張曉燕，王德勤，李楚源，張一凡，覃仁安

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復(fù)方丹參片對血瘀模型大鼠的實驗研究

張曉燕，王德勤，李楚源，張一凡，覃仁安

（廣州白云山和記黃埔中藥有限公司，廣東 廣州510515）

摘要：目的探討復(fù)方丹參片對血瘀證模型動物相關(guān)指標的影響。方法建立大鼠急性血瘀模型，通過檢測血液流變學(xué)、血小板聚集以及血栓質(zhì)量及抑制率評價復(fù)方丹參片對血瘀大鼠的作用；建立大鼠動靜脈旁路血栓模型，觀察復(fù)方丹參片對大鼠動靜脈旁路血栓的影響。結(jié)果復(fù)方丹參片高、中劑量組可以抑制血小板聚集，降低紅細胞聚集能力、全血黏度及血漿黏度，增加紅細胞的變形能力，延長血漿凝血酶原時間（PT）、凝血酶時間（TT），降低血漿纖維蛋白原（FIB）含量；低劑量組延長血漿TT。復(fù)方丹參片對大鼠動靜脈旁路血栓的濕質(zhì)量及干質(zhì)量具有明顯的降低作用，與模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論復(fù)方丹參片具有改善血瘀模型大鼠血液流變性、抑制血小板聚集及血栓形成的作用，對大鼠動靜脈旁路血栓也有抑制作用。

關(guān)鍵詞：復(fù)方丹參片；血瘀模型；血液流變性；血小板聚集

血瘀證是中醫(yī)臨床比較常見的一種證候，許多心腦血管疾病諸如腦卒中、心肌梗死、冠心病等常伴有血瘀的病理過程。臨床上常以血液流變性、血小板聚集功能和凝血功能等作為診斷血瘀證的重要指標。復(fù)方丹參片由丹參、三七、冰片三味藥組成，具有活血化淤、理氣止痛之功效，主要用于氣滯血瘀所致的胸痹，癥見胸悶、心前區(qū)刺痛、冠心病心絞痛見上述證候者。本文旨在觀察復(fù)方丹參片對血瘀證大

網(wǎng)絡(luò)出版時間：2016-05-30 10：35 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/44.1413.R.20160530.1035.003.html鼠血液流變學(xué)、血小板聚集以及血栓質(zhì)量及抑制率的影響，評價其活血化淤作用，為其臨床治療缺血性心、腦血管疾病提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗藥物

復(fù)方丹參片（0.3 g/片，每克藥粉相當于生藥2 g），廣州白云山和記黃埔中藥有限公司生產(chǎn)，批號：H4A035，實驗前配成所需濃度的水溶液；脈絡(luò)寧口服液，金陵藥業(yè)股份有限公司，批號：150301；阿司匹林腸溶片（0.1 g/片），沈陽奧吉娜藥業(yè)有限公司，批號：150317。

1.2 實驗動物

SD大鼠，雄性，體質(zhì)量250～350 g，購自廣東省醫(yī)學(xué)動物中心，生產(chǎn)許可證號：SCXK（粵）2008-0002。

1.3 主要儀器

LG-PABER型血小板聚集及凝血因子分析儀、LG-R-80系列血液黏度儀、LG-R-190型紅細胞變形/聚集能力測定儀（北京世帝科學(xué)儀器公司）。

1.4 方法

1.4.1 對急性血瘀模型［1］大鼠血液流變學(xué)及血小板凝集的影響 取SD雄性大鼠60只，隨機分為6組，即生理鹽水組、模型組（以上兩組給予等容積的生理鹽水）、陽性藥物組（8.3 g/kg脈絡(luò)寧）、復(fù)方丹參片低劑量組（0.225 g/kg）、中劑量組（0.45 g/kg）、高劑量組（0.90 g/kg），給藥容積為10 mL/kg，口服連續(xù)給藥6 d。于第5次給藥后，除生理鹽水組外，各組動物皮下注射鹽酸腎上腺素注射液（Adr）0.8 mL/kg，共2次，間隔4 h，在2次注射Adr之間（第1次注射后2 h），將大鼠置于冰水中浸泡5 min，造成血瘀證模型。禁食24 h后，于手術(shù)前30 min給藥1次，以10%（φ）水合氯醛麻醉（300 mg/kg，ip），仰位固定，頸動脈插管放血，用3.8%（ρ）的枸櫞酸鈉或肝素鈉生理鹽水溶液（500 u/mL）按1∶9抗凝，檢測血液流變學(xué)的各項指標。

（1）對大鼠血小板聚集率的影響

將3.8%的枸櫞酸鈉抗凝的血液以800 r/min離心10 min，取富血小板血漿（PRP），剩余部分以3 000 r/min離心，取貧血小板血漿（PPP），利用LGPABER型血小板聚集及凝血因子分析儀記錄最大聚集率并按下列公式計算抑制率。

聚集抑制率=模型組最大聚集率/給藥組最大聚集率×100%模型組最大聚集率

（2）血液黏度檢測

將肝素抗凝的血液采用LG-R-80系列血液黏度儀測定全血黏度。全血測試完畢后，剩余血樣以3 000 r/min離心，進行血漿黏度的測試。將肝素抗凝的血液采用LG-R-190型紅細胞變形/聚集能力測定儀測定紅細胞變形能力、紅細胞聚集能力。

（3）凝血系統(tǒng)的檢測

將3.8%的枸櫞酸鈉抗凝的血液以3 000 r/min離心10 min，分離血小板血漿，采用LG-PABER型血小板聚集及凝血因子分析儀測定活化部分凝血酶原時間（APTT）、凝血酶原時間（PT）、血漿纖維蛋白原（FIB）。

1.4.2 對大鼠動靜脈旁路血栓［2］質(zhì)量及抑制率的影響 SD雄性大鼠50只，隨機分為5組，即模型組（給予等容積生理鹽水）、陽性藥物組（0.01 g/kg阿司匹林）、復(fù)方丹參片低劑量組（0.225 g/kg）、中劑量組（0.45 g/kg）、高劑量組（0.90 g/kg），口服灌胃給藥4 d，給藥容積為10 mL/kg。以10%（φ）水合氯醛麻醉（300 mg/kg，ip），仰位固定，分離右頸總動脈及左頸外靜脈。取3段聚乙烯管，其中兩段管內(nèi)徑為1 mm，長約6 cm，中間段內(nèi)徑為2 mm，長約6.5 cm。在3段管的中段放入一根長約5 cm的4號手術(shù)線。用充滿肝素（50 u/mL）生理鹽水的聚乙烯管的一端插入左頸外靜脈，再將聚乙烯管的另一端插入右頸總動脈，末次給藥30 min后開放血流，15 min后中斷血流，迅速取出絲線稱質(zhì)量，血栓濕質(zhì)量為總質(zhì)量減去絲線質(zhì)量。再將血栓充分干燥（60℃，24 h），稱質(zhì)量，減去絲線質(zhì)量即為血栓干質(zhì)量。按下列公式計算血栓抑制率

抑制率=模型組血栓質(zhì)量-給藥組血栓質(zhì)量×100%模型組血栓質(zhì)量

1.4.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS16.0軟件進行統(tǒng)計，實驗結(jié)果以±s表示，應(yīng)用單因素方差分析和組間t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 復(fù)方丹參片對大鼠血小板聚集率的影響

復(fù)方丹參片高、中劑量組與模型組相比可以顯著抑制血小板聚集（P＜0.05，P＜0.01），見表1。

表1 復(fù)方丹參片對血瘀證模型大鼠血小板聚集率的影響Table 1 　Effect of compound Danshen tablet on plateletaggregation rate in blood stasis rats（±s，n=10）

表1 復(fù)方丹參片對血瘀證模型大鼠血小板聚集率的影響Table 1 　Effect of compound Danshen tablet on plateletaggregation rate in blood stasis rats（±s，n=10）

與模型組比較：*P＜0.05，**P＜0.01。

組別　　劑量/ （g·kg-1）血小板最大聚集率/%聚集抑制率/%正常對照組　-　17.14±2.85**　-模型組　-　27.96±9.33　-脈絡(luò)寧組　8.30　18.82±4.92*　32.69復(fù)方丹參片低劑量組　0.225　25.99±8.36　7.05中劑量組　0.45　20.70±4.31*　25.97高劑量組　0.90　17.53±4.15**　37.30

2.2 復(fù)方丹參片對大鼠血液流變性的影響

高、中劑量能顯著降低紅細胞聚集能力（最大聚集指數(shù)、積分面積）、全血黏度（低、中切）及血漿黏度；增加紅細胞的變形能力（最大變形指數(shù)、積分面積）。結(jié)果見表2～3。

高劑量顯著延長血漿APTT、PT、TT，降低血漿FIB含量。中劑量延長血漿PT、TT，降低血漿FIB含量。低劑量組延長血漿TT，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）。見表4。

2.3 復(fù)方丹參片對大鼠動靜脈旁路血栓的影響

復(fù)方丹參片對大鼠動靜脈旁路血栓的濕質(zhì)量及干質(zhì)量具有明顯的降低作用，與模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）。見表5。

3 討論

本實驗中，在給予大鼠冰水刺激的基礎(chǔ)上，用鹽酸腎上腺素皮下注射，可使大鼠外周血管強烈收縮，心臟后負荷增加，心肌耗氧量增加，心功能下降，從而導(dǎo)致血管運行障礙，血液黏度增加，形成血瘀的病理改變［1］。實驗顯示模型組大鼠血液流變學(xué)指標與正常對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，表明血瘀模型成功復(fù)制。

表2 復(fù)方丹參片對血瘀證模型大鼠紅細胞變形及聚集能力的影響Table 2 Effect of compound Danshen tablet on erythrocyte deformability and aggregation index in blood stasis rats（±s，n=10）

表2 復(fù)方丹參片對血瘀證模型大鼠紅細胞變形及聚集能力的影響Table 2 Effect of compound Danshen tablet on erythrocyte deformability and aggregation index in blood stasis rats（±s，n=10）

與模型組比較：*P＜0.05，**P＜0.01。

組別　　劑量/ （g·kg-1）紅細胞聚集能力　紅細胞變形能力最大聚集指數(shù)/%　　積分面積　最大聚集指數(shù)/%　　積分面積正常對照組　-　1.42±0.22**　253.90±63.12**　32.20±7.60**　150.30±34.23**模型組　-　1.83±0.38　367.10±75.46　21.47±6.96　100.20±26.10脈絡(luò)寧組　8.30　1.44±0.33*　295.10±65.15*　32.83±7.51**　155.90±39.80**復(fù)方丹參片 低劑量組　0.225　1.73±0.59　311.70±105.1　18.33±11.41　86.30±50.10中劑量組　0.45　1.45±0.36*　304.80±47.43*　29.54±9.17*　136.50±46.10*高劑量組　0.90　1.19±0.21**　246.50±44.18**　34.51±8.03**　157.40±36.30**

表3 復(fù)方丹參片對血瘀證模型大鼠血液黏度的影響Table 3 Effect of compound Danshen tablet on blood viscosity in blood stasis rats（±s，n=10）

表3 復(fù)方丹參片對血瘀證模型大鼠血液黏度的影響Table 3 Effect of compound Danshen tablet on blood viscosity in blood stasis rats（±s，n=10）

與模型組比較：*P＜0.05，**P＜0.01。

組別　　劑量/ （g·kg-1）全血黏度高切/（200s-1）　中切/（30s-1）　　中切/（5s-1）　　低切/（1s-1）血漿黏度/ （100s-1）正常對照組　-　5.34±0.77*　7.29±1.24*　13.11±2.34**　29.34±9.08**　1.65±0.30**模型組　-　6.51±1.13　9.27±1.87　17.75±4.37　43.32±11.51　2.04±0.27脈絡(luò)寧組　8.30　5.63±1.36　7.35±1.31*　12.90±2.57**　30.49±6.66**　1.75±0.15*復(fù)方丹參片 低劑量組　0.225　6.31±1.13　9.67±1.94　17.20±2.79　39.71±9.84　1.89±0.15中劑量組　0.45　6.10±0.74　7.33±1.66*　13.76±2.69*　31.41±5.48*　1.72±0.32*高劑量組　0.90　5.75±1.18　7.57±1.44*　13.09±2.57**　31.95±7.66*　1.73±0.28*

表4 復(fù)方丹參片對血瘀證模型大鼠APTT、TT、PT、FIB的影響Table 4 Effect of compound Danshen tablet on APTT，PT，TT and FIB in blood stasis rats（±s，n=10）

表4 復(fù)方丹參片對血瘀證模型大鼠APTT、TT、PT、FIB的影響Table 4 Effect of compound Danshen tablet on APTT，PT，TT and FIB in blood stasis rats（±s，n=10）

與模型組比較：*P＜0.05，**P＜0.01。

組別　　劑量/（g·kg-1）　APTT/s　PT/s　TT/s　FIB/（g·kg-1）正常對照組　-　24.56±2.50*　20.58±3.68**　25.04±2.58*　1.40±0.45**模型組　-　21.46±3.05　14.85±3.53　21.17±3.57　2.44±0.88脈絡(luò)寧組　8.30　23.80±2.02　19.11±4.61*　24.23±2.02*　1.40±0.47**復(fù)方丹參片 低劑量組　0.225　19.51±3.98　19.08±3.78　29.22±8.64*　2.33±0.80中劑量組　0.45　23.17±1.62　18.63±3.93*　24.33±2.92*　1.64±0.59*高劑量組　0.90　24.79±2.54*　17.19±2.93*　25.25±2.75*　1.59±0.36*

表5 復(fù)方丹參片對大鼠動靜脈旁路血栓干、濕質(zhì)量的影響Table 5 Effect of compound Danshen tablet on dry and wet weights of arteriovenous shunt thrombosis in rats（±s，n=10）

表5 復(fù)方丹參片對大鼠動靜脈旁路血栓干、濕質(zhì)量的影響Table 5 Effect of compound Danshen tablet on dry and wet weights of arteriovenous shunt thrombosis in rats（±s，n=10）

與模型組比較：*P＜0.05，**P＜0.01。

組別　　劑量/（g·kg-1）　　血栓濕質(zhì)量/mg　　濕質(zhì)量抑制率/%　　血栓干質(zhì)量/mg　干質(zhì)量抑制率/%模型組　-　34.28±12.58　-　2.68±1.16　-阿司匹林組　0.01　19.54±7.85**　43.00　1.36±0.88*　49.25復(fù)方丹參片 低劑量組　0.225　23.50±8.54*　31.45　2.49±0.70　7.09中劑量組　0.45　20.91±9.97*　39.00　1.71±0.67*　36.19高劑量組　0.90　21.13±4.02**　38.36　1.64±0.58*　38.81

血瘀證是中醫(yī)臨床中常見的基本證候，是心血管疾病發(fā)展的共同的病理生理基礎(chǔ)［3］。本實驗通過預(yù)防性給藥影響血瘀證的發(fā)生，以預(yù)防血淤證為切入點，分別從血液流變學(xué)、血小板聚集、血栓質(zhì)量及抑制率等多方面，分別與脈絡(luò)寧和阿司匹林進行比較，全面評價復(fù)方丹參片改善血瘀證證候的作用。

雖然復(fù)方丹參片對于血瘀證動物模型的藥理研究有報道，但是如本文這樣系統(tǒng)性、規(guī)范性的多劑量組實驗研究并不多見。脈絡(luò)寧主要由牛膝、玄參等中藥組成，具有清熱養(yǎng)陰、活血祛淤等功效，研究表明其具有改善凝血、改善血液流變性、擴張血管、增加血流和改善微循環(huán)等作用，臨床常用于Ⅰ、Ⅱ期動脈硬化性閉塞癥及血栓閉塞性脈管，另有研究表明脈絡(luò)寧口服液對缺血性中風有治療作用，且療效與注射液相當［4］。小劑量阿司匹林能抑制血小板聚集，從而產(chǎn)生抗血栓作用。本實驗根據(jù)不同的實驗?zāi)Ｐ秃退幬锏淖饔锰攸c選用不同的陽性對照藥。結(jié)果顯示，復(fù)方丹參片具有改善血淤模型大鼠血液流變性、抑制血小板聚集及血栓形成的作用；同時復(fù)方丹參片對大鼠動靜脈旁路血栓也有抑制作用，高劑量的作用與阿司匹林相當。本課題組早期在大腦中動脈缺血再灌注所致血管性癡呆大鼠腦損傷及學(xué)習(xí)記憶功能的研究［5］中證實了復(fù)方丹參片能顯著改善血管性癡呆的癥狀。此外，復(fù)方丹參片在心肌酶譜的改善［6］、抗氧化、保護缺血而受損的神經(jīng)元［7］、改善認知障礙和學(xué)習(xí)記憶能力［8］、降低阿爾茨海默病大鼠的腦內(nèi)興奮性氨基酸的含量［9-10］等方面也有顯著的效果。本研究從血管性癡呆成因方面探討復(fù)方丹參片的活血化淤、抗血栓作用，為有效防治血管性癡呆提供理論依據(jù)。

復(fù)方丹參片作為傳統(tǒng)的中藥制劑，在治療心腦血管疾病方面有顯著的療效。現(xiàn)代研究表明，冠心病、心絞痛、動脈粥樣硬化、血栓的形成過程中，血小板起著重要的作用。已有研究表明，復(fù)方丹參片主要成分丹參與三七均有顯著的抑制血小板聚集的作用。丹參主要成分丹參酮ⅡA顯著降低血小板活性及凝血活性，丹酚酸B顯著抑制血小板活化，丹參素顯著延長凝血時間，抑制血小板聚集率，降低血沉、紅細胞壓積、紅細胞變形指數(shù)及紅細胞電泳時間等［11］。三七主要活性成分三七總皂苷及人參皂苷Rg1、Rb均能夠抑制血小板聚集率［12］，本品三味藥合理配比，多成分、多靶點綜合作用，有效改善心腦血管性疾病，為其在心腦血管方面的臨床運用提供了理論依據(jù)。

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（責任編輯：幸建華）

中圖分類號：R285.5

文獻標志碼：A

文章編號：1006-8783（2016）03-0344-04

DOI：10.16809/j.cnki.1006-8783.2016031701

收稿日期：2016-03-17

基金項目：國家科技部“十二五”重大專項資助項目（2011ZX09201-201-01）

作者簡介：張曉燕（1983—），女，碩士，主要從事中藥藥理與臨床研究，Email：abczxy22@163.com；通信作者：覃仁安（1964—），男，博士，主要從事中藥藥理與臨床研究，Email：qinrenan@813zy.com。

Effect of compound Danshen tablet on the rat model with blood stasis

ZHANG Xiaoyan，WANG Deqin，LI Chuyuan，ZHANG Yifan，QIN Renan
（Hutchison Whampoa Guangzhou Baiyunshan Chinese Medicine Co.Ltd，Guangzhou 510515，China）

AbstractObjective To investigate the effect of compound Danshen tablet on hemorrheology platelet aggregation and thrombus weight and inhibition rate of blood stasis rats.Methods The blood stasis rat model was established to evaluate the effect of compound Danshen tablet by detecting hemorrheology indexes platelet aggregation and thrombus weight and inhibition rate.The rat model with arteriovenous shunt thrombosis caused by surgery was established to observe the effect of compound Danshen tablet.

Results Compared with the control group platelet aggregation was inhibited in the middle and high dose groups.Meantime RBC gather capacity blood viscosity plasma viscosity and FIB content were reduced. Deformation ability of red blood cells plasma PT and TT were increased.Plasma TT was increased in low dose group.Dry and wet weights of arteriovenous shunt thrombosis were reduced in compound Danshen tablet groups P＜0.05 .Conclusion Compound Danshen tablet can improve hemorrheology of blood stasis rats and inhibit platelet aggregation and thrombus.

Key wordscompound Danshen tablet blood stasis hemorrheology platelet aggregation