周　雷　許立富　塔　娜　饒柱石　黃新生△

(1復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院耳鼻咽喉科　上海　200032;2上海交通大學(xué)振動(dòng)、沖擊、噪聲研究所機(jī)械系統(tǒng)與振動(dòng)國(guó)家重點(diǎn)試驗(yàn)室　上?！?00240)

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豚鼠耳蝸基底膜振動(dòng)的測(cè)試方法

周雷1許立富2塔娜2饒柱石2黃新生1△

(1復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院耳鼻咽喉科上海200032;2上海交通大學(xué)振動(dòng)、沖擊、噪聲研究所機(jī)械系統(tǒng)與振動(dòng)國(guó)家重點(diǎn)試驗(yàn)室上海200240)

【摘要】目的探索豚鼠耳蝸基底膜振動(dòng)測(cè)試的方法。方法用戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉豚鼠后,腹側(cè)切口,逐層切開(kāi)皮膚,分離肌肉,可見(jiàn)聽(tīng)泡位于豚鼠下頜骨內(nèi)側(cè)深面,鈍性分離聽(tīng)泡表面的肌肉組織,暴露聽(tīng)泡,用電鉆將聽(tīng)泡打開(kāi),可見(jiàn)螺旋形耳蝸結(jié)構(gòu),辨認(rèn)基底膜所在的部位。用電鉆在需要開(kāi)孔的骨壁上輕磨一個(gè)環(huán)形的凹陷,待足夠薄弱的時(shí)候用尖頭的刀片挑開(kāi)骨片。用具有微細(xì)尖端的不銹鋼針蘸取少量反光微珠,放置在基底膜上。然后用激光多普勒測(cè)振儀(laser doppler vibrometer,LDV)測(cè)量基底膜在外耳道純音激勵(lì)下的振動(dòng)。結(jié)果用該方法測(cè)量了豚鼠耳蝸基底膜在不同頻率聲波激勵(lì)下的響應(yīng)曲線。結(jié)論該方法可進(jìn)行豚鼠耳蝸基底膜振動(dòng)的離體實(shí)驗(yàn),但活體的振動(dòng)測(cè)試尚需進(jìn)一步的探索。

【關(guān)鍵詞】耳蝸;基底膜;激光多普勒測(cè)振儀;豚鼠;振動(dòng)

*This work was supported by the National Natural Science Foundation of China (8117091,11072145).

聽(tīng)覺(jué)是非常重要的感覺(jué),對(duì)聽(tīng)覺(jué)機(jī)制的研究從未停止。19世紀(jì)60年代,Békésy在大量試驗(yàn)和觀測(cè)的基礎(chǔ)上提出了基底膜的行波理論,即不同頻率的純音輸入可以在基底膜的不同部位產(chǎn)生最大的振幅?？拷褕A窗處的基底膜對(duì)高頻聲音敏感,而蝸孔處的基底膜對(duì)低頻聲音敏感。然而,由于螺旋器的存在,使得基底膜具有更加復(fù)雜的主動(dòng)機(jī)制參與聲波信號(hào)的調(diào)制。1978年,Kemp[1]發(fā)現(xiàn)的耳聲發(fā)射便是耳蝸基底膜主動(dòng)特性的一個(gè)反應(yīng),作為客觀測(cè)聽(tīng)在臨床上已經(jīng)廣泛使用。

目前,人們對(duì)基底膜主動(dòng)特性的了解還不夠深入,對(duì)基底膜主動(dòng)特性的探索具有重要意義[2]。哺乳動(dòng)物具有相似的外、中、內(nèi)耳結(jié)構(gòu),其中豚鼠的中、內(nèi)耳結(jié)構(gòu)與人極為相似,具有十分敏銳的聽(tīng)力,且個(gè)體小、易飼養(yǎng),常被選做耳科實(shí)驗(yàn)動(dòng)物[3]。除以上的優(yōu)勢(shì)外,豚鼠的耳蝸直接暴露在聽(tīng)泡中,耳蝸壁薄,有利于實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行[4]。因此,本實(shí)驗(yàn)選用豚鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。

國(guó)外關(guān)于豚鼠耳蝸實(shí)驗(yàn)有較多的文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo),主要研究耳蝸毛細(xì)胞的主動(dòng)機(jī)制以及聽(tīng)覺(jué)神經(jīng)傳導(dǎo)通路[5-7]。國(guó)內(nèi)郭夢(mèng)和等[8-10]研究了各種理化因素對(duì)基底膜響應(yīng)的影響。近年Chen等[11]用豚鼠進(jìn)行了圓窗激勵(lì)振子的實(shí)驗(yàn)研究,并用激光多普勒測(cè)振儀測(cè)量基底膜的振動(dòng)來(lái)評(píng)價(jià)激勵(lì)的效果。以上實(shí)驗(yàn)方法有相似之處,但均缺少對(duì)具體實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)的描述,使得實(shí)驗(yàn)難以重復(fù)。本研究初期借鑒了這些實(shí)驗(yàn)方法,但是未能達(dá)到預(yù)期測(cè)試效果。本文試圖尋找合適的麻醉狀態(tài)下豚鼠耳蝸開(kāi)孔及基底膜振動(dòng)測(cè)試的方法。

材 料 和 方 法

動(dòng)物和儀器選用英國(guó)種純色豚鼠28只,雌雄不拘。動(dòng)物的使用通過(guò)了復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院倫理審查委員會(huì)的倫理審查。實(shí)驗(yàn)器材包括:解剖顯微鏡 (Leica m651)、耳科電鉆 (瑞士彼岸)、耳科顯微解剖器械、小動(dòng)物解剖臺(tái)、電熱毯、反光微珠 (Polytec Glass Beads)、激光多普勒測(cè)振儀(Polytec OFU 500)、信號(hào)發(fā)生器 (Tektronix AFG 3022B)、數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)。麻醉藥物包括新鮮配制的1.5%戊巴比妥鈉和地西泮。

麻醉與氣管切開(kāi)本實(shí)驗(yàn)選用的28只豚鼠中,14只用于麻醉后行活體實(shí)驗(yàn)探索,體質(zhì)量為 (582.32±138.24)g,另外14只豚鼠進(jìn)行離體實(shí)驗(yàn)。在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)之前,豚鼠均通過(guò)健康檢查,無(wú)中耳病變。

因豚鼠對(duì)麻醉比較敏感,麻醉死亡率高。本實(shí)驗(yàn)解剖及測(cè)試時(shí)間均較長(zhǎng),需要盡量延長(zhǎng)豚鼠的麻醉維持時(shí)間,所以選擇合適的麻醉方式十分關(guān)鍵。麻醉藥物為新鮮配置的1.5%戊巴比妥鈉30 mg/kg腹腔注射,地西泮5 mg/kg肌肉注射。術(shù)中根據(jù)需要補(bǔ)充初始麻醉劑量的1/3。平均麻醉維持時(shí)間為 (3.14±1.67)h。由于豚鼠麻醉后容易出現(xiàn)呼吸困難,因而術(shù)中需要進(jìn)行氣管切開(kāi)并置管。因未使用肌松劑,不需要進(jìn)行輔助呼吸。

離體實(shí)驗(yàn)的14只豚鼠采用過(guò)量戊巴比妥鈉腹腔注射進(jìn)行過(guò)量麻醉,然后予以斷頭,將聽(tīng)泡解剖出后進(jìn)行開(kāi)孔及測(cè)試。

體位及解剖活體實(shí)驗(yàn)時(shí)豚鼠的體位對(duì)實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行有重要的影響。如能維持穩(wěn)定的體位,將有利于實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行。本文采用顳骨夾將豚鼠固定于仰臥垂頭位。

待麻醉起效后,剪去豚鼠手術(shù)側(cè)下頜至頸部周圍的毛發(fā),并清除散落的毛屑。然后將豚鼠固定在小動(dòng)物解剖臺(tái)上,縱向切開(kāi)豚鼠一側(cè)下頜頸部的皮膚,長(zhǎng)約3 cm (如圖1所示的切口部位)。分離肌肉層,避開(kāi)肌肉層下方的血管,避免不必要的出血。用顯微撐開(kāi)器將肌肉組織和下頜骨撐開(kāi),盡可能拓寬手術(shù)視野(圖2)。分離并刮開(kāi)聽(tīng)泡上的肌肉后便可看到白色、蛋殼樣、呈球面的聽(tīng)泡[4]。向兩邊分開(kāi)或去除聽(tīng)泡上的肌肉組織,以利于后續(xù)實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行。

耳蝸壁開(kāi)孔豚鼠耳蝸骨壁堅(jiān)硬而質(zhì)脆,外力下容易破碎,所以不易打開(kāi)一個(gè)合適大小的孔。實(shí)驗(yàn)初期曾采用國(guó)外文獻(xiàn)中描述的方法,即用小的尖刀片緩慢將耳蝸壁削薄,然后再開(kāi)孔[6,12-13]。但實(shí)際中操作十分困難,不適當(dāng)?shù)耐饬ο氯菀资苟伷扑?改進(jìn)實(shí)驗(yàn)方法以后便沒(méi)有破碎發(fā)生。

RW:Round window;BM:Basilar membrane.

圖1豚鼠體位示意圖及打開(kāi)聽(tīng)泡后的視野

Fig 1Illustration of guinea pig position and incision view after opening of the bulla

1:Basilar membrane; 2:Osseous spiral lamina; 3:Tympanic membrane; 4:Incus; 5:Incudostapedial joint;6:The basal turn of the cochlea.The right figure was the amplified view of the opening route on the cochlea.

圖2顯微鏡下的豚鼠鼓室內(nèi)結(jié)構(gòu)

Fig 2Structures of tympanic cavity of guinea pig under microscope

經(jīng)過(guò)多次摸索之后我們選用耳科電鉆來(lái)開(kāi)孔[7]。選用直徑0.6 mm的金剛鉆,低速模式 (轉(zhuǎn)速低于7 000 /s),盡可能減少鉆頭振動(dòng)對(duì)內(nèi)耳的影響[14]。先用電鉆在需要開(kāi)孔的部位劃出一個(gè)環(huán)形的區(qū)域 (圖3),直徑比開(kāi)孔的孔徑稍大,緩慢加深這條溝,直至溝的顏色變深,提示骨壁已經(jīng)很薄。然后用刀刃長(zhǎng)度5 mm、寬度1 mm的針式刀片的尖端輕輕插入這個(gè)環(huán)形磨薄區(qū)域的任一薄弱部分,稍用力挑起便可將骨片挑開(kāi),即完成開(kāi)孔。如果刀片此時(shí)不能輕輕刺破這層已經(jīng)被打薄的骨壁,則需要繼續(xù)打磨,直至可以被刀片尖端輕易刺破。

放置反光微珠為減輕負(fù)重對(duì)基底膜的影響,測(cè)試所用的反光微珠為直徑10～30 μm的玻璃球,肉眼下呈粉末狀。用鈍頭的不銹鋼針 (長(zhǎng)度5 cm,針的末端直徑0.12 mm)蘸取適量干燥的反光珠。微珠將被吸附在針的末端,但常會(huì)吸附過(guò)多的微珠。此時(shí)可在顯微鏡下將過(guò)多的微珠手動(dòng)去除掉。然后將微珠小心放入耳蝸基底膜上。因?yàn)橐后w表面張力的作用,微珠很難被放入基底膜上,有時(shí)需要多次的嘗試。此時(shí)顯微鏡的空間分辨率尤為重要,高分辨率的顯微鏡可以幫助辨識(shí)微珠及基底膜的位置(圖4)。放置過(guò)程中會(huì)有少量淋巴液損失,活體標(biāo)本會(huì)自行充盈,而離體標(biāo)本則需要用生理鹽水進(jìn)行補(bǔ)充。

The left figure illustrated the bulla of guinea pig after opening of the cochlea boney wall.The right figure displayed theprofile of the cochlea by cutting along the line AB.ST: Scala tympani; SV:Scala vestibuli;CD: Cochlear duct;BM:Basilar membrane;VM:Vestibular membrane.

圖3豚鼠耳蝸骨壁開(kāi)孔示意圖

Fig 3Diagram of the drilling process on the cochlea boney wall of guinea pig

基底膜振動(dòng)測(cè)試如圖5所示,本文采用信號(hào)發(fā)生器發(fā)生單頻信號(hào),驅(qū)動(dòng)美國(guó)Etymotic公司的ER-2送聲器,送聲探管放置在外耳道中,外耳道口由送聲管末端自帶的海綿體封閉。ER-2送聲器的頻率范圍是10～10 000 Hz,根據(jù)Ren等[13]的改造方法,可以將其頻率范圍提高到20 kHz,從而滿足了本實(shí)驗(yàn)的要求。同時(shí)將測(cè)聲系統(tǒng)ER-7C的測(cè)聲探管放置在外耳道中距鼓膜2～3 mm處,用于監(jiān)測(cè)離鼓膜臍部2 mm處的聲壓。將激光探頭 (Polytec OFV 505)連接到單點(diǎn)激光多普勒測(cè)振儀上。在手術(shù)顯微鏡下通過(guò)微位移平臺(tái)來(lái)微調(diào)標(biāo)本的位置將激光探頭的測(cè)試光點(diǎn)調(diào)整到基底膜的反光微珠上。把激光測(cè)振儀的輸出端連接到LMS數(shù)據(jù)采集系統(tǒng),通過(guò)數(shù)據(jù)采集即可獲得基底膜的振動(dòng)響應(yīng)數(shù)據(jù)。

The right corner atlas in the circle was the amplified view under microscope.EAC:External auditory canal; LDV:Laser doppler vibrometer.

圖5測(cè)試裝置及測(cè)試過(guò)程示意圖

Fig 5The diagram of instruments and measurement process

結(jié)果

通過(guò)送聲器在外耳道處給予70 dB SPL的單頻聲激勵(lì),頻率范圍為1 000～19 000 Hz。由于測(cè)試難度較大,實(shí)驗(yàn)成功率不高,僅有7組數(shù)據(jù)符合測(cè)量要求,即信噪比達(dá)到10∶1?；铙w探索過(guò)程中均未能在活體時(shí)測(cè)得耳蝸基底膜的振動(dòng)響應(yīng),因而數(shù)據(jù)均是離體樣本所得。且數(shù)據(jù)結(jié)果基本是在改進(jìn)實(shí)驗(yàn)方法之后獲得。

基底膜振動(dòng)位移對(duì)頻率的函數(shù)見(jiàn)圖6,相位見(jiàn)圖7?？梢?jiàn)基底膜的振動(dòng)在5 kHz以下時(shí)比較平穩(wěn),之后緩慢上升,至11 kHz時(shí)達(dá)到最大值7.8 nm,之后迅速下降。相位呈兩段式下降,在1～10 kHz時(shí),緩慢下降,從11 kHz開(kāi)始迅速下降,最高頻率時(shí)達(dá)到了-1 400度左右。

討論

豚鼠的固定和解剖實(shí)驗(yàn)中保持豚鼠在一固定的體位對(duì)實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行十分重要。本文采用顳骨固定夾來(lái)固定豚鼠的頭部,收到一定的效果,但是比較耗時(shí)。文獻(xiàn)中使用的頭部固定架[8]可能是一種良好的固定方式。

如果采用文獻(xiàn)中描述的方法,即用特制的刀片將耳蝸骨壁逐漸刮薄之后再開(kāi)孔,由于手術(shù)視野狹窄,活動(dòng)空間有限,操作過(guò)程中較易損傷鼓膜及其他中耳結(jié)構(gòu)。另外,所開(kāi)的孔外形不規(guī)則 (圖2),而且操作過(guò)程中難免會(huì)有骨粉掉落至基底膜上,如不及時(shí)清理將無(wú)法測(cè)量。但是清理時(shí)往往難以避免損傷基底膜。本文的方法可以在磨削過(guò)程中避免碎骨片落入耳蝸內(nèi),從而影響其響應(yīng)機(jī)制。

為了避免過(guò)強(qiáng)的噪聲和振動(dòng)影響毛細(xì)胞功能,試驗(yàn)中采用了耳科電鉆低速模式，并且通過(guò)逐漸打磨出一個(gè)環(huán)形孤島的方式來(lái)開(kāi)孔。試驗(yàn)中可以一次性將耳蝸骨壁打開(kāi),而快速、完好打開(kāi)耳蝸骨壁避免了反復(fù)打磨耳蝸開(kāi)孔的過(guò)程中損傷耳蝸基底膜。

反光微珠的放置既往文獻(xiàn)對(duì)反光微珠的放置有較多的描述,既有用微量移液器放置[13],也有用注射器尖端蘸取微珠然后將其放置在耳蝸基底膜上[12]。本實(shí)驗(yàn)曾嘗試用微量移液器來(lái)放置微珠。但是實(shí)驗(yàn)過(guò)程中很難保證一次吸入的微珠數(shù)量一致,因而難以保證放置在基底膜上的微珠數(shù)量一致。而且微量移液器的口徑較大,對(duì)如此微小的微球放置依然是一個(gè)龐大的器具,難以保證精確。而注射器尖端的口徑相對(duì)所開(kāi)的耳蝸開(kāi)孔來(lái)說(shuō)過(guò)大,不適合微珠位置的調(diào)整。

另外,在放置反光微珠時(shí)鼓階內(nèi)淋巴液的表面張力會(huì)使得放置十分困難。因此可以考慮在耳蝸淋巴液被吸干且自發(fā)產(chǎn)生的淋巴液尚未來(lái)得及補(bǔ)充時(shí)放置微珠[15],有待進(jìn)一步的試驗(yàn)驗(yàn)證。

活體測(cè)量探索在活體測(cè)量探索的過(guò)程中未能解決耳蝸開(kāi)孔處出血的問(wèn)題,僅有1例樣本能達(dá)到活體耳蝸基底膜測(cè)量的要求,因而未能觀測(cè)到耳蝸基底膜的主動(dòng)特性。通過(guò)吸出鼓階淋巴液并維持?jǐn)?shù)分鐘的方法來(lái)防止血液流向基底膜,待出血控制后再讓耳蝸淋巴液自行補(bǔ)充[7],可能是一個(gè)較好的方法,也是進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)可嘗試的手段。

采用本法可以快速、安全地進(jìn)行耳蝸底旋骨壁開(kāi)孔,并能避免反復(fù)磨削的骨粉落入耳蝸內(nèi),已成功測(cè)量了豚鼠基底膜的被動(dòng)振動(dòng)特性,因而可以作為一種較好的耳蝸基底膜振動(dòng)測(cè)試的實(shí)驗(yàn)方法。探索了離體耳蝸的實(shí)驗(yàn)方法,但活體實(shí)驗(yàn)中未能解決耳蝸開(kāi)孔處出血的問(wèn)題,所以活體耳蝸振動(dòng)試驗(yàn)是下一步研究的方向。

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欽倫秀,男,博士,外科教授、主任醫(yī)師、博士生導(dǎo)師。現(xiàn)任復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院院長(zhǎng)助理兼外科主任、復(fù)旦大學(xué)腫瘤轉(zhuǎn)移研究所所長(zhǎng)。國(guó)家杰出青年基金獲得者、長(zhǎng)江學(xué)者特聘教授、教育部“肝癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)機(jī)制與防治策略創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)”帶頭人、國(guó)家重大科學(xué)研究計(jì)劃(973)首席科學(xué)家,享受國(guó)務(wù)院特殊津貼。為國(guó)際肝癌學(xué)會(huì)(ILCA)創(chuàng)始會(huì)員、國(guó)家自然基金委醫(yī)學(xué)部專家組成員,中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)腫瘤轉(zhuǎn)移專業(yè)委員會(huì)主任委員、上海醫(yī)學(xué)會(huì)腫瘤靶分子?？莆瘑T會(huì)主任委員。為ClinExpMetastasis和ChinMedJ等14本雜志編委。

主要從事肝膽外科臨床工作和腫瘤轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)研究工作。每年手術(shù)治療肝膽腫瘤患者約500例(包括半肝、三葉切除,肝尾狀葉腫瘤,肝門脈膽管癌等各種高難度復(fù)雜手術(shù)),進(jìn)行肝移植手術(shù)近百例。承擔(dān)國(guó)家科技重大專項(xiàng)肝癌項(xiàng)目(課題組負(fù)責(zé)人)、國(guó)家重大科學(xué)研究計(jì)劃(973)、863及國(guó)家自然科學(xué)基金國(guó)際合作重大項(xiàng)目等多項(xiàng)課題。發(fā)表SCI論文116篇, 發(fā)表的雜志包括Hepatology,Gut,CancerRes,Oncogene,ClinCancerRes,NewEnglJMed,Science,NatMed,Cancercell等。

主編專著《腫瘤的分子診斷與預(yù)測(cè)》(上海科技教育出版社,2004),為《現(xiàn)代腫瘤學(xué)》(第3版,復(fù)旦大學(xué)出版社,2011)和《肝癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的基礎(chǔ)與臨床》(上?？萍冀逃霭嫔?2003)等2本專著的副主編；參與7本專著的編寫(xiě)(包括CancerMetastasis等3本英文專著)。

獲國(guó)家自然科學(xué)二等獎(jiǎng)(2010)、上海市科技精英(2013)、上海市自然科學(xué)牡丹獎(jiǎng)(2010)、上海市自然科學(xué)一等獎(jiǎng)(2009)、教育部自然科學(xué)一等獎(jiǎng)(2007)、國(guó)家科技進(jìn)步一等獎(jiǎng)(2006)、上海市自然科學(xué)二等獎(jiǎng)(2000)和上海市衛(wèi)生系統(tǒng)銀蛇獎(jiǎng)等多項(xiàng)獎(jiǎng)勵(lì)。先后二十余次在國(guó)際學(xué)術(shù)會(huì)議、三十余次在國(guó)內(nèi)學(xué)術(shù)會(huì)議作特邀報(bào)告。擔(dān)任三屆“全國(guó)腫瘤轉(zhuǎn)移學(xué)術(shù)大會(huì)”主席及“首屆東方腫瘤分子診斷與治療學(xué)術(shù)大會(huì)”主席,并帶領(lǐng)中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)腫瘤轉(zhuǎn)移專業(yè)委員會(huì)與國(guó)際腫瘤轉(zhuǎn)移研究會(huì)(MRS)聯(lián)合舉辦兩屆“國(guó)際腫瘤轉(zhuǎn)移學(xué)術(shù)大會(huì)”。

Testing methodology for the vibration in basilar membrane of guinea pig′s cochlea

ZHOU Lei1,XU Li-fu2,TA Na2,RAO Zhu-shi2,HUANG Xin-sheng1△

(1DepartmentofENT,ZhongshanHospital,FudanUniversity,Shanghai200032,China;2InstituteofVibration,ShockandNoise-StateKeyLaboratoryofMechanicalSystemandVibration,ShanghaiJiaoTongUniversity,Shanghai200240,China.)

【Abstract】ObjectiveTo explore a method to measure the vibration in basilar membrane of guinea pig′s cochlea.MethodsGuinea pig was under pentobarbital anesthesia by intraperitoneal injection throughout the experiments.We made a ventrolateral incision and dissected the muscles.Then the bulla could be seen at the deep side of the mandible.The bulla was exposed by scraping the muscles on its surface,and was opened by electric drill.After the location of the basilar membrane was distinguished,a circle ditch was drilled gradually on corresponding bony wall.Then a fine hole of the bony wall could be done by openng this small piece isolated bony wall with a pointed scalpel.The reflected glass beads were placed on the basilar membrane using a pointed stainless needle.Then the laser doppler vibrometer (LDV) was used to record the vibration in basilar membrane under pure tone stimulation from the outer ear.ResultsWe measured the response curve of basilar membranem in guinea pig′s cochlea under sound stimulation of different frequencies.ConclusionsThis method can be used to measure the vibration in basilar membrane of guinea pig′s cochlea in vitro,while in vivotest may need further research.

【Key words】cochlea;basilar membrane;laser doppler vibrometer;guinea pig;vibration

【中圖分類號(hào)】R318.01; TB 532

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

doi:10.3969/j.issn.1672-8467.2016.01.013

(收稿日期:2015-04-10;編輯:王蔚)

國(guó)家自然科學(xué)基金 (81170910,11072145)

△Corresponding authorE-mail:huang.xinsheng@zs-hospital.sh.cn