聶竹蘭，廖秋萍，魏 杰，石長青，王艷萍

（塔里木大學高等教育研究室/動物科學學院，新疆 阿拉爾 843300）

魚血涂片制作與血細胞的觀察在《水產(chǎn)動物組織胚胎學》實踐教學中的應用

聶竹蘭，廖秋萍，魏 杰，石長青，王艷萍

（塔里木大學高等教育研究室/動物科學學院，新疆 阿拉爾 843300）

在《水產(chǎn)動物組織胚胎學》實踐教學中增設了綜合性實驗項目——魚血涂片的制作及血細胞的觀察。學生參與血涂片的制作，激發(fā)了學生的學習興趣，提高了學生的動手能力，在熟悉血涂片制作基本步驟和操作技術的同時，充分發(fā)揮了學生的主觀能動性。綜合性實驗項目的開展，不僅突出了普通實驗課所無法比擬的優(yōu)越性，為學生后期專業(yè)課教育、研究生教育奠定了基礎；同時也為相關的水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)，尤其是魚類疾病防治方面，提供了高素質(zhì)人才。

魚；血涂片；血細胞；實踐教學；水產(chǎn)動物組織胚胎學

魚血細胞中白細胞直接參與了免疫應答及其相關的應答過程，是魚類機體重要的免疫細胞，魚血細胞也肩負著非特異性免疫和特異性免疫的主要機能，在魚類疾病防治中發(fā)揮著重要作用［1-2］。另一方面，魚類血細胞很敏感，能感知自身生理狀態(tài)變化和外界環(huán)境因子的刺激，通過檢查其血液學指標，不僅能初步了解魚類的健康狀況還能掌握其生活水域環(huán)境的質(zhì)量［3-4］。因而有關血細胞的研究一直受到學者的重視。在水產(chǎn)養(yǎng)殖專業(yè)基礎課《水產(chǎn)動物組織胚胎學》中，魚血涂片的觀察是其基礎實驗內(nèi)容之一。實驗教學過程中，教師借助魚血涂片標本引導學生在顯微鏡下辨別紅細胞、血小板及各類白細胞的形態(tài)。但因內(nèi)容繁瑣，抽象難懂，學生學習興趣不高，也難以正確理解各類血細胞的功能。在我國有水產(chǎn)養(yǎng)殖學專業(yè)的農(nóng)林院校中開設《水產(chǎn)動物組織胚胎學》實踐教學的多見于石蠟切片的制作，而有關魚血涂片的制作與血細胞觀察的并不多見。塔里木大學水產(chǎn)教研室經(jīng)討論決定在《水產(chǎn)動物組織胚胎學》實踐教學中增設綜合性實驗項目——魚血涂片的制作及血細胞的觀察，旨在提高學生的研究技能與水平，激發(fā)學生對抽象形態(tài)學知識點的學習興趣，培養(yǎng)學生的獨立思考與創(chuàng)新思維能力，以期為社會提供全面發(fā)展的綜合型新世紀人才。

1 材料與方法

實驗材料：購自阿拉爾市9團農(nóng)貿(mào)市場5尾健康無病的草魚。

實驗分組：塔里木大學水產(chǎn)養(yǎng)殖專業(yè)17班，共25人，分為5組，每組5人，每組處理1尾草魚。

載玻片的清洗：將新的載玻片放入洗衣粉或肥皂水中煮沸20 min；玻片上的污物用熱水洗去；用自來水反復沖洗若干次，再用蒸餾水沖洗3遍［5］。最后浸泡在無水乙醇中保存；實驗前每組領取100片，用眼鏡布擦干無水乙醇備用。

血液采集：用5 mL無菌注射器經(jīng)0.1%肝素鈉潤洗后，從草魚的尾靜脈緩慢抽血［6］3～5 mL，舍棄針頭剔除第一滴血。

血涂片制作：用左手手指平握載玻片兩條短邊，用10 μL移液器取5 μL血樣滴于處理好的載玻片右側約5 cm處；另取一塊邊緣光滑的載玻片作推片，右手持推片，將推片一端置于血滴前方，向后移動到接觸血滴，毛細作用使血液均勻分散在推片與載玻片的接觸處，使載玻片與推片之間的角度約呈18°［7］，向左平穩(wěn)推動制成厚薄適宜、分布均勻的粉紅色血膜［8］。 血膜自然晾干后，用常規(guī) Wright′s和 Giemsa 染液 3～5 滴雙重染色［9-10］3～5 min 后，用等量蒸餾水借助洗耳球混勻進一步淡染3～5 min。淡染過程中，染色液干涸前用蒸餾水補充。染色完成后，用蒸餾水沖洗，再在Nikon顯微鏡下觀察，選取血細胞分布均勻，染色適中的涂片留用，要求每位學生制作符合要求的血涂片10片，不符合要求的血涂片舍棄。

2 結果與分析

2.1 血涂片制作結果與分析 張紹林指出，一張好的血涂片應滿足以下幾點要求：厚薄適中；頭體尾明顯；血細胞均勻分布；載玻片的兩邊及兩端空隙分別為0.3、1.5 cm；血膜邊緣整齊，長度約為4 cm［11］。制片及染色結束后，指導教師在多媒體互動教室根據(jù)每個學生實際制片情況，先讓學生在低倍鏡下觀察了解細胞分布情況及染色效果。再選取血細胞厚薄適宜，分布均勻的區(qū)域在高倍鏡下觀察各類血細胞具體的形態(tài)特征［12］。在5組學生制作的部分涂片中，平均每組有3張涂片非常好，絕大部分的涂片的問題為血膜頭體尾不明顯、血膜不連續(xù)、邊緣不齊、涂片中有很多染色沉淀物、血細胞破裂。出現(xiàn)以上問題的原因主要在于制作涂片過程中學生手持推片時手發(fā)抖；推片時，用力不均；推片邊緣不整齊推片過程中產(chǎn)生刮痕；染色沉淀物沖洗不徹底。雖然絕大部分涂片或多或少存在不足，但在顯微鏡視野中亦可找到厚薄適宜，分布均勻的區(qū)域，可以用于觀察各類血細胞的形態(tài)結構。在本次實踐教學中，因采用移液器固定了血樣的大小和降低了推片的角度，整體效果較好。

2.2 血細胞形態(tài)觀察與分析 經(jīng)染色后，顯微鏡下可見魚血紅細胞胞質(zhì)為淺紫紅色，胞核為藍紫色；血栓細胞比紅細胞的細胞核稍大，呈藍紫色。淋巴細胞、單核細胞及中性粒細胞核質(zhì)顏色分明，核為藍紫色，質(zhì)為淡紫紅色；中性粒細胞胞質(zhì)中有淡紅色細小顆粒分布；但在整個血涂片中，未發(fā)現(xiàn)嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞。據(jù)文獻報道，只有少數(shù)魚類外周血涂片中可觀察到嗜堿性粒細胞與嗜酸性粒細胞［13］，而大部分魚類外周血涂片中，較難觀察到嗜酸性粒細胞，而嗜堿性粒細胞常觀察不到［14］，這是由于嗜堿性粒細胞中的顆粒易溶于水所致［15］。

2.3 魚血涂片實踐教學效果與分析 先在多媒體互動教室讓學生觀看實踐教學“魚血涂片的制作及血細胞的觀察”的PPT，結合教師的講解；制片前，由教師示范制片操作過程，并強調(diào)實驗過程中的注意事項，再由學生自己實踐。在整個制片過程中，學生熱情高漲，尤其是制片完成后，學生們都希望得到老師的肯定，都很關注自己的實驗結果。在顯微觀察后，有些學生不滿意自己制作的血涂片而要求重新制片。第二次制片過程中，學生充分結合理論知識，開動腦筋思考問題，很容易將各類血細胞的形態(tài)和功能深深刻在了腦海中［16］。

3 結論

在《水產(chǎn)動物組織胚胎學》課程實踐教學增設實踐項目“魚血涂片的制作與血細胞觀察”，激發(fā)了學生的學習熱情；學生在動手操作過程中相互協(xié)作的同時，學會了獨立思考問題；并能結合理論內(nèi)容充分掌握了各相關的知識點；使實踐教學的優(yōu)越性遠遠超出普通的實驗教學，達到了實踐教學的目的。另一方面，該實踐項目的開展，為學生后期專業(yè)課教育、研究生教育奠定了堅實基礎；為水產(chǎn)養(yǎng)殖相關行業(yè)，尤其是魚類疾病防治方面，提供了高素質(zhì)人才，值得廣為推廣。

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Application of Fish Blood Smears Preparation and Blood Cells Observation in Practical Teaching of Histology and Embryology of Aquatic Animal

NIE Zhu-lan，LIAO Qiu-ping，WEI Jie，SHI Chang-qing，WANG Yan-ping
（Research Department of Higher Education/College of Animal Science，Tarim University，Alaer 843300，China）

In the practical teaching of Histology and Embryology of Aquatic Animal,a comprehensive experimental project"Fish Blood Smears Preparation and Blood Cells Observation"is newly set.In this project,the undergraduates participate in the process of blood smears preparation,which stimulates the undergraduates′interests in learning and improves their practical ability;the undergraduates understand the basic procedure of blood smear preparation,master the experimental technique,and exert their subjective initiative.The application of the comprehensive experimental project not only exhibits incomparable superiority to that of the common experiment but also lays a solid foundation for later professional class education and postgraduate education.Meanwhile,it also provides plenty of talents with high quality for the relevant aquaculture industry,especially in the field of fish diseases prevention and control.

fish；blood smear；blood cells；practical teaching；Histology and Embryology of Aquatic Animals

G642.0

A文章順序編號1672-5190（2016）03-0069-02

2016－03－07

項目來源：塔里木大學高等教育研究項目（TDGJ1506，TDGJ1106，TDGJ0906）。

聶竹蘭（1979—），女，副教授，博士，主要從事水產(chǎn)動物組織胚胎學、家畜組織學與胚胎學的教學與研究工作。

石長青（1971—），男，副教授，碩士，主要從事家畜組織學與胚胎學的教學與研究工作。

（責任編輯：賈淑萍）