楊 琪 唐雪芳

GS試劑在病理自動(dòng)化染色中的臨床應(yīng)用

楊 琪 唐雪芳

目的 探討GS試劑在病理自動(dòng)化染色中的應(yīng)用。方法 選取采用GS環(huán)保染色試劑固定、脫水、透明、浸蠟、染色和封片的新鮮組織樣本4014例，采用全自動(dòng)HE染色，同時(shí)對(duì)相同的組織樣本采用傳統(tǒng)石蠟制片法制片并采用傳統(tǒng)HE染色法染色，對(duì)不同試劑制片和染色的組織樣本的染色結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)和判讀，比較兩種方法的染色結(jié)果及染色時(shí)間等。結(jié)果 經(jīng)GS環(huán)保套液制片的組織切片效果更加良好，均未出現(xiàn)脫水不完全，組織變脆和變硬的情況；兩方法HE染色的時(shí)間分別是（61．0±3．4）min和（39．0±2．5）min，經(jīng)GS環(huán)保套液染色的時(shí)間更短，且經(jīng)HE染色后，染色更加均勻，組織細(xì)胞的結(jié)果清晰，細(xì)胞間的裂隙較少。結(jié)論 在病理技術(shù)工作中，采用GS環(huán)保試劑代替?zhèn)鹘y(tǒng)的甲醛和二甲苯，具有無毒、無污染、無異味釋放的優(yōu)點(diǎn)，染色效果更加滿意，且安全性好，制片和染色時(shí)間短，值得在病理技術(shù)工作中進(jìn)行推廣應(yīng)用。

GS試劑；病理自動(dòng)化染色；臨床應(yīng)用

常規(guī)病理技術(shù)常用的固定劑為4%甲醛，脫水、透明的主要試劑為乙醇和二甲苯。已有研究中證實(shí)，常規(guī)病理技術(shù)應(yīng)用中相關(guān)的試劑多具有較強(qiáng)的刺激性和揮發(fā)性，不但病理技術(shù)應(yīng)用存在一定局限，且還會(huì)對(duì)相關(guān)人員的身體健康造成不良影響。因此，尋找一種對(duì)人體無毒、無害且安全的替代品已成為病理技術(shù)工作者的一種迫切愿望。本研究分別通過GS試劑和傳統(tǒng)試劑制備組織切片，并將其分別應(yīng)用在病理自動(dòng)化染色的過程中，比較不同方法、不同試劑制備的組織切片的染色效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1．1 一般資料 選取湘鄉(xiāng)市人民醫(yī)院自2013年5月～2015年2月期間臨床送檢的不同活體組織病理標(biāo)本共計(jì)4014例，包括乳腺、結(jié)直腸、食管、胃、甲狀腺腫物、淋巴結(jié)、皮膚、膽囊、脂肪、子宮宮頸、肝臟、扁桃體及腎穿刺組織等不同部分的新鮮病理組織，每份標(biāo)本都取材2個(gè)組織塊（組織塊的大小為1．5cm×1．0cm×0．2cm），并分別采用GS環(huán)保套液石蠟制片法和傳統(tǒng)的石蠟制片法對(duì)組織進(jìn)行處理制片（固定、脫水、透明、浸蠟），然后將其進(jìn)行病理自動(dòng)化染色，將采用GS環(huán)保套液處理的標(biāo)本作為觀察組，將傳統(tǒng)試劑處理的標(biāo)本作為對(duì)照組，比較兩組組織標(biāo)本的制片、染色效果。

1．2 方法 采用同一型號(hào)全自動(dòng)脫水機(jī)、石蠟切片機(jī)、生物組織自動(dòng)包埋機(jī)以及全自動(dòng)染色機(jī)等。GS環(huán)保套液由哈爾濱格林公司研究開發(fā)生產(chǎn)的。

1．2．1 對(duì)照組 本組組織樣本所采用的是經(jīng)傳統(tǒng)石蠟制片法制片并采用傳統(tǒng)HE染色法染色方法。制片方法為：采用4%的中性甲醛（或者95%的乙醇和甲醛溶液以9∶1的比例配成固定液）對(duì)組織進(jìn)行固定，經(jīng)乙醇脫水（經(jīng)濃度為70%、80%、95%的乙醇和無水乙醇進(jìn)行梯度脫水），二甲苯透明，浸臘后使用石蠟包埋。將其切成4～5μm厚的切片。染色方法為：切片70℃烤片10min；分別使用二甲苯Ⅰ和二甲苯Ⅱ脫蠟各5min，然后使用無水乙醇、95%乙醇、80%乙醇梯度脫水各2min，自來水沖洗3min；蘇木精染色8min，自來水沖洗3min；1%鹽酸分化液分化7s，自來水沖洗；藍(lán)化液1min，自來水沖洗1min；1%伊紅染色3min，自來水沖洗7s；70%乙醇、95%乙醇各10s；無水乙醇Ⅰ、無水乙醇Ⅱ各3min；二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ各3min；中性樹膠封固。

1．2．2 觀察組 本組組織樣本所采用的是經(jīng)過GS環(huán)保染色試劑制片并采用全自動(dòng)HE染色方法。制片方法為：采用GS無醛固定液對(duì)組織進(jìn)行固定，分別采用脫水液、透明液、浸蠟液分別進(jìn)行脫水、透明和包埋，采用石蠟切片機(jī)進(jìn)行切片處理。對(duì)于標(biāo)本體積較小的腎穿刺標(biāo)本而言，需要采用手工單獨(dú)處理的方法進(jìn)行制片[1]，制片的步驟同上。染色方法為：切片70℃烤片10min；分別使用GS脫蠟液Ⅰ和GS脫蠟液Ⅱ脫蠟5min；然后使用無水乙醇、95%乙醇脫水各30s，自來水沖洗2min；蘇木精染色4min，自來水沖洗1min；1%鹽酸酒精分化5s，自來水沖洗3min；藍(lán)化液染色1min，自來水沖洗1min；1%伊紅染色2min，自來水沖洗10s；除浮染液10s；無水乙醇1min；除水透明1min；透明1min；無苯封片膠封固。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用SPSS．17．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料采用“x±s”表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用例數(shù)（n）表示，計(jì)數(shù)資料組間率（%）的比較采用χ2檢驗(yàn)；以P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

4014例患者的病理組織經(jīng)GS環(huán)保套液制片與經(jīng)傳統(tǒng)石蠟制片法制片后，比較其組織切片可見，觀察組經(jīng)GS環(huán)保套液制片的組織切片效果更加良好，均未出現(xiàn)脫水不完全，組織變脆和變硬的情況；2種方法制片后經(jīng)HE染色，經(jīng)GS環(huán)保套液染色的時(shí)間更短（P＜0．05），且經(jīng)HE染色后，染色更加均勻，組織細(xì)胞的結(jié)果清晰，細(xì)胞間的裂隙較少。見表1。原有的結(jié)構(gòu)，不會(huì)發(fā)生過度脫水而致收縮的現(xiàn)象；由于GS環(huán)保套液中的蘇木精染液著色迅速，分化后沖洗時(shí)間短，也提高了染液的穩(wěn)定性。在切片的時(shí)候，不論對(duì)切片的厚度要求怎樣，都能發(fā)現(xiàn)切片中的組織染色均勻完整，且在顯微鏡下細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)的顏色分明，色澤十分亮麗鮮艷，有利于更加清晰直觀的觀察病理組織的細(xì)胞結(jié)構(gòu)[8]。

綜上所述，在病理技術(shù)工作中，采用GS環(huán)保試劑代替?zhèn)鹘y(tǒng)的甲醛和二甲苯具有無毒、無污染、無異味釋放的優(yōu)點(diǎn)，染色效果更加滿意，且安全性好，制片和染色時(shí)間短，值得在病理技術(shù)工作中進(jìn)行推廣。

表1 2種方法HE染色的時(shí)間比較

3 討論

在常規(guī)的病理技術(shù)工作中，常需要對(duì)病理組織樣本進(jìn)行制片染色來對(duì)其進(jìn)行分析和研究，但是在脫水、固定等過程中常用的試劑，如甲醛、二甲苯等都具有十分強(qiáng)烈的揮發(fā)性和刺激性[2-5]，不僅對(duì)實(shí)驗(yàn)室工作人員的身體健康會(huì)產(chǎn)生較大的危害，還會(huì)對(duì)環(huán)境造成很大的污染[6]。因而，尋找性能穩(wěn)定的能夠代替甲醛、二甲苯等有害試劑的無毒、環(huán)保試劑對(duì)于病理技術(shù)工作人員和環(huán)境保護(hù)都具有十分重要的意義，GS環(huán)保試劑應(yīng)運(yùn)而生。

本研究采用了哈爾濱格林公司[7]開發(fā)研制的GS環(huán)保試劑和傳統(tǒng)的甲醛、二甲苯試劑對(duì)不同部位的病理組織標(biāo)本進(jìn)行制片和染色，結(jié)果可見GS試劑不僅在制片過程中具有更強(qiáng)的滲透性，且能夠有效縮短染色過程中的脫水時(shí)間，保證組織的細(xì)胞能保持

[1] 郭效忠，苗志風(fēng)，劉春榮，等．GS環(huán)保試劑在病理制片中的應(yīng)用體會(huì)[J]．診斷病理學(xué)雜志，2012，7(3)：32．

[2] 寇雪梅，趙玉瑩．GS環(huán)保套液在病理技術(shù)工作中的應(yīng)用[J]．黑龍江醫(yī)學(xué),2012，36(9)：676-677．

[3] 田玉旺，朱紅艷，苗金紅，等．GS環(huán)保試劑在病理制片技術(shù)中的應(yīng)用[J]．診斷病理學(xué)雜志，2011，18(4)：312-313．

[4] 宋一民，高冬玲，郝志偉．GS環(huán)保染色套液在病理常規(guī)染色中的應(yīng)用[J]．診斷病理學(xué)雜志，2014，21(4)：256．

[5] 易紅梅，李艷春，鐘仁華，等．GS環(huán)保型試劑在病理技術(shù)工作中的應(yīng)用體會(huì)[J]．臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2014，30(4)：463-464．

[6] 苗金紅，田玉旺，朱紅艷．GS環(huán)保試劑在特殊染色中的應(yīng)用[J]．診斷病理學(xué)雜志，2013，20(11)：736-737．

[7] 朱衛(wèi)國(guó)，劉春玲，寇雪梅，等．格林組織標(biāo)本制備及切片染色套液在病理實(shí)驗(yàn)室中的應(yīng)用[J]．武警醫(yī)學(xué)，2012，23(7)：610-611．

[8] 孫廷誼，謝紅建，孔令非．GS試劑在病理自動(dòng)化染色中的應(yīng)用[J]．診斷病理學(xué)雜志，2013，20(4)：254-255．

10．3969/j．issn．1009-4393．2015．18．053

湖南 411411 湖南省湘鄉(xiāng)市人民醫(yī)院病理科（楊琪 唐雪芳）