馮魁+艾佳俊

孔雀石綠、結(jié)晶紫是有毒的三苯甲烷類化學(xué)物，農(nóng)業(yè)部將它們列為水產(chǎn)上的禁藥。然而由于其對(duì)魚體水霉病和魚卵的水霉病有特效，許多水產(chǎn)業(yè)養(yǎng)殖戶仍在違規(guī)使用。因此，農(nóng)業(yè)部將孔雀石綠、結(jié)晶紫列為水產(chǎn)品檢測(cè)的重點(diǎn)項(xiàng)目。

本文依據(jù)農(nóng)業(yè)部公告SNT 1768-2006《水產(chǎn)品中孔雀石綠和結(jié)晶紫及其代謝產(chǎn)物的快速測(cè)定方法》，采用智能化食品安全一體機(jī)進(jìn)行前處理，經(jīng)過(guò)固相萃取技術(shù)濃縮凈化，再用高效液相色譜儀檢測(cè)。大大減少檢測(cè)步驟和檢測(cè)時(shí)間，可用于水產(chǎn)品中孔雀石綠和結(jié)晶紫及其代謝產(chǎn)物的應(yīng)急篩查和常規(guī)檢測(cè)。

試劑和材料

標(biāo)準(zhǔn)品：孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫、隱色結(jié)晶紫純度大于98%，均來(lái)自中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院。

孔雀石綠、結(jié)晶紫快速檢測(cè)前處理試劑盒（北京六角體科技發(fā)展有限公司），其中包括提提取劑、液體提取劑、固相萃取柱、洗脫劑。

其余試劑均為色譜純。

儀器和設(shè)備

高效液相色譜儀：配紫外-可見光可變波長(zhǎng)檢測(cè)器；檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí)間程序可控。

智能化食品安全一體機(jī)。

液相色譜條件和實(shí)驗(yàn)步驟

色譜柱：C18柱，4.6mm×150mm （d.i），粒度5?m；

流動(dòng)相：乙腈+乙酸鹽緩沖液（80+20，V/V）；

流速：1.0mL/min；

柱溫：室溫；

進(jìn)樣量：20?L。

檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí)間程序：0min～5.0 min，618nm；5.0min～12min，588nm；12min～18min，267nm；孔雀石綠的檢測(cè)波長(zhǎng)為618nm，結(jié)晶紫的檢測(cè)波長(zhǎng)為588nm，隱色孔雀石綠和隱色結(jié)晶紫的檢測(cè)波長(zhǎng)為267nm。

魚取肉質(zhì)部分，蝦去殼。取樣品5.00g于通道1攪拌杯中，再加入一瓶固體提取劑，并連接底座和固相萃取柱。將攪拌杯置入儀器。設(shè)置各項(xiàng)參數(shù)為：攪拌時(shí)間1：1（s）、攪拌間歇1：30（s）、攪拌次數(shù)1：5、提取劑量1：10（mL）、攪拌時(shí)間2：1（s）、攪拌間歇2：30（s）、攪拌次數(shù)2：2、提取劑量2：20（mL）、萃取時(shí)間：60（s）、氣壓檔位：8。

取下固相萃取柱，加入1mL洗脫劑洗脫。旋轉(zhuǎn)蒸干后，加入1mL流動(dòng)相復(fù)溶，進(jìn)樣分析。

結(jié)果與討論

色譜測(cè)定

在上述色譜條件下，孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫、隱色結(jié)晶紫的保留時(shí)間約為孔雀石綠4.0min、隱色孔雀石綠13.6min、結(jié)晶紫5.4min、和隱色結(jié)晶紫14.7min。

繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

移取孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫、隱色結(jié)晶紫混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，用流動(dòng)相稀釋成0、2ng/mL、50ng/mL、250ng/mL、500ng/mL標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，用高效液相色譜儀測(cè)定，得出標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。線性系數(shù)0.996，y=1088.2x+5843.3。

孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫、隱色結(jié)晶紫的檢測(cè)限均為2.0μg/kg。

樣品檢測(cè)結(jié)果計(jì)算

取魚、蝦樣品，按實(shí)驗(yàn)方法處理后，用色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)或按式（1）分別計(jì)算供試樣品中的孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫和隱色結(jié)晶紫殘留量。

2

ω= ci …… （1）

5

ω-水產(chǎn)品中孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫和隱色結(jié)晶紫殘留量，μg/kg；

ci-標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出試樣溶液中孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫和隱色結(jié)晶紫標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的濃度，μg/L；

2/5-換算常數(shù)。

實(shí)際檢測(cè)10個(gè)以上樣品，得出方法回收率為：85%～105%。