王衛(wèi)鋒 李 凡 崔曉敏 郭五保 李 芳

陜西省中醫(yī)藥研究院(西安710003)

土貝母中土貝母苷甲及土貝母總皂苷提取工藝研究*

王衛(wèi)鋒 李 凡 崔曉敏 郭五保 李 芳△

陜西省中醫(yī)藥研究院(西安710003)

目的：優(yōu)選中藥土貝母中土貝母苷甲和土貝母總皂苷的提取工藝。方法：以提取液中的土貝母苷甲和土貝母總皂苷為檢測指標(biāo)，采用正交試驗的方法來評價并優(yōu)選土貝母藥材的提取工藝。結(jié)果：過20目篩的土貝母顆粒加7倍量70%乙醇，以3mL/min流速滲漉為最佳提取條件。結(jié)論：此工藝土貝母中的有效成分土貝母苷甲和土貝母總皂苷提取完全，可以作為土貝母中有效成分的提取工藝。

土貝母為葫蘆科植物土貝母Bolbostemma panicultum(Maxim.)Franquer的干燥塊莖。為《中國藥典》2010年版一部收載的品種，具有散結(jié)，消腫，解毒的功效。主要用于乳癰、瘰疬、乳腺炎、頸淋巴結(jié)核、淋巴結(jié)炎、肥厚性鼻炎等[1]。土貝母中已經(jīng)分離出皂苷、甾醇、脂肪酸等多種化學(xué)成分[2-3]。皂苷類為土貝母中的主要活性成分，含量較高。因此對土貝母中的土貝母苷甲和總皂苷類成分進(jìn)行提取工藝研究。

1 儀器與試藥 1.1 儀 器 UV265FW紫外分光光度計(日本島津公司)，BP211D型十萬分之一分析天平(德國賽多利斯公司)，Waters2690高效液相色譜儀，Waters996二極管陣列檢測器，TGL-16G離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)，H66025T超聲清洗機(jī)(無錫超聲電子設(shè)備廠)，F(xiàn)W135型傾斜式高速萬能粉碎機(jī)(天津市泰斯特儀器有限公司)，Millennium32色譜工作站， RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞萊生化儀器廠)。

1.2 試 藥 土貝母苷甲對照品(由中國藥品生物制品鑒定所提供，供含量測定用，批號：111536-200304)，甲醇為色譜純，水為純化水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果 2.1 滲漏提取工藝 采用正交試驗的方法[5],對提取工藝進(jìn)行優(yōu)化, 以滲漉提取工藝中乙醇濃度、溶劑加入量、滲漉流速、顆粒粒度為考察因素，以土貝母苷甲含量、土貝母總皂苷含量、干膏量為考察指標(biāo)，設(shè)計3個水平，應(yīng)用L9(34)正交表安排試驗，其因素水平表見表1。

2.2 對照品溶液的制備 2.2.1 土貝母總皂苷檢測對照品溶液的制備：取減壓干燥至恒重的土貝母苷甲對照品26.13mg，精密稱定，置25mL量瓶中，以甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1mL中含土貝母苷甲1.0452mg)。

2.2.2 土貝母苷甲含量測定對照品溶液的配制：取減壓干燥至恒重的土貝母苷甲對照品8.26mg，精密稱定，置10mL量瓶中，以甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1mL中含土貝母苷甲0.826mg)。

表1 土貝母提取因素水平表

2.2.3 供試品溶液的制備：稱取土貝母藥材100g，共九份，隨機(jī)編成1～9號，按L9(34)正交表安排試驗，提取液揮去乙醇，定容至一定體積。精密吸取一定量提取液，水浴蒸至無醇味，加水10mL，移置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取4次(20mL、20mL、10mL、10mL)，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 測定方法 2.3.1 總皂苷分光光度含量測定方法：精密吸取一定量供試品溶液于10mL具塞試管中，75℃水浴蒸干，向其中加入4%香草醛-冰醋酸0.2mL，再加高氯酸0.6mL，于65℃水浴顯色25min，流水冷卻至室溫后加入4mL冰醋酸稀釋，搖勻，以相應(yīng)試劑為空白，放置15min，在469nm處測量吸收度，并計算含量。

2.3.2 土貝母苷甲含量測定方法：取一定量供試品溶液，離心后與標(biāo)準(zhǔn)品溶液分別注入液相色譜儀，流動相為甲醇-水(65∶35)，流速 1mL/min，溫度25℃，在214nm處測定峰面積，計算含量。

2.3.3 干膏的測定方法：精密量取上述各試驗號的提取液，分別置于已恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，殘渣于105℃干燥3h，取出，置干燥器中放置30min，稱重，計算干膏量。

2.4 結(jié)果及分析 正交實驗結(jié)果見表2，方差分析見表3、表4、表5。

表2 土貝母提取正交設(shè)計表及結(jié)果

表3 貝母苷甲方差分析表

注：F0.05(2，2)=19.00；F0.01(2，2)=99.00

表4 土貝母總皂苷方差分析表

注：F0.05(2，2)=19.00；F0.01(2，2)=99.00

表5 土貝母浸膏方差分析表

注：F0.05(2，2)=19.00；F0.01(2，2)=99.00

正交試驗結(jié)果分析:由直觀分析(表)可知，各因素對土貝母苷甲提取實驗結(jié)果影響的重要性為B>C>A>D，對土貝母總皂苷提取結(jié)果影響的重要性為A>C>B>D，對干膏收量結(jié)果影響的重要性為A>C>B>D，由方差分析(表)可知，因素A、B、C對苷甲的影響都有顯著性意義，而因素A對總皂苷提取的影響有顯著性差異，而因素A對干膏收量的影響有顯著性差異，結(jié)合三因素對苷甲和總皂苷的提取應(yīng)盡可能大，而收得的干膏量應(yīng)盡可能小，因此本實驗選取A2B2C2D1，即過20目篩土貝母粉末加7倍量70%乙醇，以3mL/min流速滲漉為最佳提取條件條件。

2.5 驗證試驗 為了考察正交試驗篩選出的最佳提取工藝的重現(xiàn)性，特進(jìn)行驗證試驗，稱取藥材100g，共3份，按最佳工藝進(jìn)行實驗，測定土貝母苷甲、總皂苷含量及干膏量，結(jié)果見表6。

表6 土貝母提取方法驗證試驗

驗證試驗結(jié)果與正交試驗結(jié)果基本吻合，說明正交實驗篩選出的提取工藝條件合理、可行、重現(xiàn)性好。

3 討 論 實驗過程中以土貝母苷甲和土貝母總皂苷為考察指標(biāo)，分別比較冷浸法、溫浸法、超聲法、滲漉法對藥材提取效果的影響，結(jié)果滲漉提取法對總皂苷和土貝母苷甲的提取效果優(yōu)于其他方法，因此本實驗采用滲漉法進(jìn)行提取。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:16.

[2] 金鵬飛,鄭春輝.中藥土貝母的研究進(jìn)展[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報，2013，20(2)：152-156.

[3] 孔凡華，朱大元，傅章才，等.土貝母化學(xué)成分的研究(Ⅲ)[J].化學(xué)學(xué)報,2008,46：772-778.

(收稿2014-07-16；修回2014-08-12)

*陜西省科技廳項目(2011K16-03-01)

土貝母/分析 @土貝母總皂苷 工藝

R286

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.05.043

△通訊作者