鄢　文，靳　文，王　昂 ，宋維舒

(廣東省第二人民醫(yī)院1.腫瘤一科；2.心血管二科，廣東 廣州　510317)

◇藥物與臨床◇

貝伐單抗聯(lián)合培美曲塞維持治療對晚期非鱗狀非小細(xì)胞肺癌患者循環(huán)microRNA-19以及白細(xì)胞介素-27表達(dá)的影響

鄢文1，靳文2，王昂1，宋維舒1

(廣東省第二人民醫(yī)院1.腫瘤一科；2.心血管二科，廣東 廣州510317)

摘要：目的探討貝伐單抗聯(lián)合培美曲塞維持治療晚期非鱗狀非小細(xì)胞肺癌療效及對循環(huán)microRNA(miR)-19和白細(xì)胞介素(interleukin，IL)-27表達(dá)水平的影響。方法選擇2013年3月至2014年3月入住該院的經(jīng)一線含鉑類方案化療獲得控制的晚期非鱗狀非小細(xì)胞肺癌患者45例，遵循知情同意原則分為培美曲塞組(25例)和貝伐單抗聯(lián)合培美曲塞組(20例)；分別觀察1年內(nèi)兩組療效以及患者外周血miR-19、IL-27的表達(dá)。結(jié)果培美曲塞聯(lián)合貝伐單抗組和培美曲塞組的疾病控制率分別為80%和48%，總有效率分別為45%和24%，兩組間疾病控制率和總有效率比較均存在統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)；培美曲塞聯(lián)合貝伐單抗組外周血miR-19表達(dá)約是培美曲塞組的0.57倍，兩組間相比存在統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。與培美曲塞組相比，培美曲塞聯(lián)合貝伐單抗組外周血IL-27表達(dá)升高，兩組間相比存在統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。結(jié)論貝伐單抗聯(lián)合培美曲賽維持治療有助于改善晚期非鱗狀非小細(xì)胞肺癌的治療效果，降低外周血miR-19、升高IL-27的表達(dá)。

關(guān)鍵詞：非小細(xì)胞肺癌；microRNA-19；白細(xì)胞介素-27；貝伐單抗；培美曲塞

肺癌是最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率和死亡率均居我國惡性腫瘤的首位，其中以非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)最為多見[1]。由于多數(shù)肺癌獲得有效診治已處于晚期階段，以鉑類為基礎(chǔ)的化療方案是目前晚期NSCLC的一線治療方案[2]。在一線化療方案結(jié)束后對獲得疾病控制的晚期NSCLC患者采用維持治療方案能夠有效延長晚期NSCLC患者的無進(jìn)展生存期(progression free survival，PFS)和/或總生存期(overall survival，OS)[2]。外周血microRNA(miR)-19(包括miR-19a和miR-19b)、白細(xì)胞介素(interleukin，IL)-27與NSCLC的病情嚴(yán)重程度以及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[3-5]。本研究旨在觀察貝伐單抗聯(lián)合培美曲塞維持治療晚期非鱗狀NSCLC的療效以及對循環(huán)miR-19以及IL-27表達(dá)水平的影響，以進(jìn)一步探討miR-19、IL-27在晚期NSCLC患者診治中的潛在應(yīng)用價值。

1對象與方法

1.1研究對象選擇2013年3月至2014年3月入住我院的經(jīng)病理學(xué)和影像學(xué)明確診斷的晚期(ⅢB期和Ⅳ期，排除肺癌腦轉(zhuǎn)移患者)非鱗狀NSCLC患者。以上患者均經(jīng)一線含鉑類方案(具體：TP方案：紫杉醇175 mg·m-2d1，順鉑 75 mg·m-2d1，q21d；GP：吉西他濱 1 g·m-2d1、d8，順鉑 75 mg·m-2d1，q21d；NP方案：長春瑞濱 25 mg·m-2d1、d8，順鉑 75 mg·m-2d1，q21d，DP：多西他賽 75 mg·m-2d1，順鉑 75 mg·m-2d1，q21d)化療4周期后，經(jīng)影像學(xué)、腫瘤標(biāo)志物、血常規(guī)、血生化等多項檢查證實(shí)患者腫瘤緩解或者穩(wěn)定后給予維持治療。遵循知情同意原則，分為培美曲塞組(25例)和貝伐單抗聯(lián)合培美曲塞組(20例)；分別觀察1年內(nèi)兩組療效以及患者外周血miR-19、IL-27的表達(dá)。

1.2研究方案培美曲塞組：培美曲塞500 mg·m-2d1，q21d，持續(xù)至病情進(jìn)展。在培美曲塞給藥前1周開始口服葉酸400 μg·d-1，一直服用整個治療周期，至最后1次給藥后21 d；在培美曲塞給藥前1周給予維生素B121 000 μg肌肉注射，以后每3個周期肌注一次；在培美曲塞給藥前1 d、當(dāng)天和第2天口服地塞米松片4 mg，每天2次。

貝伐單抗聯(lián)合培美曲塞組在培美曲塞組治療基礎(chǔ)上予以貝伐單抗治療。貝伐單抗15 mg·kg-1，d1，q21d，持續(xù)至病情進(jìn)展。在維持化療第2個周期后進(jìn)行臨床療效評價。

1.3臨床療效評價依據(jù)新版實(shí)體瘤療效評價標(biāo)準(zhǔn)：修訂的實(shí)體瘤療效評價標(biāo)準(zhǔn)(response evaluation criteria in solid tumours revised，RECIST)指南(1.1版本)，將實(shí)體瘤療效分為完全緩解(complete response，CR)、部分緩解(partial response，PR)、穩(wěn)定(stable disease，SD)和進(jìn)展(progressive disease，PD)；依據(jù)臨床療效評價，將CR+PR定義為總有效率(ORR)，CR+PR+SD定義為疾病控制率(DCR)。

1.4循環(huán)miR-19檢測所有入選患者于研究終點(diǎn)時采集空腹靜脈血6 mL，以3 000 r·min-1離心10 min取血漿貯存于-80℃冰箱備存待檢。采用miRNeasyTMMini Kit試劑盒，并依據(jù)試劑盒說明書提取血漿總RNA。對A260/A280在1.8～2.0之間的RNA樣本進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄后行cDNA的合成，參考熒光定量PCR試劑盒說明書對樣本中miR-19表達(dá)進(jìn)行檢測。所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。miR-19的表達(dá)使用U6標(biāo)準(zhǔn)化后，以2-ΔΔCt表示。

1.5外周血IL-27表達(dá)水平的檢測采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)檢測非鱗狀NSCLC患者外周血IL-27的表達(dá)水平(具體操作參考IL-27 ELISA試劑盒說明書)。

1.6統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。療效比較則采用兩獨(dú)立樣本非參數(shù)檢驗(yàn)。計數(shù)資料的組間比較則采用卡方檢驗(yàn)。P< 0.05時為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1患者一般臨床資料本研究共入選ⅢB期、Ⅳ期非鱗狀NSCLC患者45例，其中男性28，女性17例。兩組患者在性別、年齡、吸煙史、貧血、病理類型、ⅢB期和Ⅳ期 NSCLC患者比例方面無差異(P>0.05)。見表1。

表1　患者一般臨床資料

2.2貝伐單抗聯(lián)合培美曲塞維持治療對晚期非小細(xì)胞肺癌的臨床療效以及循環(huán)miR-19、IL-27表達(dá)的影響兩組患者入選后均隨訪1年，培美曲塞組CR 0例，PR 6例，SD 6例，PD 13例，其中死亡4 例；貝伐單抗聯(lián)合培美曲塞組CR 0例，PR 9例，SD 7例，PD 4例，死亡2例。1年內(nèi)培美曲塞聯(lián)合貝伐單抗組和培美曲塞組的疾病控制率分別為80%和48%，總有效率分別為45%和24%，兩組患者的DCR、ORR相比，均存在統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。兩組患者外周血miR-19表達(dá)水平相比，存在統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)；其中，miR-19在貝伐單抗聯(lián)合培美曲塞組的表達(dá)約是培美曲塞組的0.57倍。與培美曲塞組相比，培美曲塞聯(lián)合貝伐單抗組外周血IL-27表達(dá)升高，兩組間相比存在統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。見表2。

表2　貝伐單抗聯(lián)合培美曲塞維持治療對晚期非小細(xì)胞

3討論

NSCLC維持治療是針對完成以鉑類為基礎(chǔ)化療并獲得疾病控制的晚期NSCLC患者，在接受二線化療前的“觀察等待”階段所進(jìn)行的特定化療，目的在于延長晚期NSCLC患者的PFS及OS[6]。根據(jù)維持治療前后使用藥物是否相同，維持治療方案分為繼續(xù)維持治療(continuation maintenance therapy，CMT)和換藥維持治療(switch maintenance therapy，SMT)。CMT是在一線化療結(jié)束后使用一線化療方案中某種化療藥物或靶向治療藥物對患者繼續(xù)化療，SMT則是在一線化療結(jié)束后，使用另一種無交叉耐藥的藥物繼續(xù)化療。臨床研究證實(shí)維持治療能夠?yàn)椴∏楹棉D(zhuǎn)或穩(wěn)定的NSCLC患者帶來進(jìn)一步的臨床獲益，可延長PFS，以培美曲塞、厄羅替尼和貝伐單抗等藥物為主的維持治療方案甚至可延長OS，這些結(jié)果肯定了維持治療在晚期NSCLC治療中的作用[2,6]。鑒于上述藥物在NSCLC維持治療中的積極作用，臨床研究進(jìn)一步比較了聯(lián)合上述藥物是否能夠?yàn)镹SCLC治療帶來更大獲益。

晚期非鱗狀NSCLC在貝伐單抗、順鉑以及培美曲塞一線治療后貝伐單抗是否聯(lián)合培美曲塞的隨機(jī)III期臨床試驗(yàn)(AVAPERL試驗(yàn))的目的在于檢測貝伐單抗與培美曲塞聯(lián)合維持治療晚期NSCLC的效果是否優(yōu)于貝伐單抗單藥維持治療。與貝伐單抗單藥維持治療(PFS 3.7月，OS 13.2月)相比，貝伐單抗+培美曲塞聯(lián)合維持治療(PFS 7.4月，OS 17.1月)可以明顯延長非鱗狀NSCLC患者的無進(jìn)展生存期和總的生存期[7]。但是AVAPERL試驗(yàn)對于貝伐單抗與培美曲塞聯(lián)合維持治療晚期NSCLC是否優(yōu)于培美曲塞單藥維持治療并沒有做出研究。對于這一臨床問題，國內(nèi)張玉梅等[8]研究認(rèn)為培美曲塞聯(lián)合貝伐單抗較單用培美曲塞能夠延長NSCLC患者PFS和OS。本研究初步表明非鱗狀NSCLC患者1年內(nèi)應(yīng)用培美曲塞聯(lián)合貝伐單抗較單用培美曲塞在DCR和ORR方面均獲得明顯改善，結(jié)合上述研究提示貝伐單抗與培美曲塞聯(lián)合維持治療晚期非鱗狀NSCLC作用優(yōu)于單用貝伐單抗或培美曲塞維持治療。

microRNA是一類長度為18～24個核苷酸的非編碼RNA，它通過完全或不完全互補(bǔ)結(jié)合作用于靶基因mRNA 3′非編碼區(qū)域，發(fā)揮調(diào)節(jié)靶基因表達(dá)作用。以microRNA為重要組成部分的基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)決定了細(xì)胞的生長、分化、發(fā)育、增殖、自噬以及凋亡等病理生理過程。microRNA在腫瘤的形成與發(fā)展中扮演重要角色，與肺癌的形成與發(fā)展、診斷、治療以及預(yù)后密切相關(guān)[9-10]。其中，腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是肺癌等腫瘤治療失敗和死亡的主要原因。特異microRNA的過度表達(dá)或表達(dá)不足與臨床腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)?；A(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)一些microRNA與肺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)，如miR-29c、miR-30a、miR-34a/b/c等具有抑制肺癌轉(zhuǎn)移作用，miR-17-92、miR-135b、miR-143、miR-31等具有促進(jìn)肺癌轉(zhuǎn)移作用[11]。其中，miR-17-92家族是一個含有多順反子的高度保守的miRNA，包括miR-17、miR-18a、miR-19a、miR-19b、miR-20a、miR-92a等6個microRNAs。miR-17-92基因簇在肺癌及其轉(zhuǎn)移中作用受到肯定。臨床研究發(fā)現(xiàn)與肺癌易感人群相比，NSCLC患者外周血中miR-17-92表達(dá)明顯升高[12]。與NSCLC患者手術(shù)切除腫瘤前相比，術(shù)后7～10 d miR-19a、miR-19b等microRNAs表達(dá)進(jìn)一步降低[13]。進(jìn)一步研究認(rèn)為miR-19(包括miR-19a和miR-19b)是miR-17-92家族成員中發(fā)揮致瘤作用的主要成分[14-15]。miR-19通過靶作用于抑癌基因PTEN，激活A(yù)kt-mTOR信號通路，抑制腫瘤細(xì)胞凋亡[14-15]。課題組前期研究證實(shí)miR-19具有促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞株A549-Luc細(xì)胞轉(zhuǎn)移作用[12]。臨床研究發(fā)現(xiàn)miR-19a和miR-19b在NSCLC患者血清中較正常人高表達(dá)，并且血清miR-19a和miR-19b表達(dá)水平與NSCLC患者TNM分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移正相關(guān)，與OS顯著負(fù)相關(guān)[3-4]；提示外周血miR-19表達(dá)水平與晚期NSCLC患者病情嚴(yán)重程度以及預(yù)后密切相關(guān)。本研究中，在貝伐單抗聯(lián)合培美曲塞組晚期非鱗狀NSCLC患者外周血miR-19表達(dá)水平較培美曲塞組明顯降低，結(jié)合兩組患者治療效果，提示外周血miR-19表達(dá)水平可反映非鱗狀NSCLC的治療反應(yīng)和預(yù)后。

目前認(rèn)為肺癌患者體內(nèi)存在的免疫失衡狀態(tài)與肺癌預(yù)后明顯相關(guān)。對肺癌患者的進(jìn)行免疫調(diào)控治療將有助于提高肺癌的治療效果。機(jī)體免疫系統(tǒng)具有免疫監(jiān)視功能，當(dāng)體內(nèi)出現(xiàn)細(xì)胞惡變時，免疫系統(tǒng)能夠識別并通過免疫機(jī)制特異地清除這些“非己”細(xì)胞，抵御腫瘤的發(fā)生發(fā)展。然而，惡變細(xì)胞在某些情況下能通過多種機(jī)制逃避機(jī)體的免疫監(jiān)視，在體內(nèi)迅速增殖，形成腫瘤，這種腫瘤細(xì)胞通過多種機(jī)制逃避機(jī)體免疫系統(tǒng)識別和攻擊，在體內(nèi)生存和增殖的現(xiàn)象即為免疫逃逸[16]。腫瘤免疫逃逸機(jī)制的深入研究，為探討腫瘤免疫治療提供了新思路。樹突狀細(xì)胞(Dendritic cell，DC) 是體內(nèi)功能最強(qiáng)的專職抗原遞呈細(xì)胞，在抗原的捕獲、加工、提呈和激活淋巴細(xì)胞產(chǎn)生免疫反應(yīng)中起著相當(dāng)重要的作用，在誘導(dǎo)抗腫瘤免疫反應(yīng)中其作用為：(1)前體DC對腫瘤抗原分子的識別；(2)直接或由干擾素(interferon，IFN)-γ介導(dǎo)間接激活NK細(xì)胞對腫瘤進(jìn)行殺傷；(3)捕獲和交叉提呈腫瘤抗原；(4)活化腫瘤抗原特異性T細(xì)胞以及非特異性巨噬細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞；(5)誘導(dǎo)腫瘤抗原特異性T細(xì)胞向腫瘤趨化、識別并消滅腫瘤[17]。腫瘤免疫逃逸的機(jī)制與腫瘤對DC功能的影響有密切關(guān)系。腫瘤不但可以直接誘導(dǎo)DC凋亡，還可以通過干擾DC分化的多個環(huán)節(jié)，使腫瘤患者體內(nèi)DC數(shù)量下降，成熟受限，功能發(fā)生障礙，從而下調(diào)或抑制DC的抗原提呈及其免疫起始功能。腫瘤細(xì)胞可以通過釋放IL-10、VEGF 等細(xì)胞因子阻礙DC的分化和/或抗原提呈功能。大量資料表明，腫瘤組織中DC的數(shù)量和功能存在異常。腫瘤病人外周血中 DC 數(shù)量顯著減少，且全身轉(zhuǎn)移的病人相對于未轉(zhuǎn)移的更低。此外，腫瘤病人體內(nèi)DC存在功能缺陷，DC分化成熟障礙是其主要原因。DC 異常分化的結(jié)果是(1)有功能的成熟DC比例下降；(2)不成熟的DC大量積累；(3)未成熟的髓樣細(xì)胞大量積聚，它們具有抑制抗原特異性T細(xì)胞的功能，通過細(xì)胞與細(xì)胞的相互作用，誘導(dǎo)腫瘤免疫耐受。同時發(fā)現(xiàn)在腫瘤早期去除樹突狀細(xì)胞會加速腫瘤的擴(kuò)散，而如果在晚期除去樹突狀細(xì)胞則會延遲腫瘤的進(jìn)展[18]。這些研究表明在腫瘤微環(huán)境中，樹突狀細(xì)胞發(fā)生了表型和功能的改變，進(jìn)而導(dǎo)致了腫瘤免疫逃逸的發(fā)生。我們從已有的研究結(jié)果不難看出樹突狀細(xì)胞是腫瘤的免疫逃逸關(guān)鍵因素。肺癌的發(fā)生發(fā)展與DCs介導(dǎo)的免疫逃逸密切相關(guān)[18]，主要表現(xiàn)為：(1)肺癌細(xì)胞通過釋放 TGF-β、IL-4、血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、IL-10、抑制性 E 受體、黏附因子、環(huán)氧合酶2(cyclooxygenase-2，COX-2)和前列腺素E2(prostaglandin E2，PGE2)，抑制 DCs 的成熟和分化，促進(jìn)Th1/Th2的平衡向Th2漂移，降低效應(yīng)T細(xì)胞的活化和功能，逃脫免疫監(jiān)視；(2)肺癌細(xì)胞大量表達(dá)腫瘤相關(guān)抗原GA733-2，影響肺癌浸潤部位DCs表達(dá)主要組織相容性復(fù)合體(major histocompatibility complex，MHC)-II類分子和共刺激分子B7，從而影響T細(xì)胞活化；(3)肺癌細(xì)胞所分泌的一類糖磷脂神經(jīng)節(jié)苷脂，可抑制單核細(xì)胞來源的DCs表達(dá)分化群(cluster of differentination，CD)54、CD40、CD80和CD1a等抗原，使其低表達(dá)IL-12而高表達(dá)IL-10，從而誘導(dǎo)DCs自身凋亡，使肺癌細(xì)胞逃避機(jī)體的免疫監(jiān)視和免疫清除。此外，近來研究發(fā)現(xiàn)NSCLC組織中浸潤的DCs數(shù)量較早期肺癌組織明顯增加[19]，并以高表達(dá)T細(xì)胞免疫球蛋白和粘蛋白分子3(T cell immunoglobulin mucin-3，Tim-3)的DCs為主[20]。此外研究發(fā)現(xiàn)Tim-3與NSCLC的不良預(yù)后密切相關(guān)[21]。更進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)高表達(dá)Tim-3的DCs分泌IL-12、IFN-β1較低表達(dá)Tim-3 的DCs明顯減少；在免疫抑制因子VEGF、IL-10等刺激下DCs高表達(dá)Tim-3；以Tim-3單克隆抗體干預(yù)DCs，可使DCs分泌IL-12、INF-β1明顯增加，并能夠明顯增強(qiáng)抗腫瘤藥物的療效，其機(jī)制與Tim-3結(jié)合高遷移率族蛋白B1(high mobility group box-1 protein，HMGB1)，從而阻止HMGB1結(jié)合免疫激活作用的核酸被DCs內(nèi)吞[20]。以上研究提示DCs介導(dǎo)NSCLC免疫逃逸的關(guān)鍵分子，是肺癌的免疫治療重要切入點(diǎn)。

IL-27是IL-6/IL-12家族一員，由p28和epstein-barr(EB)病毒誘導(dǎo)基因3形成的異質(zhì)二聚體，主要由抗原遞呈細(xì)胞(DCs、巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞)產(chǎn)生。IL-27主要通過與靶細(xì)胞表面IL-27受體(IL-27 receptor，IL-27R)特異性結(jié)合來實(shí)現(xiàn)對靶細(xì)胞的調(diào)控作用[22]。IL-27R主要在T細(xì)胞、單核細(xì)胞及DCs中表達(dá)。 IL-27與IL-27R特異性結(jié)合后分別通過Janus激酶(Janus kinase，JAK)1、 JAK2介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子(signal transducers and activators of transcription，STAT)1和STAT3通路，以及絲裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)通路對淋巴細(xì)胞分化、功能進(jìn)行調(diào)控[22]，主要通過(1)促進(jìn)T細(xì)胞向Th1型細(xì)胞分化以及促炎癥因子干擾素γ(interferon γ，INF-γ)、TNF-α、IL-12表達(dá)；(2)阻礙T細(xì)胞向Th2型細(xì)胞分化以及IL-10的分泌；(3)阻礙T細(xì)胞向Th17型細(xì)胞分化，抑制IL-17的分泌；而IL-17有促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌轉(zhuǎn)移作用；(4)促進(jìn)MHC-I 類鏈相關(guān)蛋白A表達(dá)，激活NK細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞，發(fā)揮細(xì)胞毒作用；(5)限制調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cell，Treg cell)的分化和功能；(6)減少COX-2和PGE2的表達(dá)達(dá)到抑制小鼠肺腺癌細(xì)胞株LLC-1的遷移、侵襲以及在活體內(nèi)生長。已有研究證實(shí)IL-27不僅能夠直接抑制NSCLC細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移，抑制NSCLC細(xì)胞發(fā)生內(nèi)皮間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化有關(guān)[23]，還可促進(jìn)DCs分化、成熟，促進(jìn)DCs免疫應(yīng)答[24]，提示IL-27可能通過抑制DCs途徑介導(dǎo)的NSCLC免疫逃逸，激活DCs免疫應(yīng)答，促進(jìn)Th1細(xì)胞及其炎癥因子分化，激活NK細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞，抑制Th2、Th17、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞等細(xì)胞分化及其炎癥因子分泌，抑制免疫抑制因子PGE2、COX-2活性等環(huán)節(jié)抑制NSCLC增殖和轉(zhuǎn)移。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)晚期NSCLC患者外周血IL-27、IL-12表達(dá)降低，IL-10表達(dá)增加[25]，綜合上述研究結(jié)果提示IL-27可能具有抑制NSCLC增殖作用。本研究發(fā)現(xiàn)在貝伐單抗聯(lián)合培美曲塞組晚期非鱗狀NSCLC患者外周血IL-27表達(dá)水平較培美曲塞組明顯升高，提示貝伐單抗聯(lián)合培美曲塞維持治療的晚期非鱗狀NSCLC的免疫狀況優(yōu)于單用培美曲塞維持治療，這也與兩種治療方案的臨床治療效果相符。對于IL-27是如何參與貝伐單抗聯(lián)合培美曲塞維持治療晚期非鱗狀NSCLC可能與miR-19關(guān)系密切。體外實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)PGE2可以促進(jìn)NSCLC細(xì)胞株原癌基因MYC、miR-17-92以及COX-2水平的表達(dá)，抑制抑癌基因PTEN表達(dá)，使NSCLC細(xì)胞株抗凋亡能力增強(qiáng)；NSCLC患者服用COX-2特異性抑制劑塞來昔布后循環(huán)miR-17-92表達(dá)水平降低。另外，由于miR-19是miR-17-92的主要致瘤成分，IL-27可以抑制PGE2和COX-2的表達(dá)，提示IL-27可能通過抑制PGE2和COX-2表達(dá)，進(jìn)一步抑制miR-19的表達(dá)和NSCLC的增殖和轉(zhuǎn)移。結(jié)合本研究結(jié)果我們推測貝伐單抗聯(lián)合培美曲塞維持治療改善晚期非鱗狀NSCLC的治療效果可能部分通過降低外周血miR-19表達(dá)、促進(jìn)IL-27的表達(dá)以及改善機(jī)體免疫功能狀態(tài)實(shí)現(xiàn)。

綜上所述，貝伐單抗聯(lián)合培美曲塞維持治療有助于改善晚期非鱗狀NSCLC的治療效果，降低外周血miR-19表達(dá)，促進(jìn)IL-27的表達(dá)。

參考文獻(xiàn):

[1]郝捷，陳萬青. 2012中國腫瘤登記年報[M].北京：軍事醫(yī)學(xué)出版社，2012：1-300.

[2]Chan BA，Hughes BG. Targeted therapy for non-small cell lung cancer: current standards and the promise of the future[J]. Transl Lung Cancer Res，2015，4(1)：36-54.

[3]Lin Q，Chen T，Lin Q，et al. Serum miR-19a expression correlates with worse prognosis of patients with non-small cell lung cancer[J]. J Surg Oncol，2013，107(7)：767-771.

[4]吳朝輝. 血清miR-19b和miR-146a作為非小細(xì)胞肺癌判斷預(yù)后的生物標(biāo)志物[D].廈門：廈門大學(xué)，2014.

[5]Elinav E，Nowarski R，Thaiss CA，et al.Inflammation-induced cancer: crosstalk between tumours,immune cells and microorganisms[J]. Nat Rev Cancer,2013,13(11)：759-771.

[6]葉重陽，謝家政. 晚期非小細(xì)胞肺癌維持治療的進(jìn)展[J].中國臨床藥理學(xué)和治療學(xué)，2013，18(10)：1192-1195.

[7]Barlesi F，Scherpereel A，Gorbunova V，et al. Maintenance bevacizumab- pemetrexed after first-line cisplatin-pemetrexed-bevacizumab for advanced nonsquamous nonsmall-cell lung cancer: updated survival analysis of the AVAPERL (MO22089) randomized phase III trial[J]. Ann Oncol，2014，25(5)：1044-1052.

[8]張玉梅，李春姍，陳逸恒. 貝伐單抗聯(lián)合培美曲塞治療非小細(xì)胞肺癌臨床觀察[J]. 中華腫瘤防治雜志，2014，21(1)：51-54.

[9]Molina-Pinelo S，Gutiérrez G，Pastor MD，et al. MicroRNA-dependent regulation of transcription in non-small cell lung cancer[J].PLoS One，2014，9(3)：e90524.

[10] 劉莎，孫國平. miRNA145作為抑癌基因在胃癌中的表達(dá)及其功能研究[J].安徽醫(yī)藥，2014，18(10)：1817-1820.

[11] 鄢文，靳文，王昂，等. miR-19對肺腺癌A549細(xì)胞株遷移功能的影響[J]. 實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2014，30(13)：2031-2034.

[12] Krysan K，Kusko R，Grogan T，et al. PGE2-driven expression of c-Myc and oncomiR-17-92 contributes to apoptosis resistance in NSCLC[J]. Mol Cancer Res，2014，12(5)：765-774.

[13] Rabinowits G，Ger?el-Taylor C，Day JM，et al.Exosomal microRNA:a diagnostic marker for lung cancer[J].Clin Lung Cancer，2009，10(1)：42-46.

[14] Olive V，Bennett MJ，Walker JC，et al. miR-19 is a key oncogenic component of mir-17-92[J].Genes Dev，2009，23(24)：2839-2849.

[15] Hong L，Lai M，Chen M，et al. The miR-17-92 cluster of microRNAs confers tumorigenicity by inhibiting oncogene-induced senescence[J].Cancer Res，2010，70(21)：8547-8557.

[16] Kerkar SP，Restifo NP.Cellular constituents of immune escape within the tumormicroenvironment[J].Cancer Res，2012，72(13)：3125-3130.

[17] Bhargava A，Mishra D，Banerjee S，et al.Dendritic cell engineering for tumor immunotherapy: from biology to clinical translation[J]. Immunotherapy，2012，4(7)：703-718.

[18] Apetoh L，Locher C，Ghiringhelli F，et al. Harnessing dendritic cells in cancer[J]. Semin Immunol，2011，23(1)：42-49.

[19] Hald SM，Bremnes RM，Al-Shibli K，et al. CD4/CD8 co-expression shows independent prognostic impact in resected non-small cell lung cancer patients treated with adjuvant radiotherapy[J]. Lung Cancer， 2013，80(2)：209-215.

[20] Chiba S，Baghdadi M，Akiba H，et al. Tumor-infiltrating DCs suppress nucleic acid-mediated innate immune responses through interactions between the receptor TIM-3 and the alarmin HMGB1[J]. Nat Immunol，2012，13(9)：832-842.

[21] Zhuang X，Zhang X，Xia X，et al. Ectopic expression of TIM-3 in lung cancers: a potential independent prognostic factor for patients with NSCLC[J]. Am J Clin Pathol，2012，137(6)：978-985.

[22] Hunter CA，Kastelein R. Interleukin-27: balancing protective and pathological immunity[J]. Immunity，2012，37(6)：960-969.

[23] Kachroo P，Lee MH，Zhang L，et al. IL-27 inhibits epithelial-mesenchymal transition and angiogenic factor production in a STAT1-dominant pathway in human non-small cell lung cancer[J]. J Exp Clin Cancer Res，2013，32(1)：97.

[24] 張璁，田志輝，劉麗華，等. IL-27促進(jìn)人單個核細(xì)胞來源樹突狀細(xì)胞的分化成熟及其作用機(jī)制[J]. 中國腫瘤生物治療雜志，2012，19(1)：11-16.

[25] 鄢文，靳文，王昂，等. IL-27在非小細(xì)胞肺癌患者外周血中的表達(dá)[J]. 現(xiàn)代醫(yī)院，2014，14(7)：7-9.

Effect of maintenance therapy with bevacizumab-pemetrexed for advanced non-squamous non-small cell lung cancer and on the levels of circulating miR-19 and interleukin-27 expression

YAN Wen1,JIN Wen2,WANG Ang1,et al

(1.DepartmentofOncology；2.DepartmentofCarodiovascular,GuangdongNo.2People’sHospital,Guangzhou510317,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the effect of maintenance therapy with bevacizumab-pemetrexed for advanced non-squamous non-small cell lung cancer and on the levels of circulating microRNA(miR)-19 and interleukin (IL)-27 expression.Methods45 patients with advanced no-squamous non-small cell lung cancer and gotten controlled after first-line containing cisplatin chemotherapy who enrolled into our hospital were randomized into pemetrexed group (n=25) and bevacizumab + pemetrexed group (n=20) accroding to the principle of informed consent. The curative effect of the two groups within 1 year and the expression of circulating miR-19 and IL-27 expression were observed.ResultsThe disease control rate was 80% in bevacizumab + pemetrexed group and was 48% in pemetrexed group,the overall response rate was 45% in bevacizumab + pemetrexed group and was 24% in pemetrexed group. There have significant difference between two groups in the disease control rate and the overall response rate (P<0.05). The levels of circulating miR-19 in bevacizumab + pemetrexed group was 0.57 fold the pemetrexed group. There has significant difference between two groups in the levels of circulating miR-19 (P<0.05). Compared with the pemetrexed group,the levels of circulating IL-27 were increased in bevacizumab + pemetrexed group (P<0.05).ConclusionMaintenance therapy with bevacizumab+pemetrexed for advanced non-squamous non-small cell lung cancer could improve the clinical therapy effect,reduce the levels of circulating miR-19 expression and increased circulating IL-27 expression .

Key words：non-small cell lung cancer；microRNA-19；interleukin-27；bevacizumab；pemetrexed

(收稿日期：2015-03-02，修回日期：2015-06-23)

通信作者：王昂，男，副主任醫(yī)師，研究方向：腫瘤的免疫治療，E-mail:48457742@qq.com

基金項目：廣東省自然科學(xué)基金項目(No S2013040014341)；廣東省醫(yī)學(xué)科研課題(No B2013061)

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2015.09.050