亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        人膽囊癌裸鼠移植瘤模型的建立及超聲觀察

        2016-04-07 20:28:41陳娟張炎晶苗燕
        中國當(dāng)代醫(yī)藥 2016年5期
        關(guān)鍵詞:膽囊癌動物模型

        陳娟++++++張炎晶++++++苗燕++++++趙育芳++++++劉利平

        [摘要] 目的 建立人膽囊癌裸鼠皮下移植瘤模型,并對其進(jìn)行超聲觀察。 方法 培養(yǎng)GBC-SD細(xì)胞,將細(xì)胞濃度調(diào)至1×107/ml,取0.2 ml注射于裸鼠皮下。成瘤后作為瘤源,瘤塊剪成約2 mm3的組織塊,置入裸鼠皮下,待其成瘤。以后各代模型的瘤源均來自上一代模型,用同樣的方法接種。記錄瘤塊成瘤率、成瘤時間、生長特點。觀察瘤塊外觀,并進(jìn)行超聲、解剖及病理觀察。 結(jié)果 細(xì)胞注射法及組織塊法可成功建立膽囊癌裸鼠移植瘤模型,成瘤率為100%;各代組織塊法之間成瘤時間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);二維超聲測量瘤體最大徑與大體游標(biāo)卡尺測量差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論 將細(xì)胞注射法與組織塊法結(jié)合,是一種理想的建立人膽囊癌裸鼠移植瘤模型的實驗方法。

        [關(guān)鍵詞] 膽囊癌;裸鼠;移植瘤;動物模型

        [中圖分類號] R735.8 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721(2016)02(b)-0004-04

        Establishment of human gallbladder cancer nude-mouse transplanted tumor model and its ultrasonic observation

        CHEN Juan ZHANG Yan-jing MIAO Yan ZHAO Yu-fang LIU Li-ping▲

        Department of Ultrasound,the First Hospital of Shanxi Medical University,Taiyuan 030000,China

        [Abstract] Objective To establish the human gallbladder cancer nude-mouse transplanted tumor model and to observe by ultrasound. Methods GBC-SD cells were cultured and the cell concentration was adjusted to 1×107/ml,of which 0.2 ml was subcutaneously injected to nude mouse.The cultivated tumor was selected as the tumor source and cut into tissue blocks of 2 mm3,which were then implanted into the subcutaneous tissue of nude mouse to cultivate tumor.The tumors of later generation were all cultivated from sources of tumors of the former generation by the same method.The tumor formation rate,time of tumor formation,and features of tumor formation were recorded.The appearance of tumor block was observed and ultrasonic,anatomical and pathological observations were conducted. Results The method of cell injection and tissue block implantation could successfully establish the gallbladder cancer nude-mouse transplanted tumor model,with tumor formation rate of 100%.The tumor formation time of each generation showed no statistically significant difference (P>0.05).The maximum diameter of tumor detected by ultrasound and vernier caliper showed statistically significant differences (P<0.05). Conclusion Combination of cell injection and tissue block implantation is a favorable method to establish the gallbladder cancer nude-mouse transplanted tumor model.

        [Key words] Gallbladder cancer;Nude mouse;Transplanted tumor;Animal model

        膽囊癌是膽道系統(tǒng)惡性腫瘤中最常見的一種類型,占消化道惡性腫瘤的第5位[1]。近年來,膽囊癌的發(fā)病率有逐漸增高的趨勢,且早期原發(fā)性膽囊癌無特異性的臨床表現(xiàn),臨床發(fā)現(xiàn)的膽囊癌多為中晚期,根治性切除率低,治療效果及預(yù)后差[2-4]。因此建立合適的動物模型是研究膽囊癌體內(nèi)生長、轉(zhuǎn)移機(jī)制的重要工具,對膽囊癌的早期診斷、治療及有效評估治療效果、預(yù)后等有深遠(yuǎn)意義。本研究將GBC-SD細(xì)胞注射法和瘤組織塊法結(jié)合,成功建立了裸鼠移植瘤模型,現(xiàn)報道如下。

        1 材料與方法

        1.1 細(xì)胞培養(yǎng)

        GBC-SD人膽囊癌細(xì)胞購自中國科學(xué)院細(xì)胞庫,細(xì)胞株從一位61歲的男性低分化膽囊癌患者中建立。細(xì)胞培養(yǎng)于含10%胎牛血清(杭州四季青公司),0.4%雙抗的RPMI1640(Gibco公司)培養(yǎng)基中,置于培養(yǎng)箱中連續(xù)培養(yǎng)及傳代,培養(yǎng)箱溫度保持在37℃,培養(yǎng)環(huán)境為5.0%CO2,1~2 d換液1次,細(xì)胞處于對數(shù)生長期時用胰酶消化后收集,加入適量生理鹽水調(diào)整細(xì)胞懸液濃度至1×107/ml,置于1 ml的EP管中備用。

        1.2 實驗動物

        BALB/c裸鼠33只,購自常州卡文斯實驗動物有限公司,鼠齡3~4周,雄性,體重16~18 g,飼養(yǎng)于山西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心,實驗條件符合SPF要求,所用物品均經(jīng)高壓滅菌消毒。裸鼠置于恒溫、恒濕、無菌、凈化的屏障系統(tǒng)內(nèi)飼養(yǎng)。

        1.3 細(xì)胞注射行裸鼠皮下移植瘤模型的制備

        隨機(jī)取其中2只裸鼠,10 ml/kg 5%水合氯醛腹腔注射麻醉,碘伏消毒右前肢皮膚,用1 ml注射器吸取0.2 ml細(xì)胞懸液注射于右前肢皮下。觀察裸鼠移植部位,了解腫瘤生長情況及生長速度。

        1.4 組織塊法行裸鼠皮下移植瘤模型的制備

        細(xì)胞注射接種,皮下瘤塊達(dá)成瘤標(biāo)準(zhǔn)(瘤塊直徑約1.0 cm)后,作為瘤源,無菌條件下取出瘤塊,去除脂肪、壞死組織及纖維組織,取邊緣活力旺盛的組織用無菌生理鹽水漂洗,眼科剪剪成約2 mm3的組織塊放入盛有生理鹽水的培養(yǎng)皿中備用。另取裸鼠7只,消毒雙前肢下皮膚,用眼科剪剪開2~4 mm長的小口,將備好的小瘤塊2~3塊置入皮下,縫合皮膚,消毒切口周圍,青霉素肌內(nèi)注射3 d,種瘤3 d后拆線。觀察裸鼠移植部位,了解腫瘤生長情況及生長速度。

        待前一代裸鼠移植瘤達(dá)成瘤標(biāo)準(zhǔn)后,任選一只作為瘤源,用同樣的組織塊法進(jìn)行下一輪接種傳代,制備皮下移植瘤模型,第二代種瘤9只,18個瘤塊,第三代種瘤15只,30個瘤塊。以后各代模型的瘤源均來自上一代模型。

        1.5 瘤塊的超聲檢查

        外觀游標(biāo)卡尺所測最大徑達(dá)1 cm后,超聲觀察其特點。用GE Logic E9超聲診斷儀,ML6~15線陣寬頻探頭觀察,實驗中顯像深度基本保持一致,圖像增益、聲壓、機(jī)械指數(shù)均保持不變。

        1.6觀察項目

        1.6.1 裸鼠移植瘤生長情況及生長速度 觀察裸鼠的健康狀態(tài)、一般情況及皮下腫瘤形成情況,種瘤后每2天用數(shù)字游標(biāo)卡尺測量皮下瘤的最大徑。記錄不同成瘤方法的成瘤時間及成瘤率。

        1.6.2 瘤塊超聲 常規(guī)超聲掃查瘤塊,觀察記錄瘤塊大小、回聲及血流特征。

        1.6.3 瘤塊的病理學(xué)檢查 實驗完成后處死裸鼠,完整切取腫瘤組織,標(biāo)本常規(guī)10%甲醛固定,脫水、石蠟包埋、切片,行HE染色,光鏡下觀察。

        1.7 統(tǒng)計學(xué)分析

        采用統(tǒng)計軟件SPSS 16.0對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,多組獨立樣本的比較采用方差分析,單樣本均數(shù)的比較采用t檢驗,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 成瘤率的統(tǒng)計情況

        人膽囊癌細(xì)胞GBC-SD接種裸鼠2只,均成瘤,成瘤率100%。第一代組織塊法接種裸鼠7只,每只2個,7只裸鼠14個均成瘤,成瘤率為100%。第二代組織塊法接種裸鼠9只(18個),其中一只裸鼠因?qū)嶒炇韬雎┪顾劳?,剔除實驗,其?只(16個)裸鼠均成瘤,成瘤率為100%。第三代組織塊法接種裸鼠15只(30個),均成瘤,成瘤率為100%。

        2.2 瘤體生長特點及成瘤時間

        細(xì)胞注射組及瘤組織塊組種瘤6 d后,接種部位陸續(xù)開始出現(xiàn)瘤塊。后瘤塊緩慢增大,瘤塊最大徑達(dá)4 mm后,生長速度逐漸加速。

        細(xì)胞注射組皮下瘤塊最大徑達(dá)1 cm的時間為(16.5±0.7)d。第一代組織塊法組、第二代組織塊法組、第三代組織塊法組皮下瘤塊最大徑達(dá)1 cm的時間分別為(17.1±2.1)、(17.5±1.9)、(17.6±1.6)d。組織塊法各代之間瘤塊最大徑達(dá)1 cm的時間,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

        2.3瘤體觀察

        2.3.1 外觀觀察 瘤體質(zhì)硬,固定于肢體皮下,膨脹性生長,呈類球形,與周圍組織分界清楚,易剝離,晚期部分瘤體處皮膚可見破潰。

        2.3.2 超聲觀察 瘤體呈低回聲,內(nèi)部回聲均勻或不均勻,與周圍皮膚分界清楚,隨著瘤塊增大,中央可呈無回聲。彩色多普勒血流顯像可見部分瘤塊內(nèi)有點狀、線狀或分支狀彩色血流信號(圖1)。二維超聲所測瘤塊最大徑為(0.88±0.09)cm,小于外觀游標(biāo)卡尺所測值1 cm,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

        圖1 組織塊法瘤塊超聲觀察

        2.3.3 解剖觀察 瘤體蒼白,質(zhì)硬,切開后,中間紅色質(zhì)軟,有壞死組織,周圍是活躍的腫瘤細(xì)胞層,腫瘤的外層包裹有包膜(圖2)。

        圖2 組織塊法瘤塊解剖觀察

        2.4 病理切片觀察

        瘤塊病理切片HE染色細(xì)胞形態(tài)符合人膽囊癌的特征。瘤體組織內(nèi)細(xì)胞排列紊亂,內(nèi)有大量分化程度低,形狀不規(guī)則、大小不一,胞質(zhì)豐富的深染巨核細(xì)胞,細(xì)胞核異形性明顯,同時可見少量核分裂象及多核瘤巨細(xì)胞(圖3)。

        圖3 瘤塊病理切片(HE,×400)

        3 討論

        原發(fā)性膽囊癌是膽道系統(tǒng)最常見的惡性病變,占消化道惡性腫瘤的第5位[1],膽囊癌惡性程度高,侵襲能力強(qiáng),手術(shù)切除率低,輔助治療效果不佳,預(yù)后較差[2],因此值得深入研究。動物腫瘤模型為膽囊癌的研究提供了重要平臺。

        1969年Rygaard等[5]首次將人結(jié)腸癌組織接種于裸鼠皮下,成功建立了裸鼠皮下移植瘤模型后,裸鼠便被廣泛地應(yīng)用于人類腫瘤的基礎(chǔ)理論和臨床治療的實驗性研究中。由于裸鼠移植瘤在組織病理形態(tài)學(xué)、生物學(xué)特性及對化療藥物的敏感性等方面與其原發(fā)的腫瘤相似,因此,裸鼠移植瘤模型是目前腫瘤學(xué)研究中較為理想的動物模型[6]。

        目前常用的皮下移植瘤建模方法是細(xì)胞注射法和瘤組織塊法[7]。本研究將兩種方法結(jié)合,大大簡化了移植瘤模型的制備過程,適合長期傳代。

        本研究首先將體外培養(yǎng)的GBC-SD細(xì)胞懸液注射到裸鼠皮下,制備皮下移植瘤模型。同許多學(xué)者研究[8-10]結(jié)果一致:注射法皮下移植瘤模型成瘤率高,細(xì)胞致瘤性強(qiáng),注射較小的瘤細(xì)胞量即可致瘤,腫瘤生長平穩(wěn),生存期穩(wěn)定。但細(xì)胞注射法成瘤時間相對較長,細(xì)胞體外培養(yǎng)時復(fù)蘇、傳代、凍存過程中都極易污染,培養(yǎng)周期長,比較昂貴,不適合長期傳代[11]。

        傳統(tǒng)的組織塊法瘤源多取自手術(shù)切除的存活膽囊癌組織,但實驗成本較高,實驗條件要求較高,取材難度較大。本研究細(xì)胞注射法成瘤后作為瘤源進(jìn)行裸鼠異體移植和傳代,避免了以上的不足,簡化了移植瘤模型的制備。另外瘤塊鼠間異體移植時成瘤穩(wěn)定,成瘤率達(dá)100%。徐鴻緒[12]的研究用細(xì)胞注射法結(jié)合瘤組織塊法成功建立了前列腺癌裸鼠移植瘤模型,裸鼠移植瘤成功率可達(dá)100%。洪國斌等[13]用此法成功制備了肝癌裸鼠移植瘤模型,腫瘤造模成功率為93.75%。湯靜[14]用此法成功制備了肝癌裸鼠移植瘤模型,腫瘤造模成功率為100%。提高瘤組織塊法成瘤率的方法有:瘤源的取材盡快完成;欲接種的腫瘤組織制備成適宜大小的瘤組織塊;在裸鼠飼養(yǎng)及各種操作過程中嚴(yán)格遵循無菌原則等。

        目前對于移植瘤建模方式的研究主要集中在探討建模成瘤率及移植瘤與原腫瘤一致性的問題[15]。本研究兩種方法成瘤率皆高,幾乎可達(dá)100%,病理切片HE染色結(jié)果顯示兩種方法在組織學(xué)形態(tài)上并無差異,可以推論在相同的微環(huán)境下通過細(xì)胞懸液所建立的模型和通過組織塊建立的模型組織學(xué)形態(tài)及生物學(xué)特性同樣無差異。

        總之,將細(xì)胞注射法與組織塊法結(jié)合,移植瘤能在裸鼠體內(nèi)持續(xù)增殖和長期傳代,且移植瘤的形態(tài)與原人體腫瘤保持一致,是一種理想的建立人膽囊癌裸鼠移植瘤模型的實驗方法,可為后續(xù)膽囊癌的研究提供良好的實驗平臺。

        [參考文獻(xiàn)]

        [1] 王敬晗,姜小清.原發(fā)性膽囊癌流行病學(xué)研究進(jìn)展[J].中華普通外科學(xué)文獻(xiàn),2010,4(3):271.

        [2] Inui K,Yoshino J,Miyoshi H.Diagnosis of gallbladder tumors[J].Intern Med,2011,50(11):1133-1136.

        [3] 李廣林,張勇.消癌解毒方對膽囊癌患者細(xì)胞增殖及凋亡的影響[J].西部中醫(yī)藥,2015,28(10):101-103.

        [4] 閔鋼,白卓杰,王小進(jìn),等.多層螺旋CT在膽囊癌臨床診斷中的應(yīng)用[J].中國醫(yī)學(xué)裝備,2015,12(6):91-93.

        [5] Rygaard J,Povlsen CO.Heterotransplantation of a human malignant tumor to nude mice[J].Acta Pathol Microbiol Scand,1969,77(4):758-760.

        [6] 高進(jìn),李敏民.動物腫瘤模型及其應(yīng)用[M].北京:中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社,1992:38-47.

        [7] 司徒鎮(zhèn)強(qiáng),吳軍正.細(xì)胞培養(yǎng)[M].西安:世界圖書出版公司,2004:205-208.

        [8] 趙志倫,王占民.人膽囊癌裸鼠皮下瘤模型的建立[J].中華實驗外科雜志,2005,22(10):1272-1272.

        [9] 常新忠.人膽囊癌裸鼠原位移植瘤模型的建立及初步觀察[J].中華肝膽外科雜志,2004,10(7):468-472.

        [10] 趙澤明,范躍祖.去甲斑蝥素對荷瘤裸鼠膽囊癌移植瘤nm23、基質(zhì)金屬蛋白酶-2和基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子-2的影響[J].中華實驗外科雜志,2005,22(3):307-308.

        [11] 李寧,劉海生,孫楚東,等.腫瘤細(xì)胞懸液注射法制作兔食管癌移植瘤模型[J].中國腫瘤臨床,2008,35(12):707-710.

        [12] 徐鴻緒.荷人前列腺癌裸鼠移植瘤模型的建立及其應(yīng)用研究[J].實用癌癥雜志,2006,21(4):337-340.

        [13] 洪國斌,梁碧玲.制備裸鼠皮下移植瘤動物模型:3種建模方法及MR成像比較[J].中國醫(yī)學(xué)影像技術(shù),2010,26(2):205-208.

        [14] 湯靜.人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型MR成像與病理對照研究[D].長沙:湖南大學(xué),2011.

        [15] 唐詩聰,潘泓.組織塊移植法建立人肺癌裸鼠移植瘤模型[J].昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2014,35(11):169-171.

        (收稿日期:2015-12-02 本文編輯:衛(wèi) 軻)

        猜你喜歡
        膽囊癌動物模型
        肥胖中醫(yī)證候動物模型研究進(jìn)展
        miR-142-5p通過CCND1調(diào)控膽囊癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移
        胃癌前病變動物模型復(fù)制實驗進(jìn)展
        潰瘍性結(jié)腸炎動物模型研究進(jìn)展
        糖尿病性視網(wǎng)膜病變動物模型研究進(jìn)展
        自噬蛋白Beclin-1在膽囊癌中的表達(dá)及臨床意義
        膽囊癌的治療現(xiàn)狀
        原發(fā)性肝癌合并膽囊癌病例報道
        血管性癡呆動物模型的建立與中醫(yī)藥干預(yù)進(jìn)展
        婦科腎虛動物模型的研究進(jìn)展
        久久久精品亚洲懂色av| 中国老熟妇自拍hd发布| 亚洲精品无码高潮喷水在线 | 成人免费ā片在线观看| 国产成人久久精品77777综合| 亚洲av毛片在线播放| 久久99精品久久久久婷婷| 免费看泡妞视频app| 全部免费国产潢色一级| 风间由美中文字幕在线| 亚洲一区二区女搞男| 日本xxxx色视频在线播放| 久99久精品视频免费观看v| 极品精品视频在线观看| 麻豆国产精品va在线观看不卡| 国产成人综合亚洲精品| 福利网在线| 美女视频黄a视频全免费网站色 | 蜜桃av区一区二区三| 国内自拍色第一页第二页 | 亚洲成a人片在线观看天堂无码| 欧美激情精品久久999| 国产91在线播放九色快色| 玩弄人妻少妇精品视频| 乌克兰少妇xxxx做受6| 日韩精品有码在线视频| 一区二区三区高清在线观看视频| 国产美女在线精品免费观看| 中文字幕大屁股熟女乱| 国产在线视频一区二区三区不卡| 国产亚洲综合一区二区三区| 免费无码av片在线观看| 日本激情视频一区在线观看| 亚洲高清国产一区二区| 女人被男人躁得好爽免费视频| 国产福利小视频在线观看 | 国产婷婷色一区二区三区深爱网| 婷婷亚洲久悠悠色悠在线播放| 乱人伦中文字幕在线不卡网站| 精品麻豆一区二区三区乱码| 国产美女做爰免费视频|