五味子對衰老大鼠心肌抗氧化能力及形態(tài)學改變的影響

李屹馬越嬌張曄劉永林徐國峰楊鑫周酈楠

(遼寧省基礎(chǔ)醫(yī)學研究所，遼寧沈陽110101)

摘要〔〕目的探討五味子對D-半乳糖致衰老大鼠血清及心肌抗過氧化能力及心肌形態(tài)學改變的影響。方法應用D-半乳糖復制衰老大鼠模型，同時給予五味子灌胃，8 w后，取血、心臟。檢測血清和心肌組織總抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)的含量及光鏡下心肌形態(tài)學的改變。結(jié)果五味子治療組血清和心肌組織的T-AOC、GSH-Px、SOD、NO含量明顯高于衰老模型組，MDA含量低于衰老模型組。結(jié)論五味子對自由基引起的心肌損傷有保護作用，清除自由基的能力隨用藥時間的延長而增強，所以其保護作用與五味子服用時間呈正相關(guān)。

關(guān)鍵詞〔〕五味子；衰老；D-半乳糖；總過氧化能力；丙二醛；超氧化物歧化酶；谷胱甘肽過氧化酶

中圖分類號〔〕R322.1+1〔文獻標識碼〕A〔

通訊作者：周酈楠(1966-)，女，碩士，教授，碩士生導師，主要從事神經(jīng)解剖學研究。

第一作者：李屹(1973-)，男，碩士，講師，主要從事基礎(chǔ)醫(yī)學研究。

《新修本草》載“五味皮肉甘酸，核中辛苦，都有咸味”，故有五味子之名。古醫(yī)書稱它荎蕏、玄及、會及，最早列于神農(nóng)本草經(jīng)上品中藥，能滋補強壯之力，藥用價值極高，有強身健體之效。藥理研究表明，北五味子含有多種營養(yǎng)成分，如五味子素、蘋果酸、檸檬酸、糖類、樹脂、維生素C等〔1〕。味甘、酸，性溫，能益氣生津，補腎養(yǎng)心，收斂固澀，用于氣虛津傷，體倦多汗，短氣心悸；肺氣不足或肺腎兩虛所致的喘咳，或喘咳日久，肺氣耗傷；心陰不足，心悸怔忡，失眠健忘；腎氣不固，遺精，尿頻，或脾腎兩虛，久瀉不止〔2，3〕。

1材料與方法

1.1動物8周齡(180～200 g體重)SD大鼠。由沈陽醫(yī)學院實驗動物中心提供。實驗動物許可證為遼寧省科學技術(shù)廳簽發(fā)，許可證號：SCXK(遼)2003-0016。動物飼料為繁殖鼠全價顆粒飼料，由沈陽市于洪區(qū)前民飼料廠生產(chǎn)。

1.2藥品及試劑D-半乳糖(D-gal)為Sigma公司的產(chǎn)品，購于上海博蘊生物科技有限公司?？偪寡趸芰?T-AOC)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)等測定試劑盒購于南京建成生物工程研究所。北五味子由吉林農(nóng)業(yè)大學提供，按水提液常規(guī)方法煎制，濃縮至含生藥量0.4 g/ml，供灌胃給藥用。

1.3方法SD大鼠適應性飼養(yǎng)1 w，然后將大鼠稱重，編號，隨機分成5組，每組12只，雌雄各半，腹腔注射D-半乳糖(生理鹽水)200 g·kg-1·d-1，連續(xù)給藥8 w。①衰老模型組：腹腔注射D-半乳糖，生理鹽水10 ml·kg-1·d-1灌胃。②五味子1組：腹腔注射D-半乳糖，自造模第1天開始灌胃給藥，五味子10 ml·kg-1·d-1灌胃。③五味子2組：腹腔注射D-半乳糖，自造模第3周開始灌胃給藥，五味子10 ml·kg-1·d-1灌胃。④五味子3組：腹腔注射D-半乳糖，自造模第5周開始灌胃給藥五味子10 ml·kg-1·d-1灌胃。⑤空白對照組：腹腔注射生理鹽水，生理鹽水灌胃。所有大鼠均飼以常規(guī)動物飼料和水。各組連續(xù)給藥到8 w。末次給藥4 h后處死動物，取血、心臟，分離血清。生理鹽水10%心肌組織勻漿，3 000 r/min離心15 min,取上清液。血清及心肌組織勻漿上清液置于-80℃冰箱保存，備檢測相關(guān)指標。各組另取大鼠經(jīng)1%肝素鈉生理鹽水、含4%多聚甲醛的0.1 mol/L磷酸鹽緩液(PBS,pH7.4)固定液內(nèi)固定灌注，取出心臟組織并置于固定液中后固定4 h，HE染色，光鏡下觀察。

1.4統(tǒng)計學方法采用SPSS13.0軟件進行t檢驗。

2結(jié)果

2.1五味子對衰老大鼠血清T-AOC、GSH-Px的影響給藥8 w后衰老大鼠血清T-AOC、GSH-Px含量顯著下降，與空白對照組相比較差異顯著(P<0.01)。五味子1組與衰老模型組相比較血清T-AOC、GSH-Px含量升高顯著(P<0.01)，五味子2組與衰老模型組相比較血清T-AOC、GSH-Px含量明顯升高(P<0.05)，而五味子3組與衰老模型組相比較血清中T-AOC、GSH-Px含量有所升高，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表1。

2.2五味子對衰老大鼠心肌組織MDA、SOD、NO的影響給藥8 w后衰老大鼠心肌組織SOD、NO含量顯著下降，MDA含量顯著上升，與空白對照組相比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。五味子1組、2組、3組與衰老模型組相比較心肌中SOD、NO含量明顯升高(P<0.01，P<0.05)，MDA含量明顯下降(P<0.01，P<0.05)。說明五味子對自由基引起的心肌損傷有保護作用。見表2。

表1　五味子對D-半乳糖致衰老大鼠血清

與衰老模型組比較：1)P<0.01,2)P<0.05,下表同

2.3心肌組織形態(tài)學變化空白對照組心肌細胞排列整齊,心肌細胞呈短圓柱狀,細胞質(zhì)豐富, 細胞核較大,核仁明顯, 染色質(zhì)稍疏松,無炎性細胞浸潤,連接處染色較深,即閏盤,多數(shù)只有一個細胞核,少數(shù)有雙核,呈卵圓形,位于細胞中央,有橫紋。衰老模型組心肌細胞排列紊亂，心肌纖維小，心肌細胞核不規(guī)則，少，萎縮，異常形狀增多，呈橢圓形、細長形，血管擴張充血。心肌之間閏盤減少，不清楚。五味子組較衰老模型組有所恢復，心肌細胞核增多，橢圓形，空泡減少，但閏盤不清楚。見圖1。

表2　給藥后第8周五味子對D-半乳糖致衰老大鼠心肌

空白對照組

衰老模型組

五味子1組

五味子2組

五味子3組

3討論

本實驗結(jié)果表明D-半乳糖亞急性中毒狀態(tài)下, 體內(nèi)產(chǎn)生大量超氧陰離子自由基, 是引起動脈粥樣硬化、冠狀心臟疾病和免疫力不足的主因，也是造成老化過程加速的罪魁禍首?？梢灾苯訐p傷細胞引起衰老,還可以通過引起微循環(huán)障礙和缺血改變從而進一步加重衰老進程。這種生化和組織結(jié)構(gòu)的改變與自然衰老表現(xiàn)基本吻合。五味子中含有多種化學成分，其中木酚素及多糖是強效抗氧化劑〔4～7〕，能抑制自由基，能增強腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)或粒線體(細胞能量庫)的能量生產(chǎn)，同時保護線粒體免受氧化壓力所侵害。具有降低心肌損害程度,明顯延緩衰老中心肌細胞的功能減退速度。這些作用足以說明五味子能減緩老化過程和延緩出現(xiàn)與老化相關(guān)的疾病，如心臟衰竭、阿爾茨海默病及帕金森病〔8～10〕。本實驗中,五味子不同的給藥時間均可顯著提升衰老大鼠血清和心肌中T-AOC、GSH-Px、SOD、NO和降低MDA的含量，說明五味子對自由基引起的心肌損傷有保護作用，清除自由基的能力隨用藥的時間延長而增強，所以其保護作用與五味子服用時間呈正相關(guān)。

4參考文獻

1高雁，李廷利.五味子有效成分的藥理作用研究進展〔J〕.中醫(yī)藥學報，2011；39(6)：104-6.

2倪立東，陳延西.五味子藥理作用研究概況〔J〕.暨南大學學報：醫(yī)學版，1996；17(2)：125-8.

3李巧茹.五味子藥理作用的研究進展〔J〕.西北藥學雜志，1995;10(1)：46-8.

4Liu H,Lai H,Jia X,etal.Comprehensive chemical analysis of Schisandra chinensis by HPLC-DAD-MS combined with chemometrics 〔J〕.Phytomedicine,2013;20(12)：1135-43.

5孟憲軍，秦琴，高曉旭.五味子多糖的分離純化及清除自由基研究 〔J〕.食品科學，2008;29(1)：91-4.

6謝宇，陳建光，孫新.4種五味子木脂素抗氧化作用實驗研究〔C〕.第十屆全國心血管藥理學術(shù)會議暨2010(重慶)國際心血管疾病與藥物高峰論壇，2010:151-3.

7劉威，張茜，張成義.五味子對心血管系統(tǒng)作用的研究〔J〕.北華大學學報：自然科學版，2011;12(1)：47-9.

8聞雷，孫志學，肖威.五味子的藥理作用研究〔J〕.齊齊哈爾醫(yī)學院學報，2010;31(13)：2126-7.

9Hua DH, Zhang DZ, Huang B,etal.Structural characterization and DPPH radical scavenging activity of a polysaccharide from Guara fruits 〔J〕.Carbohydrate Polymers,2014;103(1)：143-7.

10Sanna D, Delogu G, Mulas M,etal. Determination of free radical scavenging activity of plant extracts through DPPH assay：An EPR and UV-Vis Study〔J〕.Food Anal Methods, 2012;5(4)：759-66.

〔2014-03-12修回〕

(編輯趙慧玲/曹夢園)