柴曉哲 張雪華

慢性乙型肝炎患者血清中顆粒溶素的變化及臨床意義

柴曉哲 張雪華

目的 探討慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B,CHB）患者血清中顆粒溶素含量變化的臨床意義。方法 利用酶聯(lián)免疫法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）測定20例CHB患者和40例健康人血清中顆粒溶素含量的變化，并進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果 CHB組血清中顆粒溶素含量明顯高于健康對照組（P＜0.01）。相關(guān)性分析表明，CHB組血清中顆粒溶素水平與乙肝患者HBV-DNA、血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（Alanine aminotransferase,ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate aminotransferase,AST)水平均無明顯相關(guān)性。結(jié)論 顆粒溶素可能參與CHB的疾病進(jìn)程，這為研究CHB的病情監(jiān)控和有效治療提供了新的線索。

慢性乙型肝炎；顆粒溶素；ELISA

乙型肝炎是一個嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。全球60億人口中，約一半人口生活在高流行區(qū)，約20億人證明有感染，3～4億人為慢性感染，據(jù)估計全世界每年有超過100萬人死于肝炎引發(fā)的肝癌[1-2]。中國是乙肝病毒的高流行區(qū)之一，其年發(fā)病數(shù)約66萬例，仍然是一個不可小覷的公共衛(wèi)生問題。

顆粒溶素(granulysin, GRA)是近年來發(fā)現(xiàn)的一種重要的溶細(xì)胞顆粒蛋白，屬于皂素樣蛋白(SAPLIP)家族成員，與穿孔素和顆粒酶共同表達(dá)于細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞中，參與多種免疫反應(yīng)[3]。現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)，GRA與多種感染性疾病如結(jié)核桿菌感染、病毒感染、細(xì)菌感染性疾病中具有非常重要的作用[4]。有研究證實GRA基因表達(dá)水平與急性乙型肝炎患者血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase,ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate aminotransferase,AST)呈正相關(guān)[3]，提示GRA表達(dá)與急性乙型肝炎疾病進(jìn)程相關(guān)，檢測GRA有助于監(jiān)測患者體內(nèi)細(xì)胞免疫,目前GRA與慢性乙型肝炎病毒變化尚未見報道，GRA在慢性乙型肝炎病毒患者中的表達(dá)尚未闡明。有鑒于此，我們研究了慢性乙型肝炎（CHB）患者血清中GRA含量的變化，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 CHB組選擇2012年8月～2013年7月在蘇州市第五人民醫(yī)院住院的20例CHB患者，男16例，女4例，年齡27～63歲，平均年齡（41.30±11.04）歲。診斷標(biāo)準(zhǔn)參照2010年中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會、感染病學(xué)分會聯(lián)合修訂的《慢性乙型肝炎防治指南》[5]。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合慢性乙型肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)者。排除標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均排除了甲、丙、丁、戊型肝炎病毒重疊感染以及伴有心、腎、肺、內(nèi)分泌、血液、免疫、代謝及胃腸道嚴(yán)重原發(fā)病者或精神病患者；合并其他病毒性肝炎或肝硬化、肝癌患者；免疫性肝病患者；長期飲酒史且每周飲酒折合酒精量超過40克者。健康對照組為40例健康體檢者，其中男30例，女10例，年齡26～69歲，平均年齡（40.80±9.79）歲。2組性別、年齡等比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性。

1.2 觀察指標(biāo) 空腹采集靜脈血5 mL，離心得到血清，放-80℃存放備用。采用酶聯(lián)免疫法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）試劑盒（CUSABIO，產(chǎn)品編號CSB-E 00936 h）檢測CHB患者和健康人血清中GRA的含量。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 14.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料采用“s”表示，組間比較采用t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。同時用Pearson法對GRA水平和HBV-DNA、ALT、AST的相關(guān)性進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

2.1 CHB組和健康對照組血清中GRA含量的變化CHB組血清中GRA的含量為（30.68±18.80）ng/mL，顯著高于健康人對照組的（9.32±6.07）ng/mL，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.003)。此外，統(tǒng)計學(xué)結(jié)果表明，大三陽組和小三陽組HBVDNA、ALT、AST和GRA含量比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。見表1。

表1 CHB組中血清中GRA含量的變化

2.2 相關(guān)性分析 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，GRA與乙肝患者HBV-DNA、血清ALT、AST水平均無明顯相關(guān)性（HBVDNA：P=0.816；ALT：P=0.888；AST：P=0.826）。

3 討論

顆粒溶素是存在于人類細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞胞漿顆粒中的溶細(xì)胞蛋白質(zhì)分子,它是在研究效應(yīng)T淋巴細(xì)胞表達(dá)時通過負(fù)雜交方法而發(fā)現(xiàn)的[4-5]。T細(xì)胞受體激活后3～5天,靜止T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)檩o助性T細(xì)胞和細(xì)胞毒性T細(xì)胞,此時GRA開始表達(dá)。GRA定位于胞質(zhì)顆粒中,具有溶解酶活性,可以溶解細(xì)菌、病毒、真菌、寄生蟲等多種病原體，是參與機(jī)體細(xì)胞免疫的重要效應(yīng)分子。

在乙肝病毒感染后，肝臟乙肝病毒的清除主要依靠體內(nèi)免疫毒性細(xì)胞，而這個過程常常通過兩個獨(dú)立的通路：凋亡通路和穿孔素通路[6]。穿孔素通路的主要毒性顆粒成分包括穿孔素、GRA和顆粒酶。GRA主要存在于細(xì)胞毒性T細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞中，并且能夠促進(jìn)炎癥反應(yīng)[3]。顆粒溶素?fù)p傷細(xì)胞的機(jī)制可能是當(dāng)顆粒溶素和靶細(xì)胞帶負(fù)電荷的線粒體膜脂質(zhì)結(jié)合導(dǎo)致溶解活性發(fā)生，并誘導(dǎo)細(xì)胞色素C的釋放和線粒體功能的下降[4]。近年來，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，GRA在多種感染性的疾病如多發(fā)性肌炎、皮肌炎、急性乙型肝炎中起重要的作用[7]。錢垮等研究發(fā)現(xiàn)，急性期乙肝患者PBMC顆粒溶素表達(dá)水平顯著高于體檢健康者和HBV攜帶者緩解期患者[3]，但尚未見CHB患者中GRA水平的研究。我們對20例CHB患者和40例健康人血清中的GRA水平進(jìn)行了檢測，結(jié)果顯示，CHB患者中GRA的水平顯著高于健康人，提示GRA高表達(dá)不僅存在于急性乙型肝炎中，在CHB中GRA也發(fā)揮了一定的作用。異常升高的GRA可能與肝臟細(xì)胞中攜帶負(fù)電荷的線粒體膜脂質(zhì)結(jié)核，從而釋放細(xì)胞色素C，導(dǎo)致肝臟細(xì)胞線粒體功能的降低。同時，我們也發(fā)現(xiàn)，CHB患者中GRA水平與乙肝患者HBV-DNA、血清ALT、AST水平均無明顯相關(guān)性，這可能與我們的樣本量較小有關(guān)。

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10.3969/j.issn.1009-4393.2016.5.007

2012年蘇州市科教興衛(wèi)項目 （kjxw 2012031）

江蘇 215007 蘇州市第五人民醫(yī)院 （柴曉哲 張雪華）