沈云峰，胡遠(yuǎn)貴，張洪波

細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白毒力型幽門螺桿菌感染與冠心病患者血清炎性因子及同型半胱氨酸水平的相關(guān)性研究*

沈云峰，胡遠(yuǎn)貴，張洪波

目的： 探討幽門螺桿菌（HP）及細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白毒力型HP（HP-CagA）感染對冠心病患者血清炎性因子及同型半胱氨酸（Hcy）水平影響以及HP-CagA感染與冠心病的相關(guān)性。

方法：應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附分析法測定105例冠心病患者（冠心病組）和76例同期住院非冠心病患者（對照組）的血清HP特異性IgG抗體及其CagA特異性IgG抗體；采用乳膠增強散射免疫比濁法測定血清高敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）；采用化學(xué)發(fā)光法測定血清中腫瘤壞死因子-α（TNF-α） 、白細(xì)胞介素-6 （IL-6）和Hcy水平，并比較HP感染的冠心病患者與非HP感染患者之間的差異，以及HP-CagA-IgG陽性患者與HP-CagA-IgG陰性患者之間的差異。應(yīng)用多元Logistic回歸分析危險因素對冠心病的影響，用調(diào)整后的比值比（OR）和95%可信區(qū)間（CI）評估HP抗體陽性對患冠心病的危險性。

結(jié)果：冠心病組與對照組HP-IgG抗體的陽性率分別為52.3%和35.5%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；冠心病組血清hs-CRP、TNF-α、IL-6和Hcy水平高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；冠心病組HP-IgG陽性患者中，HP-CagA-IgG陽性患者h(yuǎn)s-CRP、TNF-α、IL-6和Hcy血清濃度水平高于HP-CagA-IgG陰性患者 （P均＜0.05）。應(yīng)用Logistic多元回歸分析，在排除其他傳統(tǒng)因素后，HP-IgG陽性和HP-CagA-IgG陽性對患冠心病存在相對危險性（OR=2.278，3.297； 95%CI：1.20～4.32，1.50～7.27；P=0.012，0.003）。

結(jié)論：冠心病的發(fā)生可能與HP感染有關(guān)系， HP-CagA感染可能通過刺激機體產(chǎn)生更多的炎性因子和Hcy，加快冠心病的發(fā)生、發(fā)展，是冠心病的危險因素之一。

幽門螺桿菌；細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白A；冠心??；高敏C反應(yīng)蛋白；腫瘤壞死因子-α；白細(xì)胞介素-6；同型半胱氨酸

Methods: Our research included 2 groups: CAD group, n=105 and Control group, n=76 patients without CAD. The serum Hp-IgG antibody and HpCagA-IgG antibody were measured by ELISA. Blood levels of Hs-CRP, TNF-α, IL-6 and Hcy were examined and compared between 2 groups. The differences between CAD patients with HP infection and without HP infection were compared, and the differences between CAD patients with positive HPCagA-IgG and negative HPCagA-IgG were compared Logistic regression analysis was conducted to study the risk factors of CAD, the adjusted OR and 95% CI were used to evaluate the positive Hp for CAD risk.

Results: The positive rate of HP-IgG in CAD group and Control group were 52.3% and 35.5%; compared with

Control group, CAD group had the increased levels of Hs-CRP, TNF-α, IL-6 and Hcy; in CAD group, the patients with positive HP-IgG showed the higher levels of Hs-CRP, TNF-α, IL-6 and Hcy than those with negative HP-IgG, and the patients with positive HpCagA-IgG presented the higher levels of Hs-CRP, TNF-α, IL-6 and Hcy than those with negative HPCagA-IgG, all P＜0.05. Logistic regression analysis indicated that with adjusted traditional risk factors, the positive HP-IgG and positive HpCagA-IgG were the risk factors for CAD (OR=2.278, 95% CI 1.20-4.32, P=0.012 and OR=3.297, 95% CI 1.50-7.27, P=0.003).

Conclusion: HP infection might be related to CAD, and the patients with HP infection and positive HPCagA-IgG could have CAD occurrence and development.

(Chinese Circulation Journal, 2015,30:119.)

近年來，幽門螺桿菌（HP）與冠心病的發(fā)病及其進(jìn)展中的關(guān)系越來越受到國內(nèi)外學(xué)者關(guān)注，但具體機制尚不清楚，可能與炎癥、免疫反應(yīng)、高同型半胱氨酸血癥等因素有關(guān)[1-5]。HP有尿素酶基因（UreA）、細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白（CagA）、空泡細(xì)胞毒素基因（VacA）等多種毒力基因型，其中HP-CagA是HP引起冠心病的主要毒力因子之一，在動脈粥樣硬化的發(fā)病中起到重要作用[6,7]。本文旨在探討冠心病患者HP及HP-CagA的感染狀況以及了解HP-CagA感染者血清炎性因子和同型半胱氨酸水平，間接證實HP-CagA感染與冠心病發(fā)生的相關(guān)性。

1 資料與方法

研究對象：選擇2012-07至2013-07在我院心血管科住院治療患者共105例，采用選擇性冠狀動脈造影，左主干、左前降支、左回旋支及右冠狀動脈至少一支狹窄程度≥50%者診斷為冠心病，其中男性65例，女性40例，平均年齡為（67.9±11.8）歲。對照組76例為同期住院非冠心病患者，其中男性46例，女性30例，平均年齡（64.6±12.5）歲。所有研究對象均排除消化系統(tǒng)疾病、近期各種急性感染、貧血和抗HP治療等。兩組具有可比性。

方法：①標(biāo)本收集：所有研究對象清晨空腹，常規(guī)無菌采集靜脈血，分離血清，-20℃貯存待測。②標(biāo)本檢測：應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法測定患者血清中抗 HP-IgG型抗體和抗HP-CagAIgG型抗體，試劑分別為北京貝爾有限公司和上海酶聯(lián)生物科技有限公司出品。血清高敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）采用乳膠增強散射免疫比濁法，采用美國Dade Behring公司產(chǎn)特定蛋白分析儀（BN．Prospect）及原裝配套試劑。采用化學(xué)發(fā)光法測定血清中腫瘤壞死因子-α（TNF-α） 、白細(xì)胞介素-6 （IL-6）和同型半胱氨酸（Hcy）。儀器采用西門子公司生產(chǎn)的IMMULITE 1000全自動化學(xué)發(fā)光儀和ADVIA Centaur XP全自動化學(xué)發(fā)光儀，檢測試劑由西門子公司配套提供。全部操作按儀器規(guī)程和試劑說明書提供的操作步驟進(jìn)行，全部項目均在質(zhì)控范圍內(nèi)。

統(tǒng)計學(xué)分析：采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)，主要統(tǒng)計指標(biāo)均進(jìn)行正態(tài)性檢驗，符合近似正態(tài)分布，計量資料均以x±s表示，各組間均數(shù)比較采用單因素方差分析；應(yīng)用卡方檢驗統(tǒng)計組間的感染率有無統(tǒng)計學(xué)差異。應(yīng)用多元Logistic回歸分析危險因素對冠心病的影響，調(diào)整后的比值比（OR）和95%可信區(qū)間（CI）用于評估HP抗體陽性對患冠心病的危險性。校準(zhǔn)水準(zhǔn)α=0.05，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

表1 兩組一般臨床資料的比較

2 結(jié)果

冠心病組與對照組一般臨床資料比較：兩組在年齡、性別、吸煙史、是否合并高血壓和糖尿病及高脂血癥等基本資料的比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P均＞0.05）。 表1

兩組HP感染陽性率、hs-CRP、IL-6、TNF-α、Hcy含量的比較：冠心病組和對照組中的HP感染陽性率分別為52.3%和35.5%，冠心病組明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。冠心病組血清中的hs-CRP、IL-6、TNF-α、Hcy含量也明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01） 。表2

表2 兩組HP感染陽性率及hs-CRP、IL-6、TNF-α、Hcy含量比較

表2 兩組HP感染陽性率及hs-CRP、IL-6、TNF-α、Hcy含量比較

注：HP：幽門螺桿菌 hs-CRP：高敏C反應(yīng)蛋白 IL-6：白細(xì)胞介素-6 TNF-α：腫瘤壞死因子-α Hcy：同型半胱氨酸

?

HP-CagA感染對冠心病的影響：將冠心病組患者根據(jù)HP-IgG和HP-CagA-IgG檢測結(jié)果進(jìn)行比較：HP-IgG+/HP-CagA-IgG+者31例、HP-IgG+/ HP-CagA-IgG-者24例、HP-IgG-/HP-CagA-IgG-者50例，在HP-IgG陽性患者中，HP-CagA-IgG陽性患者血清Hs-CRP、TNF-α、IL-6、Hcy的含量較HP-CagA-IgG陰性患者升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）， 在HP-CagA-IgG陰性患者中，HPIgG陽性患者血清hs-CRP、TNF-α、IL-6、Hcy的含量較HP-IgG陰性患者升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。表3

表3 冠心病組患者h(yuǎn)s-CRP、IL-6、TNF-α、Hcy含量比較（

表3 冠心病組患者h(yuǎn)s-CRP、IL-6、TNF-α、Hcy含量比較（

注：與HP-IgG+/HP-CagA-IgG-者比較*P＜0.01；與HP-IgG-/HP-CagA-IgG-者比較△P＜0.01。CagA：細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白。 余注見表2

?

HP-IgG陽性和HP-CagA-IgG陽性對患冠心病的危險性分析：以患有冠心病為因變量，以年齡、性別、合并高血壓、合并糖尿病、吸煙史、體重指數(shù)、甘油三酯、總膽固醇、HP-IgG陽性和HP-CagA-IgG陽性為自變量，應(yīng)用Logistic多元回歸分析危險因素，在排除傳統(tǒng)因素后，HP-IgG陽性和HP-CagA-IgG陽性對患冠心病相對危險性的比值比分別為2.278和3.297，表明HP-IgG陽性和HP-CagA-IgG陽性是罹患冠心病的危險因素之一，而且HP-CagA-IgG陽性（OR=3.297，95%CI：1.50～7.27）比HP-IgG陽性（OR=2.278，95%CI：1.20～4.32）相對危險度更大（P＜0.05）。表4

表4 Logistic回歸分析結(jié)果

3 討論

1994年，Mendall等[8]首次報道HP可能與冠心病發(fā)生有關(guān)，國內(nèi)外學(xué)者開始對冠心病與HP之間的關(guān)系和相關(guān)發(fā)病機理進(jìn)行了大量研究。目前，許多實驗表明HP的感染與冠心病的發(fā)生有密切關(guān)系，絕大多數(shù)學(xué)者認(rèn)同了兩者之間的關(guān)系。HP具有較強的感染性，通過人與人直接或間接接觸傳播，HP感染可直接作用于動脈壁，引起局部炎癥，誘發(fā)炎癥因子大量產(chǎn)生，促使內(nèi)皮細(xì)胞損傷或功能障礙，平滑肌細(xì)胞增殖，促進(jìn)凝血，促使同型半胱氨酸積聚，最終導(dǎo)致動脈粥樣硬化的形成和發(fā)展，導(dǎo)致冠心病[9，10]。從本文研究結(jié)果可以顯示：冠心病組HP感染陽性率和對照組中的感染陽性率分別為52.3%和35.5%，冠心病組HP感染陽性率明顯高于對照組，可以間接證實冠心病與HP感染相關(guān)。

同時研究發(fā)現(xiàn)HP的致病作用與不同的毒力因子有關(guān)。Pasceri等[11]報道細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白A是HP的主要毒力因子。Franceschi等[12]發(fā)現(xiàn)，多克隆CagA抗體與人正常臍靜脈組織和動脈硬化組織中的平滑肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞表面抗原發(fā)生交叉反應(yīng)，在動脈硬化形成過程中，內(nèi)皮細(xì)胞功能受損，平滑肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞大量增殖，導(dǎo)致了動脈粥樣硬化發(fā)展。CagA陽性菌株的脂多糖是一種特殊的內(nèi)毒素，其增強的毒力和細(xì)胞毒性產(chǎn)物可能與冠心病相關(guān)。HP感染后可能通過致病因子CagA基因啟動炎癥過程誘發(fā)動脈粥樣硬化的發(fā)生與發(fā)展[13，14]。本文研究應(yīng)用Logistic多元回歸分析冠心病危險因素的影響情況顯示，在排除年齡、性別、高血壓、糖尿病、吸煙史、體重指數(shù)、甘油三酯、總膽固醇等傳統(tǒng)因素后，HP-IgG陽性和HP-CagAIgG陽性對患冠心病相對危險性的比值比為2.278和3.297，說明HP-IgG和HP-CagA-IgG陽性均為冠心病的獨立危險因子，并且HP-IgG、HP-CagA-IgG均陽性的危險性明顯高于僅HP-IgG陽性者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），說明HP-CagA感染與冠心病的發(fā)生關(guān)系密切。

CagA型HP感染后，誘導(dǎo)抗原引起自身免疫反應(yīng)以及全身性或動脈局部炎癥反應(yīng)，可能通過產(chǎn)生高敏C反應(yīng)蛋白，促使補體的激活，從而誘導(dǎo)組織因子和細(xì)胞粘附因子的表達(dá)，介導(dǎo)內(nèi)皮巨噬細(xì)胞吞噬低密度脂蛋白，使單核細(xì)胞粘附到血管壁并促進(jìn)

TNF-α、IL-6和內(nèi)皮素等炎性因子的分泌，參與動脈粥樣硬化的形成和發(fā)展。hs-CRP是一種非特異性急性時相反應(yīng)蛋白，機體受到炎癥狀態(tài)刺激時由肝細(xì)胞大量合成，其本身具有補體作用，是動脈粥樣硬化的啟動因子之一，可促進(jìn)補體激活導(dǎo)致免疫損傷。TNF-α是由激活的單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及Thl細(xì)胞產(chǎn)生的一種非糖基化轉(zhuǎn)膜蛋白，具有多種生物學(xué)效應(yīng)，參與內(nèi)皮細(xì)胞損傷，促進(jìn)炎性細(xì)胞的聚集和炎性遞質(zhì)釋放，可導(dǎo)致炎癥、細(xì)胞壞死，引起血管壁的損傷，因而它具有促進(jìn)動脈硬化形成的作用。TNF-α可作為預(yù)測冠心病患者病情嚴(yán)重程度及動脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定性指標(biāo)。IL-6主要來源于活化的單核細(xì)胞、纖維母細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞，是肝臟釋放急性期蛋白的最強刺激因子，TNF-α和IL-6作為重要的初級炎癥因子，是在損傷反應(yīng)時由巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等釋放的多肽類物質(zhì)。在炎癥期間IL-6與TNF-α可以相互作用，TNF-α可促使IL-6的產(chǎn)生和釋放，但I(xiàn)L-6又可以對它發(fā)揮調(diào)節(jié)作用[15-18]。本研究結(jié)果顯示：冠心病組hs-CRP、TNF-α和IL-6水平高于對照組，在HP陽性感染的冠心病患者中，HP-CagA-IgG陽性患者血清hs-CRP、IL-6和TNF-α水平顯著高于HP-CagA-IgG陰性患者，hs-CRP、IL-6和TNF-α濃度分別達(dá)到了（10.1±1.3） mg/L， （19.5±3.0） ng/L，（28.8±3.2）ng/L，可能是CagA型HP感染后通過刺激機體產(chǎn)生更多的hs-CRP、TNF-α和IL-6等炎性因子，從而引發(fā)了冠狀動脈粥樣硬化，間接證實了CagA型HP菌株感染可影響冠心病的發(fā)生與發(fā)展。

同型半胱氨酸是一種含巰基的氨基酸，為蛋氨酸循環(huán)過程中的正常代謝產(chǎn)物。當(dāng)體內(nèi)同型半胱氨酸代謝紊亂，濃度升高，就會形成同型半胱氨酸巰基內(nèi)酯，可與低密度脂蛋白形成復(fù)合體，隨后被巨噬細(xì)胞吞噬，形成堆積動脈粥樣硬化斑塊上的泡沫細(xì)胞，從而加速動脈粥樣硬化的過程，Hcy作用于內(nèi)皮細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)氧自由基的產(chǎn)生和一氧化氮的降解，最終導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙，誘發(fā)并加重心血管事件發(fā)生[19]。本實驗結(jié)果提示：HP感染與Hcy水平有著密切的關(guān)系，冠心病組Hcy水平高于對照組，在HP陽性感染的冠心病患者中，HP-CagA-IgG抗體陽性患者血清Hcy水平顯著高于HP-CagA-IgG抗體陰性患者，Hcy濃度達(dá)到了（22.6±2.0）μmol/L。HP感染可能通過影響Hcy水平而在冠心病的發(fā)生、發(fā)展中起著一定的作用。

綜上所述，冠心病的發(fā)生可能與HP感染有關(guān)，CagA陽性的 HP感染可能誘發(fā)更多的炎癥因子釋放和Hcy水平升高，增加罹患冠心病的風(fēng)險，成為冠心病的危險因素之一。

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Relationship Between Helicobacter Pylori Infection and Inflammatory Cytokines, Homocysteine in Patients With Coronary Artery Disease

SHEN Yun-feng, HU Yuan-gui, ZHANG Hong-bo.
Department of Clinic Laboratory, Wuhan No.6 Hospital, Wuhan (430015), Hubei, China

Objective: To study the relationship between helicobacter pylori (HP) infection and inflammatory cytokines, homocysteine (Hcy) in patients with coronary artery disease (CAD), and the relationship between cytotoxin associated protein A toxins of HP (HPCagA) and CAD occurrence.

Helicobacter pylori; Cytotoxin associated protein A; Coronary Artery disease; Hs-CRP; TNF-α; IL-6; Hcy

2014-05-24）

（編輯：汪碧蓉）

武漢市衛(wèi)生局臨床醫(yī)學(xué)科研項目（編號：WX11B14）

430015 湖北省，武漢市第六醫(yī)院 檢驗科

沈云峰 副主任技師 碩士 主要從事臨床免疫學(xué)工作 Email： 2940778780@qq.com 通訊作者：胡遠(yuǎn)貴 Email：wuhanliuyiyuan@hotmail.com

R54

A

1000-3614( 2015 )02-0119-04

10.3969/ j. issn. 1000-3614. 2015.02.006