張　欣　劉　遠(yuǎn)　葛建立　馬云龍　李曉東　張青天

(河北省中醫(yī)院外科，河北　石家莊　050011)

芪黃疽愈方對肢體動脈硬化閉塞癥大鼠血脂水平的影響※

張欣劉遠(yuǎn)葛建立△馬云龍李曉東1張青天

(河北省中醫(yī)院外科，河北石家莊050011)

【摘要】目的觀察芪黃疽愈方對肢體動脈硬化閉塞癥(ASO)大鼠血脂水平的影響。方法將60只Wistar大鼠隨機(jī)分為6組，空白組、模型組、西藥組及芪黃疽愈方低、中、高劑量組，每組各10只。應(yīng)用高脂飼料喂飼及隱動脈內(nèi)膜損傷的方法制作大鼠 ASO 模型?？瞻捉M予普通飲食喂養(yǎng)。模型組予0.9%氯化鈉注射液灌胃。芪黃疽愈方低、中、高劑量組均予相應(yīng)劑量芪黃疽愈方灌胃。西藥組予注射用前列地爾干乳劑腹腔注射，西洛他唑片灌胃。除空白組外，其余5組均高脂飼料喂養(yǎng)，并在實(shí)驗(yàn)開始時在大鼠右下肢肌肉注射維生素D3注射液。比較各組大鼠血脂水平變化。結(jié)果模型組血總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)及極低密度脂蛋白膽固醇(VLDL-C)均較空白組升高(P<0.01)，高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)降低(P<0.01)，說明造模成功。芪黃疽愈方低劑量組僅TG較模型組降低(P<0.01)，芪黃疽愈方中劑量組僅TC、TG較模型組降低(P<0.01)，芪黃疽愈方高劑量組、西藥組TC、TG、LDL-C及VLDL-C均較模型組降低(P<0.01)，HDL-C升高(P<0.01)。芪黃疽愈方高劑量組HDL-C高于西藥組(P<0.01)。結(jié)論芪黃疽愈方可降低血清TC、TG、LDL-C及VLDL-C，升高HDL-C，通過改善血脂代謝紊亂，達(dá)到治療ASO目的。

【關(guān)鍵詞】動脈硬化，閉塞性；動物，實(shí)驗(yàn)；黃芪；黃精；中藥療法

肢體動脈硬化閉塞癥(arteriosclerosis obliterans，ASO)是由動脈粥樣硬化斑塊形成引起肢體動脈狹窄、閉塞，進(jìn)而導(dǎo)致肢體慢性缺血。隨著我國生活方式的改變和人口老齡化，ASO的發(fā)病率逐年提高，且發(fā)病率隨年齡增長而上升，70歲以上人群的發(fā)病率在15%～20%，男性發(fā)病率略高于女性[1]。大量研究證實(shí)，高脂血癥是動脈粥樣硬化的重要危險因子，血漿脂蛋白、低密度脂蛋白水平持續(xù)升高，與動脈粥樣硬化的發(fā)病率呈正相關(guān)，高甘油三酯(TG)也是ASO的獨(dú)立危險因素[2]。本研究通過探討芪黃疽愈方對實(shí)驗(yàn)大鼠血脂的影響，為中醫(yī)藥治療ASO提供理論基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動物8～10個月齡清潔級 Wistar 大鼠60只，體質(zhì)量(200±20)g，由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，動物質(zhì)量合格證號：1504024。實(shí)驗(yàn)室溫度為21～25 ℃，濕度為40%～60%，自由飲水，每日光照12 h。

1.1.2實(shí)驗(yàn)試劑及儀器日立7600-020型全自動生化分析儀[日本株式會社日立高新技術(shù)，進(jìn)口產(chǎn)品注冊號：國食藥監(jiān)械(進(jìn))字2011第2401157號]。

1.1.3高脂飼料配制83.85%基礎(chǔ)飼料，5%豬油，1%膽固醇，0.15%膽酸鈉及10%蛋黃粉[3]，其中膽固醇、膽酸鈉、蛋黃粉均購于石家莊市勃盛化學(xué)試劑有限公司，豬油購于市場。

1.1.4實(shí)驗(yàn)藥物芪黃疽愈方藥物組成：黃芪20 g，黃精12 g，紅花12 g，鬼箭羽12 g，土鱉蟲9 g，雞血藤15 g，延胡索12g，牛膝9 g，海藻12 g。按原方的組方比例，并根據(jù)體表面積的比率折算出200 g大鼠的等效用藥劑量作為芪黃疽愈方中劑量組用量，另取其1/2 劑量和2倍劑量作為芪黃疽愈方低劑量組和芪黃疽愈方高劑量組。由河北省中醫(yī)院藥劑科統(tǒng)一購買飲片，并請河北省中醫(yī)院藥劑科主任鑒定，符合中華人民共和國藥典(2005年版) 各項(xiàng)規(guī)定，由河北省中醫(yī)院煎藥室煎制，4 ℃冰箱保存，芪黃疽愈方中劑量組的最終劑量為0.75 g生藥/mL，低劑量組為0.35 g生藥/mL，高劑量組為1.5 g生藥/mL，實(shí)驗(yàn)過程中每次中藥制劑均按同一標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。注射用前列地爾干乳劑(重慶藥友制藥有限責(zé)任公司，國藥準(zhǔn)字H20100047)；西洛他唑片(浙江大冢制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H10960014)；維生素D3注射液(上海通用藥業(yè)股份有限公司，國藥準(zhǔn)字H31021404)。

1.2方法

1.2.1選擇分組將60只Wistar大鼠隨機(jī)分為6組，空白組、模型組、西藥組及芪黃疽愈方低、中、高劑量組，每組各10只。

1.2.2模型制作應(yīng)用高脂飼料喂飼及隱動脈內(nèi)膜損傷的方法制作大鼠 ASO 模型[4]。①實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，排除飲食異常大鼠，空白組予普通飲食喂養(yǎng)，其余5組均予高脂飼料喂養(yǎng)1周。②于清潔動物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)用1%戊苯巴比妥鈉1 mL/200 g腹腔注射麻醉，除空白組外，其余5組每只大鼠取左后肢消毒，從腹股溝中點(diǎn)向后肢內(nèi)側(cè)縱行切開皮膚，分離并暴露隱動脈，用動脈夾阻斷隱動脈遠(yuǎn)近端約1.5～2.0 cm，取胰島素注射器1支，沿隱動脈血管長軸由遠(yuǎn)端向近端刺入血管腔，將注射用無菌蒸餾水0.2～0.3 mL緩慢注入阻斷部位血管，至血管充盈為止，5 min后取下針頭和動脈夾，壓迫止血，縫合切口，內(nèi)膜損傷模型完成，共造模50只大鼠。

1.2.3給藥方法空白組普通飲食喂養(yǎng)，自由飲水。模型組予0.9%氯化鈉注射液1 mL/100 g灌胃，每日1次，連續(xù)12周，自由飲水。芪黃疽愈方低、中、高劑量組均予相應(yīng)劑量芪黃疽愈方灌胃(1 mL/100 g體質(zhì)量)，每日1次，連續(xù)12周，自由飲水。西藥組予注射用前列地爾干乳劑0.4 μg/(kg·d)腹腔注射，每日1次，持續(xù)2周；西洛他唑片18 mg/kg體質(zhì)量灌胃，每日 1次，連續(xù)12周，自由飲水。除空白組外，其余5組均高脂飼料喂養(yǎng)，并在實(shí)驗(yàn)開始時在大鼠右下肢肌肉注射維生素D3注射液3×105U/kg體質(zhì)量，每隔30 d重復(fù)1次。

1.3標(biāo)本采集及處理方法麻醉大鼠方法同前，腹部消毒，剪開皮膚，由腹主動脈采血2～4 mL，在全自動生化分析儀上測定總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)及極低密度脂蛋白膽固醇(VLDL-C)含量。

2結(jié)果

各組大鼠血脂水平比較見表1。

組 別nTCTGHDL-CLDL-CVLDL-C空白組101.80±0.080.72±0.090.63±0.081.03±0.080.43±0.07模型組102.98±0.55*1.44±0.31*0.43±0.06*2.27±0.38*0.80±0.13*芪黃疽愈方低劑量組102.75±0.140.89±0.08△0.42±0.082.21±0.170.76±0.15芪黃疽愈方中劑量組102.51±0.38△0.82±0.07△0.46±0.06△2.04±0.160.69±0.07芪黃疽愈方高劑量組102.24±0.16△0.76±0.07△0.50±0.09△#1.72±0.22△0.59±0.08△西藥組102.26±0.27△0.83±0.14△0.47±0.04△2.05±0.09△0.69±0.07△

與空白組比較，*P<0.01；與模型組比較，△P<0.01；與西藥組比較，#P<0.01

由表1可見，模型組血脂TC、TG、LDL-C及VLDL-C均較空白組升高(P<0.01)，HDL-C降低(P<0.01)，說明造模成功。芪黃疽愈方低劑量組僅TG較模型組降低(P<0.01)；芪黃疽愈方中劑量組僅TC、TG較模型組降低(P<0.01)，HDL-C升高(P<0.01)；芪黃疽愈方高劑量組、西藥組TC、TG、LDL-C、VLDL-C均較模型組降低(P<0.01)，HDL-C升高(P<0.01)。芪黃疽愈方高劑量組HDL-C高于西藥組(P<0.01)。

3討論

血脂代謝紊亂與動脈粥樣硬化形成已經(jīng)過大量的臨床及動物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，血脂水平對ASO的發(fā)生及嚴(yán)重程度有著直接的影響，其中以LDL-C升高和HDL-C降低為其關(guān)鍵的易患因素。大量流行病學(xué)研究已證實(shí)，血脂異常與冠狀動脈粥樣硬化及腦血栓發(fā)生的危險性呈正相關(guān)。在動脈硬化病變中的脂質(zhì)主要是由血漿中的脂質(zhì)滲入，其途徑有以下幾種方式：①內(nèi)皮細(xì)胞直接吞飲；②透過內(nèi)皮細(xì)胞間隙；③經(jīng)由內(nèi)皮細(xì)胞的低密度脂蛋白受體；④通過受損后通透性增加的內(nèi)皮細(xì)胞；⑤通過因內(nèi)皮細(xì)胞缺失而直接暴露在血流的內(nèi)膜組織，進(jìn)入內(nèi)膜和中層的物質(zhì)，代謝后其分解產(chǎn)物易于溶解，經(jīng)外膜的毛細(xì)血管和淋巴系統(tǒng)排出[5]。脂蛋白中只有膽固醇不能在血管中代謝，最后沉積，刺激纖維組織增生，形成動脈粥樣斑塊。ASO是全身性動脈粥樣硬化在肢體局部的表現(xiàn)，因此調(diào)脂治療也成為防治ASO的重要手段。

ASO屬中醫(yī)學(xué)脫疽范疇，《素問·生氣通天論》謂“膏梁之變，足生大疔”，清代王清任在《醫(yī)林改錯·下卷》中指出“元?dú)饧忍?，必不能達(dá)于血管，血管無氣，必停留而瘀”。平素喜食肥甘厚味，致肝失疏泄，脾失健運(yùn)，中焦氣機(jī)不利，飲食水谷不化氣血津液，元?dú)馓撊?，血無氣之推動，瘀阻脈道，而成脫疽。而芪黃疽愈方針對脫疽之瘀阻脈絡(luò)的病機(jī)綜合治療，臨床療效明顯。方中黃芪、黃精補(bǔ)氣健脾益腎；紅花、延胡索、雞血藤活血化瘀舒筋；海藻、鬼箭羽、土鱉蟲破血逐瘀；牛膝逐瘀通經(jīng)，引血下行?，F(xiàn)代藥理研究表明，黃精的提取物黃精多糖尚有調(diào)節(jié)高脂血癥實(shí)驗(yàn)動物血脂代謝和抗實(shí)驗(yàn)性動物動脈粥樣硬化形成的作用[5]；鬼箭羽具有一定的調(diào)脂作用，可升高HDL-C和降低TC，延緩動脈粥樣硬化形成[6]；紅花的抗血栓作用主要是通過抑制血小板聚集和抑制凝血系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)的[7]；土鱉蟲水提液能顯著降低高脂血癥大鼠血清TC、TG和LDL-C水平，高劑量組還可明顯升高血清HDL-C水平，充分顯示了土鱉蟲對血脂的調(diào)節(jié)作用[8]。

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，與正常組比較，模型組大鼠血清TC、TG、LDL- C及VLDL-C指標(biāo)明顯上升(P<0.01)，HDL-C下降(P<0.01)，說明高脂飼料喂養(yǎng)使大鼠體內(nèi)呈現(xiàn)高脂狀態(tài)，這是動脈硬化的基礎(chǔ)。與模型組比較，西藥組、芪黃疽愈方高劑量組大鼠血清TC、TG、LDL-C及VLDL-C指標(biāo)下降(P<0.01)，提示芪黃疽愈方及西洛他唑片均有降低血脂的作用。而與西藥組比較，芪黃疽愈方高劑量組血清TC、LDL-C、TG及VLDL-C上升均不明顯。針對大鼠血清HDL-C，各組進(jìn)行兩兩比較，芪黃疽愈方中、高劑量組及西藥組與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.01)，且芪黃疽愈方高劑量組HDL-C高于西藥組(P<0.01)。說明芪黃疽愈方與西洛他唑片調(diào)節(jié)血脂作用相當(dāng)，芪黃疽愈方高濃度組升高HDL-C作用優(yōu)于西藥組。流行病學(xué)及臨床研究已證明，HDL-C與冠心病、動脈粥樣硬化等疾病發(fā)生幾率呈負(fù)相關(guān)，所以提高HDL-C對于保護(hù)血管系統(tǒng)、防治動脈硬化具有積極意義[10-11]。

本研究結(jié)果證實(shí)了芪黃疽愈方具有顯著的調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝作用，能有效糾正ASO大鼠的脂質(zhì)代謝紊亂，降低ASO大鼠血清TC、TG、LDL-C及VLDL-C水平，升高HDL-C水平，提示芪黃疽愈方防治ASO與調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝有關(guān)，為其廣泛應(yīng)用于臨床提供了理論基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)

[1]中華醫(yī)學(xué)會外科學(xué)分會血管外科學(xué)組.下肢動脈硬化閉塞癥診治指南[J].中華醫(yī)學(xué)雜志，2015，(24):1883-1896.

[2]龐劍，杜文斌.高脂血癥的中西醫(yī)研究集析[J].中醫(yī)藥學(xué)刊，2003，21(12):2124-2125.

[3]石鶴坤，張宏，杜青云，等.三種高脂乳劑誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)性大鼠高脂血癥模型的比較[J].中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2012，22(9):55-57.

[4]車兆義，宋清斌，張繼文，等.大鼠動脈硬化閉塞模型兩種構(gòu)建方法的比較[J].中國組織工程研究與臨床康復(fù)，2008，12(50):9841-9844.

[5]李友元，鄧洪波，向大雄，等.黃精多糖的降血脂及抗動脈粥樣硬化作用[J].中國動脈硬化雜志，2005，13(4):429-431.

[6]張麗芬，趙進(jìn)喜.中藥鬼箭羽研究近況[J].中國中藥雜志，2005，30(24):1895-1898.

[7]陳夢，趙丕文，孫艷玲，等.紅花及其主要成分的藥理作用研究進(jìn)展[J].環(huán)球中醫(yī)藥，2012，5(7):556-560.

[8]于燕，劉繼蘭，王菊英，等.土鱉蟲水提液對實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用[J].山東大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2002，40(5):398-400.

[9]符影，程悅，陳建萍，等.雞血藤化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].中草藥，2011，42(6):1229-1234.

[10]俞瑞珺，徐海萍.老年血脂正常冠狀動脈粥樣硬化性心臟病患者采用不同劑量阿托伐他汀治療的臨床研究[J].現(xiàn)代診斷與治療，2015，26(22)：5125-5126.

[11]羅招川，林良才，黃永培.不同他汀類藥物對單純動脈粥樣硬化病人頸動脈內(nèi)膜中層厚度及血脂的影響[J].中國醫(yī)療器械信息，2015，21(02Z)：33-34.

(本文編輯：習(xí)沙)

Effects of Qihuang-juyu formula on blood liquid in rats with arteriosclerosis obliterans

ZHANGXin,LIUYuan,GEJianli,etal.

DepartmentofSurgery,HospitalofTraditionalChineseMedicineinHebeiProvince,Hebei,Shijiazhuang050011

【Abstract】ObjectiveTo observe the effects of Qihuang-juyu formula on blood liquid in rats with arteriosclerosis obliterans (ASO). Methods 60 Wistar rats were randomly divided into six groups, that blank group, model group, western medicine group and Qihuang-juyu formula low, middle, high dose group, 10 rats in each group. The model of ASO was established by high fat diet feeding and saphenous arterial intimal injury method. Rats in blank group were feed with normal group. Rats in model group were received 0.9% sodium chloride injection by gavage. Rats in Qihuang-juyu formula low, middle, high dose group were received corresponding concentration of Qihuang-juyu formula by gavage. Rats in western medicine group were received intraperitoneal injection of alprostadil dried emulsion for injection and cilostazol tablets by gavage. Except the blank group, rats in other five groups were feed with high fat diet, and intramuscular injection of vitamin D3injection on right lower extremity at the beginning of the experiment. The changes of blood liquid were compared. Results The total cholesterol (TC), triglyceride (TC), low density lipoprotein cholesterol (LDL-L) and very low density lipoprotein cholesterol (VLDL-L) in model group were higher than those in blank group (P<0.01), and high density lipoprotein cholesterol (HDL-L) was decreased (P<0.01), which indicated that the ASO model was successful established. Only the TG in low dose group was decreased as compared with that in model group (P<0.01), only the TC and TG in middle dose group were decreased as compared with those in model group (P<0.01). The TC, TG, LDL-C and VLDL-C in high dose and western medicine group were decreased as compared with those in model group (P<0.01), and the HDL-C was increased (P<0.01). The HDL-C in high dose group was higher than that in western medicine group (P<0.01). Conclusion Qihuang-juyu formula can decrease TC, TG, LDL-C and VLDL-C, increase HDL-C, improve liquid metabolism disorder, has therapeutic effects on ASO.

【Key words】Arteriosclerosis; Obliterans; Animals; Experiment; Huangqi; Huangjing; Traditional Chinese herbs therapy

doi:10.3969/j.issn.1002-2619.2016.05.024

通訊作者：△河北省中醫(yī)院外科，河北石家莊050011

作者簡介：張欣(1989—)，女，碩士研究生在讀，學(xué)士。研究方向：周圍血管病。

【中圖分類號】R323.7；R543.505；R-332；R-331

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A

【文章編號】1002-2619(2016)05-0725-04

(收稿日期：2015-09-06)

※ 項(xiàng)目來源：河北省科學(xué)技術(shù)廳2014年河北省省級科技計(jì)劃(第三批)項(xiàng)目(編號：14277760D)

1河北省石家莊市中醫(yī)院脈管二科，河北石家莊050051