mL，置于搖床中振蕩9 h，測(cè)定吸收后剩余液中黃酮類(lèi)化合物濃度，計(jì)算吸附量。然后取出樹(shù)脂分別置于層析柱中，用去離子水將飽和吸附樹(shù)脂洗至流出液無(wú)色，再分別置于250 mL具塞三角瓶中并加入濃度為70%的乙醇60 mL、100 mL、140 mL、180 mL、220 mL解吸6 h，測(cè)定解吸液中黃酮類(lèi)化合物濃度，計(jì)算解吸量，比較靜態(tài)條件下不同乙醇體積對(duì)解吸附效果的影響。

2.2.8解吸時(shí)間對(duì)解吸效果的影響

準(zhǔn)確稱(chēng)取經(jīng)預(yù)處理的AB-8樹(shù)脂3.00 g，置于250 mL具塞三角瓶中，加入pH=6的黃酮類(lèi)粗提液100 mL，置于搖床中振蕩9 h，測(cè)定吸收后剩余液中黃酮類(lèi)化合物濃度，計(jì)算吸附量。然后取出樹(shù)脂分別置于層析柱中，用去離子水將飽和吸附樹(shù)脂洗至流出液無(wú)色，再分別置于250 mL具塞三角瓶中并加入濃度為70%的乙醇140 mL，解吸60 min，每隔10 min測(cè)定解吸液中黃酮類(lèi)化合物濃度，計(jì)算解吸量，比較靜態(tài)條件下解吸時(shí)間對(duì)解吸效果的影響。

2.2.9上樣液流速的確定

準(zhǔn)確稱(chēng)取經(jīng)預(yù)處理的AB-8樹(shù)脂16.00 g，共3份，分別濕法裝玻璃柱(φ22 mn×300 mn)，床體積(BV)和長(zhǎng)度分別為76 mL 和20 cm，將pH=6的黃酮類(lèi)粗提液分別以1.00 mL/min、2.00 mL/min、3.00 mL/min的流速上柱，分部收集流出液，每管收集10 mL收集20管，測(cè)定各部分流出液中黃酮類(lèi)化合物濃度，計(jì)算漏出率(流出液與上樣液中黃酮類(lèi)化合物濃度的比值)，以各部分漏出率對(duì)上樣液體積作圖，確定動(dòng)態(tài)條件下的最佳上樣液流速。

2.2.10洗脫劑流速的確定

準(zhǔn)確稱(chēng)取經(jīng)預(yù)處理的AB-8樹(shù)脂16.00 g，共3份，分別濕法裝玻璃柱(φ22 mn×300 mn)，床體積(BV)和長(zhǎng)度分別為76 mL和20 cm，將200 mL pH=6的黃酮類(lèi)粗提液以2.00 mL/min的流速上柱，上柱完畢后用去離子水洗至流出液無(wú)色，再用70%的乙醇分別以1.00 mL/min、2.00 mL/min、3.00 mL/min的流速洗脫，分部收集洗脫液，每管收集10 mL收集20管，測(cè)定各部分洗脫液中黃酮類(lèi)化合物濃度，以各部分洗脫液黃酮類(lèi)化合物濃度對(duì)洗脫體積作圖，確定動(dòng)態(tài)條件下的最佳洗脫流速。

2.3黃龍膽根黃酮類(lèi)化合物含量、得率的計(jì)算

根據(jù)Y-X曲線(xiàn)方程和下列公式計(jì)算提取液中黃酮類(lèi)化合物濃度和含量。

黃酮類(lèi)化合物濃度X(mg/mL)=(Y-0.0011)/11.4205×n

式中：Y——吸光值

n——稀釋倍數(shù)

黃龍膽根黃酮類(lèi)化合物含量=X×V/樣品質(zhì)量×100%

式中：X——黃酮類(lèi)化合物濃度，mg/mL

V——溶液體積，mL

黃龍膽根黃酮類(lèi)化合物得率=w1/w2×100%

式中：w1——黃酮類(lèi)粗提物樣品質(zhì)量，g

w2——黃龍膽根原料質(zhì)量，g

2.4利用AB-8大孔樹(shù)脂對(duì)黃龍膽根黃酮類(lèi)化合物的純化

2.4.1黃龍膽根黃酮類(lèi)化合物的提取和粗提物中黃酮含量測(cè)定

稱(chēng)取5 g黃龍膽根粉末，按最佳工藝條件進(jìn)行提取得到黃酮類(lèi)粗提液，濃縮、冷凍干燥得提取粗品，稱(chēng)重、計(jì)算得率。取該粗品50 mg，溶于無(wú)水乙醇至50 mL容量瓶，再移取2 mL至10 mL容量瓶中顯色定容于510 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值，依據(jù)2.3公式計(jì)算得該溶液中總黃酮濃度、粗品總黃酮含量。

2.4.2黃龍膽根黃酮類(lèi)化合物的純化及純化物中黃酮含量測(cè)定

按最佳純化工藝條件純化粗提液(2.2.1提取得到)，收集60 mL至120 mL的洗脫液濃縮成浸膏狀，冷凍干燥得純化樣品。取該純化樣品50 mg，溶于無(wú)水乙醇，并用無(wú)水乙醇定容于50 mL容量瓶。移取該溶液2 mL至10 mL容量瓶中顯色定容，于510 nm波長(zhǎng)下測(cè)定得吸光度值，依據(jù)2.3公式計(jì)算得該溶液中總黃酮濃度、純化樣品總黃酮含量。

3　結(jié)果與討論

3.1黃龍膽根黃酮類(lèi)化合物的提取

3.1.1標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品蘆丁濃度與測(cè)定所得吸光度值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，示于圖1。得到線(xiàn)性回歸方程為：Y=11.4205X+0.0011，R2=0.9994。

圖1　蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

3.1.2正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果

正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果示于表2。

表2　微波輔助法提取黃酮類(lèi)化合物正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果

由表2極差分析可知，乙醇濃度對(duì)提取效果的影響最大，其極差值為0.025；微波時(shí)間對(duì)提取效果的影響最小，其極差值為0.007。四個(gè)單因素對(duì)提取效果影響順序?yàn)椋阂掖紳舛?料液比>微波功率>微波時(shí)間。因此，最佳提取工藝條件為A3B2C1D2，即微波時(shí)間8 min，微波功率300 W，乙醇濃度35%，料液比1:20。

為了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，稱(chēng)取黃龍膽根粉末進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3　微波輔助提取黃酮類(lèi)化合物驗(yàn)證試驗(yàn)

由表3可知，平行實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性可靠，說(shuō)明該工藝條件可行。

3.2黃龍膽根黃酮類(lèi)化合物的純化

3.2.1黃龍膽根總黃酮粗提液的制備

由2.2.1所得黃龍膽根總黃酮提取濃縮液，取該溶液0.5 mL于10 mL容量瓶中加顯色劑，用無(wú)水乙醇定容后于510 nm處測(cè)吸光度為0.983，依據(jù)2.3公式得總黃酮濃度為1.72 mg/mL，所得黃龍膽根總黃酮粗提液用于以下純化實(shí)驗(yàn)。

3.2.2樹(shù)脂的篩選

5種樹(shù)脂的靜態(tài)吸附與解吸附實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表4所示。

表4　不同樹(shù)脂對(duì)黃龍膽根黃酮類(lèi)化合物的靜態(tài)吸附和解吸附結(jié)果

由表4可知，吸附量和吸附率最高的是S-8樹(shù)脂，解吸量和解吸率最高的是AB-8樹(shù)脂，綜合考慮選擇解吸量最大的AB-8樹(shù)脂進(jìn)行黃龍膽根黃酮類(lèi)化合物粗提液的柱層析分離。

3.2.3吸附液pH對(duì)吸附效果的影響

不同pH條件下AB-8樹(shù)脂對(duì)黃龍膽根黃酮類(lèi)化合物吸附效果的影響如圖2所示，由圖2可知當(dāng)pH=6時(shí)吸附量最大，而該黃酮類(lèi)化合物提取液本身呈弱酸性pH約為5，因此稍加調(diào)節(jié)即可達(dá)到最佳吸附pH。

圖2　吸附液pH對(duì)吸附效果的影響

3.2.4最大吸附量

吸附量考察結(jié)果如圖3所示，由圖3可得，當(dāng)原液體積由130 mL加至160 mL時(shí)吸附量緩慢增大，因此可將160 mL時(shí)的吸附量視為AB-8樹(shù)脂對(duì)該黃酮類(lèi)化合物的最大吸附量，此時(shí)最大吸附量為30.13 mg/g。

圖3　最大吸附量考察

3.2.5吸附時(shí)間對(duì)吸附效果的影響

吸附時(shí)間與吸附量的關(guān)系如圖4所示，分析可知，隨著時(shí)間增加該樹(shù)脂對(duì)黃酮類(lèi)化合物的吸附量隨之增加，但在第9 h后吸附量沒(méi)有明顯增加，從節(jié)省時(shí)間角度考慮靜態(tài)吸附9 h即可，此時(shí)吸附量為29.62 mg/g。

圖4　吸附時(shí)間對(duì)吸附效果的影響

3.2.6乙醇濃度對(duì)解吸附效果的影響

乙醇濃度對(duì)樹(shù)脂解吸附效果的影響如圖5所示，分析可知，乙醇濃度70%時(shí)解吸量最大為22.90 mg/g，高于或低于70%時(shí)解吸量均減小。根據(jù)相似相容原理，不同濃度的乙醇對(duì)化合物的溶解力不同，推測(cè)70%乙醇的極性與黃龍膽根黃酮類(lèi)化合物的極性更加接近。因此，選擇70%乙醇濃度為洗脫劑更合適。

圖5　乙醇濃度對(duì)解吸附效果的影響

3.2.7乙醇體積對(duì)解吸附效果的影響

乙醇體積對(duì)樹(shù)脂解吸量的關(guān)系如圖6所示，分析可知，乙醇體積從140 mL增至220 mL時(shí)解吸量增加不明顯，140 mL時(shí)解吸量為24.75 mg/g，因此為節(jié)約洗脫劑，選擇140 mL乙醇進(jìn)行洗脫即可。

圖6　乙醇體積對(duì)解吸附效果的影響

3.2.8解吸時(shí)間對(duì)解吸效果的影響

解吸時(shí)間與解吸量的關(guān)系如圖7所示，分析可知，前30 min隨著解吸時(shí)間的增加解吸量迅速提升，30 min之后隨著時(shí)間增加解吸量沒(méi)有明顯提高，因此解吸時(shí)間30 min為宜，此時(shí)解吸量為24.63 mg/g。

3.2.9上樣液流速的確定

圖8　上樣液流速與漏出率關(guān)系

不同流速下，以各部分漏出率對(duì)上樣液體積作圖，如圖8所示，分析可知，當(dāng)上樣液流速為1.00 mL/min時(shí)泄漏點(diǎn)(泄漏點(diǎn)以流出液濃度為上樣液濃度的1/10為標(biāo)準(zhǔn))最晚出現(xiàn)，當(dāng)上樣液流速為3.00 mL/min時(shí)泄露點(diǎn)最早出現(xiàn)。這是因?yàn)榱魉俾龝r(shí)，黃酮類(lèi)化合物與樹(shù)脂的接觸時(shí)間延長(zhǎng)，有利于其從液相擴(kuò)散到樹(shù)脂相，有利于吸附；流速過(guò)快，被吸附物質(zhì)來(lái)不及擴(kuò)散到樹(shù)脂表面就會(huì)發(fā)生泄漏。因此流速慢有利于吸附，但流速過(guò)慢會(huì)影響生產(chǎn)效率。綜合考慮選擇上樣液流速2.00 mL/min為宜。

3.2.10洗脫劑流速的確定

不同流速下，以各部分洗脫液黃酮類(lèi)化合物濃度對(duì)洗脫體積作圖，如圖9所示，分析可知，被洗脫的黃酮類(lèi)化合物主要集中在60～120 mL的洗脫液中，而洗脫體積在60～120 mL時(shí)1.00 mL/min與2.00 mL/min的黃酮類(lèi)化合物洗脫量接近，但1.00 mL/min的洗脫時(shí)間是2.00 mL/min的一倍，因此選擇2.00 mL/min更為合適。

圖9　洗脫劑流速與洗脫液濃度關(guān)系

3.3AB-8大孔樹(shù)脂對(duì)黃龍膽根黃酮類(lèi)化合物純化效果的評(píng)價(jià)

3.3.1黃龍膽根粗提物中黃酮類(lèi)化合物的含量

步驟(2.4.1)所得提取粗品，稱(chēng)重得1.61 g，按公式(2.3)計(jì)算得率為32.19%。取該粗品50 mg，溶于無(wú)水乙醇，按步驟(2.4.1)操作測(cè)定該粗提物溶液吸光度值為0.046，依據(jù)2.3公式計(jì)算得該溶液中總黃酮濃度為0.020 mg/mL，粗品總黃酮含量為1.97%。

3.3.2黃龍膽根提取物純化后黃酮類(lèi)化合物的含量及純化效果

步驟(2.4.2)得到純化樣品。取該純化樣品50 mg，溶于無(wú)水乙醇，按步驟(2.4.1)操作測(cè)定該純化樣品溶液得吸光度值為0.462，依據(jù)2.3公式計(jì)算得該溶液中總黃酮濃度為0.202 mg/mL，純化樣品總黃酮含量為20.17%，較粗品含量提高10.24倍。

4　結(jié)　論

通過(guò)單因素和正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)確定微波輔助乙醇法提取黃龍膽根黃酮類(lèi)化合物的最佳工藝條件為：微波功率300 W，微波時(shí)間8 min，乙醇濃度35%，料液比1:20。按最佳工藝條件進(jìn)行提取得率為32.19%。通過(guò)靜態(tài)吸附與解吸實(shí)驗(yàn)確定黃龍膽根黃酮類(lèi)化合物最佳純化樹(shù)脂為AB-8大孔樹(shù)脂；通過(guò)動(dòng)態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)得出：上樣液流速為2.00 mL/min，洗脫劑流速為2.00 mL/min。經(jīng)純化后提取物總黃酮類(lèi)化合物含量由1.97%提高到20.17%，較粗品提高10.24倍。

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Study on Extraction and Purification of Veratrilla Baillonii Franch Flavonoids Components

LIULi-hua1,ZHOUChun-jiao1,JIANGHong-mei1,WANGHui-xian1,YANGHua-wu2,ZHAOGuo-ling2

(1 College of Technical Science, Hunan Agricultural University, Hunan Changsha 410128;2 China Tobacco Hu’nan Industrial Co., Ltd., Hunan Changsha 410128, China)

The optimum extraction process condition of flavonoids from Veratrilla baillonii Franch by using microwave-assisted ethanol solvent method was studied, and the extraction of flavonoids were purified by using macroporous resin. Results showed that the best process conditions for the extraction were as follows: microwave power was 300 W, microwave time was 8 min, the ethanol concentration was 35%, the ratio of material to solvent was 1:20, the yield of crude flavonoids was 32.19%, the content of flavonoids was 1.97%. AB-8 was the best resin. Under the dynamic condition, the sample liquid flow velocity was 2.00 mL/min, the eluent flow velocity was 2.00 mL/min. The contents of flavonoids were 20.17%.

gentian; flavonoids; microwave assisted method; extract; purification；macroporous resin

王輝憲，研究方向: 天然產(chǎn)物提取與應(yīng)用。

A

1001-9677(2016)05-0124-06