張書俊 (南陽(yáng)市中心醫(yī)院普外科，河南 南陽(yáng) 473000)

肝細(xì)胞癌病變進(jìn)展快，轉(zhuǎn)移率高。近來(lái)相關(guān)研究認(rèn)為肝細(xì)胞癌生物學(xué)行為與多種基因和蛋白的表達(dá)異常有關(guān)〔1〕。整合素連接激酶(ILK)能夠參與整合素、生長(zhǎng)因子、WNT等信號(hào)傳導(dǎo)通路，與細(xì)胞的持續(xù)增殖、黏附性喪失、遷移及血管的生成可能有關(guān)〔2〕。NADPH:醌氧化還原酶1(NQO-1)是一種黃素酶，在不同腫瘤的表達(dá)不盡相同〔3，4〕，關(guān)于NQO-1在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其與ILK和增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的關(guān)系尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究關(guān)注肝細(xì)胞癌術(shù)后組織中ILK、NQO-1和PCNA的表達(dá)，探討其關(guān)系及臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2004年1月至2008年10月我院行肝細(xì)胞癌根治手術(shù)患者的術(shù)后蠟塊資料作為觀察組79例。納入均符合WHO中關(guān)于肝細(xì)胞癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)。男40例，女39例;年齡50～79歲，平均65.4歲;高分化40例，中分化16例，低分化23例。術(shù)前均未進(jìn)行放、化療。同時(shí)選取距離腫瘤邊緣＞3 cm的正常肝組織55例作為對(duì)照組，其中男30例，女25例;年齡51～78歲，平均64.3歲。兩組一般資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 ILK、NQO-1和PCNA蛋白表達(dá)的檢測(cè)方法 ILK、NQO-1和PCNA蛋白的濃縮液均購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司。枸櫞酸抗原修復(fù)液、DAB顯色試劑等相關(guān)試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋公司。ILK、NQO-1和PCNA依不同比例稀釋后進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，并設(shè)陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照。選擇最理想的配比濃度進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。蛋白的檢測(cè)應(yīng)用免疫組化SP法。嚴(yán)格按實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行操作。嚴(yán)格質(zhì)量控制。

1.3 ILK、NQO-1和PCNA陽(yáng)性的判讀方法 ILK、NQO-1的陽(yáng)性表達(dá)均位于細(xì)胞質(zhì)中，PCNA的陽(yáng)性表達(dá)位于細(xì)胞核中，以出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性反應(yīng)細(xì)胞。計(jì)數(shù)5個(gè)高倍視野，計(jì)數(shù)總和，以陽(yáng)性率≥25%為陽(yáng)性，以陽(yáng)性率＜25%為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SAS6.12軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 ILK、NQO-1和PCNA在兩組中表達(dá)的比較 觀察組ILK、NQO-1和PCNA表達(dá)的陽(yáng)性率中明顯高于對(duì)照組(P＜0.000 1)。見(jiàn)表1。

表1 ILK、NQO-1和PCNA在兩組陽(yáng)性表達(dá)的比較〔n(%)〕

2.2 ILK、NQO-1和PCNA的表達(dá)與肝細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系 觀察組中ILK、NQO-1和PCNA的表達(dá)與腫瘤的分化程度、TNM分期、腫瘤最大徑及Ki67的表達(dá)相關(guān)。見(jiàn)表2。

表2 ILK、NQO-1和PCNA的表達(dá)與肝細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系〔n(%)〕

2.3 肝細(xì)胞癌中ILK、NQO-1和PCNA表達(dá)的關(guān)系 ILK和PCNA(r=0.54，P=0.009 7)、NQO-1 和 PCNA(r=0.55，P=0.010 9)的表達(dá)均具有正相關(guān)性。

2.4 肝細(xì)胞癌中ILK、NQO-1和PCNA不同表達(dá)與患者生存時(shí)間的關(guān)系 觀察組中ILK、NQO-1和PCNA高表達(dá)患者的生存時(shí)間明顯短于低表達(dá)患者。見(jiàn)表3。

表3 肝細(xì)胞癌中ILK、NQO-1和PCNA不同表達(dá)與患者生存時(shí)間的關(guān)系(±s，個(gè)月)

表3 肝細(xì)胞癌中ILK、NQO-1和PCNA不同表達(dá)與患者生存時(shí)間的關(guān)系(±s，個(gè)月)

分組 n 生存時(shí)間 t值 P值ILK - 29 19.36±4.57 8.98 0.009 2+ 50 10.56±4.50 NQO-1 - 36 18.43±4.56 8.87 0.010 9+ 43 9.98±4.68 PCNA - 9 27.31±4.54 13.51 0.001 2+ 70 11.84±5.25

3 討論

肝細(xì)胞癌的進(jìn)展快，增殖指數(shù)高，轉(zhuǎn)移率高。近來(lái)人們關(guān)注ILK的表達(dá)與腫瘤的關(guān)系，并認(rèn)為ILK對(duì)腫瘤的進(jìn)展有一定促進(jìn)作用。ILK基因定位于染色體11p5.5～11p15.4，是一種相對(duì)分子質(zhì)量為59 kD的Ser/Thr蛋白激酶，通過(guò)介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，調(diào)控機(jī)體多條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，參與細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、分化及凋亡過(guò)程〔5，6〕。有研究認(rèn)為ILK可以抑制蛋白激酶B的生物學(xué)活性，調(diào)控細(xì)胞周期及細(xì)胞的凋亡過(guò)程，影響腫瘤的生長(zhǎng)〔7〕。NQO-1蛋白是一種胞質(zhì)黃素酶，其基因定位于16q22染色體，在正常肝細(xì)胞中低表達(dá)，當(dāng)其表達(dá)升高時(shí)，在一定程度上與腫瘤發(fā)生相關(guān)〔8〕。有研究認(rèn)為不同NQO-1基因亞型編碼的酶類呈現(xiàn)不同的活性〔9〕。如由TT純合子誘導(dǎo)的NQO-1活性失調(diào)，可以引起肝細(xì)胞對(duì)外源性致腫瘤物質(zhì)的解毒功能下降〔10〕。也有研究則認(rèn)為NQO-1可以作為一個(gè)氧化應(yīng)激反應(yīng)調(diào)節(jié)因子，對(duì)惡性腫瘤的進(jìn)展起一定的調(diào)節(jié)作用〔11〕。PCNA是一種非組核蛋白，作為一種細(xì)胞增殖的上調(diào)因子，通過(guò)與周期性蛋白激酶結(jié)合引起細(xì)胞的增殖過(guò)程〔12〕。有學(xué)者認(rèn)為PCNA為DNA聚合酶的輔助因子，直接參與DNA的合成，尤其是DNA增殖及表達(dá)失調(diào)最明顯的腫瘤細(xì)胞〔13〕。有學(xué)者認(rèn)為PCNA表達(dá)較Ki67要理想，可以囊括Ki67陽(yáng)性表達(dá)的所有細(xì)胞，因此其標(biāo)記增殖更加全面〔14〕。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示ILK、NQO-1和PCNA表達(dá)增強(qiáng)對(duì)病變進(jìn)展有明顯的促進(jìn)作用，三種蛋白直接和間接作用均能誘導(dǎo)腫瘤惡變。ILK、NQO-1和PCNA對(duì)調(diào)節(jié)腫瘤的分化有重要價(jià)值，分化是細(xì)胞由幼稚到成熟的過(guò)程，也是細(xì)胞惡變的重要過(guò)程，調(diào)節(jié)細(xì)胞分化是機(jī)體內(nèi)在的機(jī)制，由于蛋白表達(dá)失調(diào)的明顯影響，使腫瘤細(xì)胞停滯在低分化或未分化狀態(tài)，使腫瘤細(xì)胞的成熟過(guò)程受到更多的影響，也使腫瘤的惡性程度增高〔15，16〕。由于腫瘤的體積與腫瘤的生長(zhǎng)密切相關(guān)，尤其是生長(zhǎng)速度快的惡性腫瘤，而本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示ILK、NQO-1和PCNA均與腫瘤最大徑和腫瘤的TNM分期相關(guān)，因此三者在一定程度上參與腫瘤的生長(zhǎng)過(guò)程。由于以上因素均與腫瘤的預(yù)后相關(guān)，因此ILK、NQO-1和PCNA的表達(dá)可能對(duì)判斷腫瘤的預(yù)后有一定價(jià)值，同時(shí)ILK、NQO-1和PCNA不同表達(dá)患者的生存時(shí)間比較的結(jié)果直接證實(shí)了上述結(jié)論，即ILK、NQO-1和PCNA高表達(dá)患者的預(yù)后差。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果直接證實(shí)了ILK、NQO-1對(duì)增殖的促進(jìn)作用，尤其是PCNA與Ki67表達(dá)更趨一致性，提示ILK、NQO-1在對(duì)腫瘤影響過(guò)程中，參與了細(xì)胞的增殖過(guò)程，尤其是失控性增殖反應(yīng)過(guò)程。本文提示ILK和NQO-1高表達(dá)時(shí)可以明顯刺激細(xì)胞增殖，此時(shí)PCNA表達(dá)升高，腫瘤體積增大。也有觀點(diǎn)認(rèn)為ILK、NQO-1激活后，凋亡信號(hào)傳導(dǎo)受到影響，正常細(xì)胞的不斷增殖，而凋亡受到阻滯，細(xì)胞逐漸惡變〔17，18〕。

綜上，肝細(xì)胞癌中ILK、NQO-1和PCNA高表達(dá)，對(duì)病變的進(jìn)展有重要影響，術(shù)后聯(lián)合檢測(cè)ILK、NQO-1和PCNA的表達(dá)可能對(duì)判斷生物學(xué)行為和預(yù)后有一定價(jià)值。ILK、NQO-1對(duì)PCNA表達(dá)的增殖有直接作用，這可能是兩種蛋白的作用機(jī)制之一。

1 Peroukides S，Bravou V，Varakis J，et al.ILK overexpression in human hepatocellular carcinoma and liver cirrhosis correlates with activation of Akt〔J〕.Oncol Rep，2008;20(6):1337-44.

2 Choi YP，Kim BG，Gao MQ，et al.Targeting ILK and β4 integrin abrogates the invasive potential of ovarian cancer〔J〕.Biochem Biophys Res Commun，2012;427(3):642-8.

3 Yang Y，Zhang Y，Wu Q，et al.Clinical implications of high NQO1 expression in breast cancers〔J〕.J Exp Clin Cancer Res，2014;33(5):14.

4 馬 躍，林黎娟，樸俊杰，等.結(jié)直腸癌中NQO1蛋白表達(dá)的臨床病理及預(yù)后意義〔J〕.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2014;30(4):366-8.

5 劉 騫，趙 玫，趙 平，等.ILK、HSP90相互作用在胃癌中表達(dá)的研究〔J〕.中國(guó)腫瘤臨床，2005;32(7):365-7.

6 孫曉杰，林 梁，趙 玫，等.ILK與HSP90相互作用對(duì)乳腺癌細(xì)胞遷移影響及其機(jī)制的探討〔J〕.中華腫瘤防治雜志，2012;19(3):161-3.

7 Lin SW，Ke FC，Hsiao PW，et al.Critical involvement of ILK in TGFbeta1-stimulated invasion/migration of human ovarian cancer cells is associated with urokinase plasminogen activator system〔J〕.Exp Cell Res，2007;313(3):602-3.

8 Lou Y，Li R，Xiong L，et al.NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1(NQO1)C609T polymorphism and lung cancer risk:a meta-analysis〔J〕.Tumour Biol，2013;34(6):3967-79.

9 Siegel D，Kepa JK，Ross D.NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1(NQO1)localizes to the mitotic spindle in human cells〔J〕.PLoS One，2012;7(9):e44861.

10 Jamshidi M，Bartkova J，Greco D，et al.NQO1 expression correlates inversely with NFκB activation in human breast cancer〔J〕.Breast Cancer Res Treat，2012;132(3):955-68.

11 Wakai T，Shirai Y，Sakata J，et al.Prognostic significance of NQO1 expression in intrahepatic cholangiocarcinoma〔J〕.Int J Clin Exp Pathol，2011;4(4):363-70.

12 Kuang RG，Wu HX，Hao GX，et al.Expression and significance of IGF-2，PCNA，MMP-7 and α-actin in gastric carcinoma with Lauren classification〔J〕.Turk J Gastroenterol，2013;24(2):99-108.

13 Zhu S，Sun P，Zhang Y，et al.Expression of c-myc and PCNA in Epstein-Barr virus-associated gastric carcinoma〔J〕.Exp Ther Med，2013;5(4):1030-4.

14 Sun J，Xiong J，Zhen Y，et al.P53 and PCNA is positively correlated with HPV infection in laryngeal epitheliopapillomatous lesions in patiets with different ethnic backgrounds in Xinjiang〔J〕.Asian Pac J Cancer Prev，2012;13(11):5439-44.

15 Yao X，Li D，Xiong DM，et al.A novel role of ribonuclease inhibitor in regulation of epithelial-to-mesenchymal transition and ILK signaling pathway in bladder cancer cells〔J〕.Cell Tissue Res，2013;353(3):409-23.

16 倪 靜，秦麗娟，吳擁軍，等.肺癌組織中NRF2、KEAP1和NQO1蛋白的表達(dá)〔J〕.鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2012;47(4):456-8.

17 Sameer AS，Shah ZA，Syeed N，et al.NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1(NQO1)Pro187Ser polymorphism and colorectal cancer predisposition in the ethnic Kashmiri population〔J〕.Asian Pac J Cancer Prev，2010;11(1):209-13.

18 Zellweger T，Ninck C，Bloch M，et al.Expression patterns of potential therapeutic targets in prostate cancer〔J〕.Int J Cancer，2005;113(4):619-28.