柳婷婷

（山東省聊城市植保站，聊城 252053）

1 菌株研究概況及現(xiàn)狀

1.1 木霉T95和T88菌株

木霉 (Trichoderma)是一類重要的植物病害的生防真菌，隸屬于半知菌亞門、絲孢綱、絲孢目、絲孢科，常見于土壤中、植物殘體、植物的根圍、葉圍、種子、球莖表面及動物糞便上，并對許多真菌有拮抗作用。常見的重要菌種有綠色木霉、哈茨木霉、康寧木霉等。

國內(nèi)研究已證明哈茨木霉 （TrichodermaharzianumRifai）T88菌株 （以下簡稱 T88）和綠色木霉 （TrichodermaatrovirideBissett）T95菌株 （以下簡稱T95）能對嚴重危害楊樹爛皮病菌和楊樹水泡潰瘍病菌有拮抗和重寄生現(xiàn)象[1]。

1.2 球毛殼ND35菌株

球毛殼 (C.globosum)ND35菌株是分離自毛白楊的內(nèi)生真菌優(yōu)勢菌株，并顯示對幾個普通果樹和森林病原真菌等多種病原菌的拮抗活性。另外，已經(jīng)證明了ND35菌株及其產(chǎn)生的次生代謝物質(zhì)的具有較強的生防活性[2]，能對多種植物的根部病害、葉部病害、枝干病害等多種病害的病原菌產(chǎn)生抑制作用，并能夠促進寄主植物生長。

2 材料與方法

2.1 試驗材料

2.1.1 供試植物材料

黃瓜：津研四號 （新泰市某種業(yè)有限公司）菜豆：良選一號地豆王 （天津市某種業(yè)）

2.1.2 菌種來源

生防菌種:球毛殼 （Chaetomium globosum）ND35菌種、哈茨木霉 （Trichoderma harzianum）T88和綠色木霉（Trichoderma viride）T95 菌株。

病原菌種：黃瓜猝倒病菌 （Pythium aphanidermatum）Pa菌株和 （Rhizoctonia solani）Rs-1菌株。

以上菌株均由山東農(nóng)業(yè)大學植物病理系資源微生物研究室提供。

2.2 室內(nèi)平皿對峙培養(yǎng)

在超凈工作臺內(nèi)用滅過菌的直徑6mm的打孔器分別取同質(zhì)同量的新鮮培養(yǎng)的T95、T88及ND35和Pa、Rs-1菌絲塊，分別移接到已制備好的直徑為90mm的PDA平板培養(yǎng)基上進行對峙培養(yǎng)，距平皿中心15mm處接生防菌菌絲塊，以平皿中心為對稱點的另一側同時接病原菌菌絲塊，以病原菌單置平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)做對照，各3個重復，置于25°C下培養(yǎng)。3天后測量兩接種點連線上各菌落半徑，計算病原菌生長抑制率。同時做木霉菌和毛殼菌的對峙培養(yǎng)，方法相同。

當兩菌落接觸相交后，觀察記載生防菌對病原菌的抑制、包圍、侵入并占領病原菌營養(yǎng)空間的過程。

2.3 溫室中的生防試驗

2.3.1 對黃瓜猝倒病的防治試驗

營養(yǎng)盆內(nèi)播種剛萌發(fā)的黃瓜種子，營養(yǎng)土中分別摻入生防菌的麥粒培養(yǎng)物，每盆3g。7天后接種含病原菌Pa的麥粒培養(yǎng)物，以只接種病原菌Pa培養(yǎng)物而不接生防菌的為對照。每處理4盆，每盆3株，接種4天后調(diào)查發(fā)病情況，計算防治效果。

防治效果%=（對照組發(fā)病率-防治組發(fā)病率）/對照組發(fā)病率×100%

2.3.2 對菜豆幼苗立枯病的防治試驗

營養(yǎng)盆內(nèi)播種剛萌發(fā)的菜豆種子時，營養(yǎng)土中分別摻入生防菌的麥粒培養(yǎng)物，每盆3.5g。同時根部接種長滿生防菌的PDA菌絲塊，每株2塊，要注意長菌絲的一面靠在根上。接種生防菌7天后接種病原菌菌餅，并加摻病原菌的麥粒培養(yǎng)物每盆3.5g左右。同時以只用土壤培養(yǎng)的為空白對照。每處理6盆，每盆3株。7天后調(diào)查病情指數(shù)，計算防治效果。

防治效果=（對照組病情指數(shù)-處理組病情指數(shù)）/對照組病情指數(shù)×100%。

豆立枯病病害嚴重度分級標準 （方中達，1998；田淑慧，2006）：

(y=根部病斑橫向直徑/根周長)

0級：根部無病斑；

Ⅰ級： 0＜y≤25%；

Ⅱ級：25%＜y≤50%；

Ⅲ級：50%＜y≤75%；

Ⅳ級： y＞75%。

3 結果與分析

3.1 平皿對峙培養(yǎng)結果

試驗結果表明，木霉T88和T95以及毛殼菌ND35對兩種病原菌腐霉Pa和立枯絲核Rs-1均有明顯的抑制作用，生長抑制率分別為74.4%、79.3%和47.0%，而綠色木霉T95的拮抗效果最好。在木霉菌與毛殼菌的對峙培養(yǎng)中，T95和T88對ND35的生長抑制率分別為29.1%和32.8%，這可能是由于木霉菌的生長速度較快，迅速占領并擴大生存空間所致。

表1 ND35、T88和T95與Rs-1對峙培養(yǎng)結果

表2 3種生防菌與黃瓜猝倒病病菌Pa對峙培養(yǎng)結果

3.2 對黃瓜猝倒病的生防效果

因為黃瓜苗很小，受腐霉侵染發(fā)病的苗均因根莖腐爛而迅速倒伏，所以無法分級記數(shù)。僅統(tǒng)計發(fā)病率，計算防治效果。試驗結果見圖1，黃瓜幼苗只接種毛殼菌ND35的防治效果最好，達86.7%，而只接種木霉菌T88和T95及兩種生防菌組合防治的效果都不及前者，分別為46.7%，73.3%，55.3%，80%。可以看出，栽培條件下ND35對黃瓜猝倒病的防治作用十分明顯，這可能是ND35的幾種生防機制綜合作用的結果。分析其原因可能是提前3天向黃瓜苗接種的ND35能夠定殖于植物根部，激發(fā)了植物的抗病防御反應，同時ND35又對病原菌Pa有很強的抑制作用如重寄生作用等。

3.3 對菜豆幼苗立枯病的生防效果

菜豆苗從感染R.solani到發(fā)病枯死，通常需要一個較長的時間。因此實驗中選擇了接種病原菌后7天取樣調(diào)查病情指數(shù)。從試驗結果 （圖2）可以看出，菜豆幼苗只接種木霉菌T88和T95的防治效果最好，達91.0%，而只接種毛殼菌ND35及兩種生防菌組合防治的效果都稍低，分別為77.4%，45.5%，27.3%?？梢钥闯觯耘鄺l件下木霉菌對菜豆立枯病的防治作用十分明顯，木霉菌與毛殼菌的組合防治效果則明顯低于其中一種菌的單獨防治效果。

圖1 木霉菌和毛殼菌對黃瓜猝倒病的生防效果

圖2 木霉菌和毛殼菌對菜豆幼苗立枯病的生防效果

4 討論

試驗結果表明，T88、T95和ND35對P.aphanidermatum和R.solani（即Pa和Rs-1）兩種病原真菌菌絲生長的抑制作用效果是不盡相同的。ND35與Rs-1對峙后，能形成明顯的抑菌帶，且對峙后期出現(xiàn)菌絲纏繞，平行生長等現(xiàn)象。由于木霉菌T95、T88生長速度較快，占領生存空間早，且能產(chǎn)孢較多，因此抑制效果要好于球毛殼菌ND35。

在栽培條件下球毛殼菌ND35對黃瓜猝倒病有較好的防治效果，木霉菌T88和T95則防治菜豆立枯病非常有效，而這兩種生防菌的組合防治對這兩種蔬菜病害的防治效果都比單獨一種生防菌的效果低得多。因此推薦使用毛殼菌ND35防治黃瓜猝倒病，木霉菌T88和T95防治菜豆立枯病，不建議使用組合防治，以免降低生防效果。

隨著人類環(huán)境保護意識的增強，尤其是殺菌劑的大量使用后的惡果，開發(fā)出具有生防潛力、活性的各種微生物來控制管理各類病害的發(fā)生是人類要迫切需要解決的問題。因此木霉菌和毛殼菌在農(nóng)業(yè)中的實際應用，將能夠在園藝作物、農(nóng)作物以及森林枝干等病害管理的安全和環(huán)保方面，開拓一條有前途的新道路，具有廣闊的應用前景。

[1]高克祥，劉曉光.木霉菌對楊樹樹皮潰瘍病菌拮抗作用的研究.林業(yè)科學，2001，37(5):82～88

[2]Gao Kexiang，Liu Xiaoguang,et al.Biocontrol potential of Chaetomium spirale ND35 against canker of apple tree(in English).In:Yang Q(ed).Biological Control and Bio-technology.Harbin:Heilongjiang Science and Technology Press，2003，132～140