劉 靜 汪先桃

HOST2和HE4在上皮性卵巢癌早期診斷中的意義

劉 靜 汪先桃

目的 探討HOST2、HE4檢測對(duì)上皮性卵巢癌的診斷價(jià)值。方法 選取上皮性卵巢癌21例、上皮性交界性卵巢瘤23例和正常卵巢21例，使用PCR方法檢測組織中HOST2 lncRNA和HE4 mRNA的表達(dá)量和陽性率。結(jié)果 Ⅲ～Ⅳ期上皮性卵巢癌患者HE4表達(dá)率高于Ⅰ～Ⅱ期上皮性卵巢癌患者HE4的表達(dá)率，且均顯著高于卵巢正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；Ⅲ～Ⅳ期上皮性卵巢癌患者HOST2表達(dá)率與Ⅰ～Ⅱ期上皮性卵巢癌患者HOST2的表達(dá)率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；但均顯著高于卵巢正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。上皮性卵巢癌組的HOST2和HE4聯(lián)合檢測卵巢癌和上皮性交界性卵巢腫瘤的陽性率均顯著高于HOST2或HE4檢測陽性率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論 HE4和HOST2均在上皮性卵巢癌和上皮性交界性卵巢瘤組織中表達(dá)升高，可成為提高上皮性卵巢癌早期診斷率的分子腫瘤標(biāo)志物。HE4和HOST2聯(lián)合檢測可提高上皮性卵巢癌早期診斷率。

卵巢癌；早期診斷；HOST2；人附睪分泌蛋白-4

卵巢癌是嚴(yán)重威脅婦女生命的惡性腫瘤，在婦科腫瘤中發(fā)病率居第3位而病死率居首位，甚至超過宮頸癌和子宮內(nèi)膜癌的總和[1-2]。因缺乏有效的早期診斷方法，卵巢癌確診時(shí)75%的患者已屬晚期。早期卵巢癌治療效果相對(duì)較好，而晚期卵巢癌預(yù)后卻極差，5年生存率徘徊于25%～30%[2]。HOST2是目前發(fā)現(xiàn)僅在上皮性卵巢癌上表達(dá)的一種長鏈非編碼基因[3]。HE4是目前廣泛應(yīng)用來檢測上皮性卵巢癌及治療后效果的監(jiān)測，其臨床價(jià)值已得到肯定[4]。本研究率先聯(lián)合分析HE4和HOST2在上皮性卵巢癌上的表達(dá)，并與上皮性卵巢交界性腫瘤、卵巢上皮性良性腫瘤檢測的結(jié)果進(jìn)行比較，以評(píng)價(jià)HOST2在卵巢中的診斷價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1．1 一般資料 選取2012年1月～2013年4月成都市龍泉驛區(qū)第一人民醫(yī)院收治的上皮性卵巢癌21例、上皮性交界性卵巢瘤23例和正常卵巢21例。正常卵巢組織組（上皮來源卵巢囊腫）、上皮性卵巢交界性腫瘤組（漿液性9例，黏液性6例，卵巢內(nèi)膜樣8例）和上皮性卵巢癌組（手術(shù)病理分期：Ⅰ～Ⅱ期11例，Ⅲ～Ⅳ期10例；組織分類：漿液性12例，粘液性5例，卵巢內(nèi)膜樣4例）。組織標(biāo)本收自于成都市龍泉驛區(qū)第一人民醫(yī)院接受手術(shù)患者，術(shù)前均未接受放化療。術(shù)中切取卵巢部分組織立即置液氮中，用于提取RNA。部分組織HE染色后用于病理診斷。所有涉及人體標(biāo)本的研究均事先獲得成都市龍泉驛區(qū)第一人民醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

1．2 主要試劑和儀器 總RNA抽提試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、PCR擴(kuò)增試劑SYBR GreenⅡ（大連TaKaRa公司）；磷酸鹽緩沖液（PBS）為本院自配。熒光定量PCR擴(kuò)增儀（gene cycle TM Bio-Rad，美國）。

1．3 實(shí)驗(yàn)方法

1．3．1 RNA提取和cDNA合成 先用Trizol試劑從組織中提取總RNA。提取總RNA后，經(jīng)真空干燥，溶解于DEPC水中。測定A260nm/A280nm比值及RNA濃度后，立即進(jìn)行cDNA合成。cDNA合成，根據(jù)RNA的濃度，分別取一定量的RNA模板樣品，依次加入逆轉(zhuǎn)錄試劑，總反應(yīng)體積60μL，具體操作按逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書進(jìn)行。

1．3．2 引物設(shè)計(jì) 根據(jù)HOST2和HE4全長基因序列，利用Primer Premier 5．0設(shè)計(jì)HOST2和HE4特異性的引物和內(nèi)參引物。見表1。引物是上海英俊(Invitrogen)公司合成。

表1 HOST2基因、HE4和β-actin基因的引物序列

1．3．3 PCR擴(kuò)增 擴(kuò)增體系：目的基因與內(nèi)參基因反應(yīng)體系為25μL，體系中各成分的量見表2、3。擴(kuò)增條件：預(yù)變性95℃，5min；變性95℃，30s；延伸52℃，30s；退火72℃，1min，30個(gè)循環(huán)；72℃復(fù)性5min。進(jìn)行cDNA PCR擴(kuò)增。目的基因和內(nèi)參基因的擴(kuò)增在同時(shí)完成，檢測樣本的同時(shí)制備目的基因和內(nèi)參基因的雙標(biāo)準(zhǔn)曲線，判斷二者的擴(kuò)增效率是否一致并對(duì)樣本進(jìn)行定量，同時(shí)實(shí)驗(yàn)設(shè)陰陽性和空白對(duì)照。F值=目的基因拷貝數(shù)/內(nèi)參基因拷貝數(shù)。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)采用SPSS19．0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理，組間比較采用t檢驗(yàn)分析，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0．05為統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著差異?？紤]實(shí)驗(yàn)影響因素，當(dāng)F≥0．20時(shí)判斷該標(biāo)本為有表達(dá)，實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次。

2 結(jié)果

2．1 卵巢組織HOST2和HE4表達(dá)的比較 HOST2和HE4基因在各類卵巢組織中的表達(dá)：PCR結(jié)果顯示，2個(gè)基因在卵巢癌組均有一定程度表達(dá)。2者相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Ⅰ～Ⅱ期與Ⅲ～Ⅳ期相比較中，HE4差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），而HOST2差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；PCR結(jié)果顯示2個(gè)基因在正常卵巢組織中表達(dá)弱；HOST2基因在上皮性交界性卵巢瘤較HE4基因在上皮性交界性卵巢瘤表達(dá)量高，統(tǒng)計(jì)學(xué)有明顯差異（P＜0．01）。見圖1。

圖1 組織中HOST2和HE4 F值

2．2 各組患者HOST2和HE4陽性率比較 HOST2在上皮性卵巢癌組、上皮性交界性卵巢瘤組和正常卵巢組分別為90．5%、69．6%和4．8%；HE4陽性率在上皮性卵巢癌組、上皮性交界性卵巢瘤組和正常卵巢組分別為85．7%、30．4%和14．3%；二者聯(lián)合檢測陽性率分別為95．2%、73．9%和14．3%。見表2。在上皮性卵巢癌組中，2個(gè)基因同時(shí)陰性率為4．8%(1/21)，在正常卵巢組織中同時(shí)陽性沒有，在交界性卵巢腫瘤中HOST2陽性率高于HE4陽性率。見表3。

表2 組織中HOST2和HE4陽性率[%（n）]

3 討論

卵巢癌是常見的婦科惡性腫瘤之一，發(fā)病率逐年上升，病死率居女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之首，5年生存率由早期的90%下降為晚期的25%～30%[1]。因缺乏有效的早期診斷方法，患者出現(xiàn)臨床癥狀就診時(shí)往往已是晚期，而早期治療和晚期治療的生存率有顯著的區(qū)別［2］。為提高卵巢癌早期診斷的敏感度和特異度，尋找多種具有不同特性腫瘤標(biāo)志物的聯(lián)合檢測是當(dāng)前的研究方向。

HE4基因位于染色體20q12-13．1上，對(duì)機(jī)體的免疫功能具有保護(hù)作用，在正常卵巢組織中不能測出。HE4在上皮性卵巢癌組織中呈高表達(dá)，是重要的上皮性卵巢癌腫瘤標(biāo)志物[4-8]。HOST2(ovarian cancer-speci c transcripts 2，HOST2)是Rangel等于2003年在卵巢癌組織中發(fā)現(xiàn)具有組織和癌特異性的lncRNA[3]。HOST2和HE4在上皮性卵巢癌患者的表達(dá)率顯著高于良性卵巢腫瘤患者。由于HE4是目前診斷卵巢癌較好的指標(biāo)。HOST2與HE4在卵巢癌診斷相比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明HOST2具有較好的診斷效能。由于交界性卵巢腫瘤是低度惡性腫瘤，而HOST2和HE4在交界性卵巢癌表達(dá)量顯著高于正常卵巢組織。

表3 各組患者 HOST2和HE4聯(lián)合檢測結(jié)果[%(n)]

綜上所述，HOST2和HE4都可能具有對(duì)卵巢癌的早期診斷作用。本研究率先聯(lián)合檢測HOST2和HE4來診斷上皮性卵巢癌，聯(lián)合檢測卵巢癌陽性率比單測HOST2或HE4陽性率高。HE4、HOST2在早期上皮性卵巢癌中升高，可以成為提高上皮性卵巢癌早期診斷率的腫瘤標(biāo)志物。

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Objective To evaluate the value of HOST2, HE4 detection in the diagnosis of epithelial ovarian cancer.Methods 21 cases of epithelial ovarian cancer,20 cases of benign ovarian tumors. The expression uses the PCR method to detection of HOST2 lncRNA and HE4 mRNA and the positive rate.Results III-IV epithelial ovarian cancer patients the expression rate of HE4 is higher than that of I-II expression in patients with epithelial ovarian cancer were significantly higher than the rate of HE4, ovarian benign tumor group (P＜0.05), Ⅲ and Ⅳ HOST2 epithelial ovarian carcinoma expression rate and expression of Ⅰ-Ⅱ in patients with epithelial ovarian cancer the rate of HOST2 had no significant difference, but significantly higher than that of benign ovarian tumor group (P＜0.05). The positive rate of epithelial ovarian cancer group HOST2 and HE4 combined detection of ovarian and epithelial borderline ovarian tumors were significantly higher than the positive rate of HOST2 or HE4 detection (P＜0.05). Conclusion The high expression of HE4 and HOST2 are at the junction of epithelial ovarian carcinoma and epithelial ovarian tumor tissue, can to improve the epithelial ovarian cancer early molecular diagnosis of tumor markers. The combined detection of HE4 and HOST2 can improve the early diagnosis of epithelial ovarian cancer.

Ovarian cancer; Early diagnosis; HOST2; Human epididymis secretory protein-4

10．3969/j．issn．1009-4393．2015．18．001

四川 610100 成都市龍泉驛區(qū)第一人民醫(yī)院 （劉靜 汪先桃）

汪先桃 E-mail:38495964@qq.com