羅 惟，張 杰

（涼山州彝族自治州第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 615000）

時間分辨熒光免疫法與酶聯(lián)免疫吸附法檢測乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物的比較

羅 惟，張 杰

（涼山州彝族自治州第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 615000）

目的探討時間分辨熒光免疫法與酶聯(lián)免疫吸附法檢測乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物的臨床價值。方法選取該院檢驗(yàn)科2013年6～12月收取的乙型肝炎患者血清標(biāo)本250份，分別采用時間分辨熒光免疫法與酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行檢測，比較2種方法對乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒e抗體（HBeAb）、乙型肝炎病毒核心抗體（HBcAb）、乙型肝炎病毒表面抗體（HBsAb）及乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）等乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物陽性檢出率。結(jié)果時間分辨免疫熒光法用于乙型肝炎患者HBsAg、HBeAb、HBcAb、HBsAb及HBeAg檢測陽性率均明顯高于酶聯(lián)免疫吸附法，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論相較于酶聯(lián)免疫吸附法，時間分辨熒光免疫法用于乙型肝炎患者可顯著提高病毒血清標(biāo)志物陽性檢出率，具有臨床應(yīng)用價值。

熒光免疫測定； 酶聯(lián)免疫吸附測定； 乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物； 肝炎，乙型，慢性

乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物是目前公認(rèn)的乙型病毒性肝炎診斷“金標(biāo)準(zhǔn)”，也是乙型肝炎病毒感染重要病原學(xué)依據(jù)及病情進(jìn)展預(yù)后評估最關(guān)鍵指標(biāo)[1]。目前臨床乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物常規(guī)采用酶聯(lián)免疫吸附法，其具有操作簡便、檢測迅速及價格低廉等等優(yōu)勢，但大量臨床研究證實(shí)，酶聯(lián)免疫吸附法檢測靈敏度較低、漏診率較高、鉤狀效應(yīng)明顯，且無法提供乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物的具體含量[2-3]，無法滿足臨床需要。作為一種新型臨床免疫檢驗(yàn)技術(shù)，時間分辨熒光免疫法開始在乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物檢測中得到廣泛應(yīng)用。本次研究選取本院檢驗(yàn)科近期收取的乙型肝炎患者血清標(biāo)本250份，分別采用時間分辨熒光免疫法與酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行檢測，比較2種方法對于乙型肝炎病毒表面抗原（HB-sAg）、乙型肝炎病毒e抗體（HBeAb）、乙型肝炎病毒核心抗體（HBcAb）、乙型肝炎病毒表面抗體（HBsAb）及乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）等乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物陽性檢出率，探討時間分辨熒光免疫法與酶聯(lián)免疫吸附法用于乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物檢測的臨床價值差異。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院檢驗(yàn)科2013年6～12月收取的乙型肝炎患者血清標(biāo)本共250份，均符合中華醫(yī)學(xué)會《病毒性肝炎防治方案》慢性乙型病毒性肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]。入選患者中男157例，女93例，年齡30～57歲，平均（42.67±5.20）歲。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法 抽取乙型肝炎患者清晨空腹靜脈血5～10 mL，放入真空管中，37℃恒溫凝血分離血清，并于血清分離后1 h進(jìn)行檢測。（1）時間分辨熒光免疫法：時間分辨熒光免疫法屬于定量檢測方法，以超過正常參考范圍上限判讀為陽性，對于指標(biāo)判讀為弱陽性標(biāo)本，應(yīng)重新設(shè)立雙陽性對照重復(fù)檢測，如再次判讀為陽性即可認(rèn)定；檢測儀器采用上海新波時間分辨熒光免疫分析儀，并選擇同公司配套試劑盒，操作過程中嚴(yán)格按照試劑盒說明書要求進(jìn)行。（2）酶聯(lián)免疫吸附法：酶聯(lián)免疫吸附法屬于定性檢測方法，以酶標(biāo)儀顯示結(jié)果進(jìn)行陽性判讀，對于指標(biāo)判讀為弱陽性標(biāo)本，應(yīng)重新設(shè)立雙陽性對照重復(fù)檢測，如再次判讀為陽性即可認(rèn)定；檢測儀器采用匯松MB-580型。

1.2.2 觀察指標(biāo) 記錄乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物檢測陽性例數(shù)，計算陽性率；乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物指標(biāo)包括HBsAg、HBeAb、HBcAb、HBsAb及HBeAg；以超過正常參考范圍值上限判定為陽性，其中HBsAg、HBeAb、HBcAb、HBsAb及HBeAg正常參考范圍分別為0.0～0.5 ng/mL、0.0～0.2 PEU/mL、0.0～0.9 PEU/mL、0～10 mU/mL、0.0～0.5 PEU/mL；檢出陽性率=（檢出陽性例數(shù)/總例數(shù)）×100.00%。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

時間分辨免疫熒光法用于乙型肝炎患者HBsAg、HBeAb、HBcAb、HBsAb及HBeAg檢測陽性率均明顯高于酶聯(lián)免疫吸附法，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 2種方法對于乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物陽性檢出率比較[n（%）]

3 討 論

流行病學(xué)研究顯示，在全球范圍內(nèi)我國屬于乙型肝炎病毒感染高發(fā)地區(qū)，超過1億人攜帶HBsAg。乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物檢測是進(jìn)行乙型肝炎病毒感染判定最主要的方式；其中肝癌患者HBeAb感染檢出率顯著高于慢性乙型感染和肝硬化，而HBcAb水平與患者病情進(jìn)展即病毒增殖水平和肝細(xì)胞損傷具有相關(guān)性；而HBcAb則是乙型肝炎病毒感染后血清中最早出現(xiàn)抗體指標(biāo)，因其具有高效價、長持續(xù)時間等優(yōu)勢，被作為流行病學(xué)乙型肝炎病毒感染首選觀察指標(biāo)。

目前，臨床HBV感染后血清學(xué)檢測檢測常用方法包括酶聯(lián)免疫吸附法、時間分辨熒光免疫法及聚合酶鏈反應(yīng)法，其中酶聯(lián)免疫吸附法和時間分辨熒光免疫法主要用來檢測乙型肝炎病毒抗原或抗體，而聚合酶鏈反應(yīng)法則主要用來檢測乙型肝炎病毒DNA。酶聯(lián)免疫吸附法是目前最為常用乙型肝炎病毒免疫檢測技術(shù)，可通過對抗體抗原進(jìn)行酶標(biāo)記進(jìn)行病毒檢測，但其僅能夠完成病毒定性分析，無法進(jìn)行患者體內(nèi)病毒血清標(biāo)志物定量計算及動態(tài)監(jiān)測[5]，故乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物感染檢測靈敏性較為低下，無法滿足臨床對于乙型肝炎病毒復(fù)制水平及感染情況判讀需求。已有研究結(jié)果顯示，酶聯(lián)免疫吸附法檢測乙型肝炎血清標(biāo)志物最低限為0.5 ng/mL，故乙型肝炎病毒低水平感染人群漏檢更高；同時酶聯(lián)免疫吸附法檢測對于操作熟練度、污染及判讀方面要求較高，也限制其臨床應(yīng)用[6-7]。聚合酶鏈反應(yīng)法可通過檢測標(biāo)本中乙型肝炎病毒DNA表達(dá)確定有無病毒感染，但其對于設(shè)備、人員技術(shù)水平要求較高，無法在基層醫(yī)院廣泛應(yīng)用[9]。

時間分辨熒光免疫技術(shù)是近年來出現(xiàn)的一種乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物定性定量檢測手段，主要檢測機(jī)制為以鑭系稀土元素螯合物作為二抗進(jìn)行示蹤標(biāo)記病毒血清標(biāo)志物，進(jìn)而發(fā)生熒光免疫反應(yīng)[10]，經(jīng)放大器擴(kuò)大檢測信號，并經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線分析數(shù)據(jù)得到確定病毒血清標(biāo)志物含量。相對于其他乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物檢測方法，時間分辨免疫熒光法具有可多次重復(fù)檢測、測量值范圍廣、無衰變及檢測穩(wěn)定性高等優(yōu)勢[11-12]；同時整個檢測過程均有全自動熒光滿意檢測儀完成，有效避免因操作技術(shù)差異引起的檢測誤差，有助于提高檢測數(shù)據(jù)可靠性[13]。

本研究結(jié)果顯示，時間分辨熒光免疫法用于乙型肝炎患者HBsAg、HBeAb、HBcAb、HBsAb及HBeAg檢測陽性率均明顯高于酶聯(lián)免疫吸附法，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），提示時間分辨熒光免疫法在提高乙型肝炎患者病毒血清標(biāo)志物檢出敏感性方面優(yōu)勢明顯，更具臨床應(yīng)用價值。

綜上所述，相較于酶聯(lián)免疫吸附法，時間分辨熒光免疫法用于乙型肝炎患者可顯著提高病毒血清標(biāo)志物檢出陽性率，具有臨床應(yīng)用價值；但鑒于研究入選樣本量少、技術(shù)人員操作水平等因素制約，所得結(jié)論還有待進(jìn)一步臨床試驗(yàn)確證。

[1]段正軍，徐杰，田鵬飛.兩種方法對比檢測乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2007，4（7）：636-637.

[2]張小平，王延青.時間分辨熒光免疫分析技術(shù)在HBV-M檢測中的應(yīng)用[J].實(shí)用醫(yī)技雜志，2006，13（12）：2037-2038.

[3]陳瑜，夏寧邵，李蘭娟.病毒性肝炎病原學(xué)實(shí)驗(yàn)室診斷研究進(jìn)展[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2009，32（9）：971-977.

[4]徐杰，段正軍，田鵬飛.時間分辨熒光免疫測定技術(shù)在乙肝兩對半定量檢測中的臨床意義以及酶聯(lián)免疫法與時間分辨法的比較分析[J].中國中西醫(yī)綜合臨床雜志，2007，2（6）：1024.

[5]龍波，陳鐵奇，徐金平.時間分辨熒光免疫分析與酶聯(lián)免疫吸附分析檢測血清甲胎蛋白的比較[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2007，28（11）：1041-1042.

[6]丁鳳興.時間分辨熒光免疫技術(shù)在乙肝病毒標(biāo)志物定量檢測中的臨床應(yīng)用[J].實(shí)用醫(yī)技雜志，2006，13（22）：3946-3947.

[7]賈繼東，李海.HBsAg和HBV e抗原定量檢測的臨床意義[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2009，32（9）：965-966.

[8]李艷霞.時間分辨熒光免疫分析和酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物結(jié)果分析[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011，31（11）：1218-1219.

[9]胡曉燕，吳明輝.重視血清乙肝標(biāo)志物少見模式的臨床意義[J].臨床和醫(yī)藥實(shí)踐雜志，2009，8（8）：127-128.

[10]賈繼東，李海.HBsAg和HBV e抗原定量檢測的臨床意義[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2009，32（9）：965-966.

[11]吳正林，何英，葉軍，等.電化學(xué)發(fā)光法和ELISA法檢測乙肝血清標(biāo)志物結(jié)果對比分析[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2010，25（4）：103-l04.

[12]肖義森，潘國基，徐麗潔，等.TRFIA和ELISA檢測乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物的比較[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2010，28（1）：53-54.

[13]覃小梅，曾顯媛，秦麗容.時間分辨熒光免疫法定量檢測乙肝病毒血清標(biāo)志物的臨床意義[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011，10（10）：775-776.

10.3969/j.issn.1009-5519.2015.12.040

:B

:1009-5519（2015）12-1855-02

2015-02-03）

羅惟（1983-），女，四川西昌人，主管檢驗(yàn)師，主要從事醫(yī)學(xué)臨床檢驗(yàn)相關(guān)的研究；E-mail：1829029918@qq.com。