孫 權(quán)黃萬凌秦華清汪 洋劉凌鋒馬維平劉 德

（1.湖北中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，湖北 荊州 434020；2.湖北省監(jiān)利縣人民醫(yī)院，湖北 監(jiān)利433300）

·研究報(bào)告·

活血滋腎湯對(duì)大鼠骨質(zhì)疏松癥模型血生化指標(biāo)的影響*

孫 權(quán)1黃萬凌1秦華清2汪 洋1劉凌鋒1馬維平1劉 德1

（1.湖北中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，湖北 荊州 434020；2.湖北省監(jiān)利縣人民醫(yī)院，湖北 監(jiān)利433300）

目的觀察活血滋腎湯對(duì)大鼠骨質(zhì)疏松癥模型血生化指標(biāo)的影響，研究活血滋腎湯防治骨質(zhì)疏松癥的機(jī)制。方法采用8月齡健康雌性SD大鼠48只，按隨機(jī)原則分為實(shí)驗(yàn)組、陽性組、模型組、正常組，每組各12只。正常組行假手術(shù)，其余3組行卵巢切除術(shù)，術(shù)后13周給藥，持續(xù)12周后取血觀測(cè)血清鈣（Ca）、磷（P）、堿性磷酸酶（AKP）及骨鈣素（BGP）、降鈣素（CT）。結(jié)果Ca、P水平在各組間相近（P＞0.05）；AKP測(cè)值實(shí)驗(yàn)組與陽性組、正常組相近（P＞0.05），顯著低于模型組（P＜0.05）；模型組BGP測(cè)值顯著高于實(shí)驗(yàn)組、正常組和陽性組（P＜0.05）；實(shí)驗(yàn)組CT測(cè)值顯著高于模型組（P＜0.05）。結(jié)論活血滋腎湯不影響血清Ca、P水平，能抑制去勢(shì)大鼠骨吸收作用，抑制高骨轉(zhuǎn)換，調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞活性，促進(jìn)骨的生成，維持正常骨轉(zhuǎn)換率，從而防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松。

骨質(zhì)疏松 活血滋腎湯 藥物療法 卵巢切除 大鼠

中藥復(fù)方制劑活血滋腎湯具有活血益氣、健脾滋腎等功能，臨床觀察證實(shí)，其治療原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥，在癥狀臨床控制、總有效率方面均有良好表現(xiàn)，治療安全，效果明顯［1］。本研究旨在通過觀察活血滋腎湯對(duì)大鼠骨質(zhì)疏松癥模型血生化的影響，進(jìn)一步了解其防治骨質(zhì)疏松癥的機(jī)制?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康成年SD大鼠48只，8月齡，雌性，體質(zhì)量（320±20）g，清潔級(jí)，由湖北中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 藥物 活血滋腎湯為筆者經(jīng)驗(yàn)方，該方由桃仁8 g，紅花6 g，熟地黃20 g，當(dāng)歸12 g，川芎6 g，白芍12 g，黨參12 g，黃芪15 g，杜仲10 g，枸杞子10 g等組成，原藥飲片購自湖北同濟(jì)堂藥房有限公司，水煮制成質(zhì)量濃度為含生藥1 g/mL的水提液。由湖北中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校中藥實(shí)驗(yàn)室提供。尼爾雌醇片（廊坊高博京邦制藥有限公司生產(chǎn)，規(guī)格1 mg/片，國(guó)藥準(zhǔn)字H11020123），使用前研細(xì)，用0.9%氯化鈉注射液配制成質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL的混懸液。

1.3 儀器與材料 全自動(dòng)生化分析儀，日立7600-020型（日本日立公司產(chǎn)）；γ放射免疫計(jì)數(shù)器，SN-695型（上海核所日環(huán)光電公司產(chǎn)）；灌胃器（用市售16號(hào)針頭及5 mL針筒自制）［2］。

1.4 分組與造模 實(shí)驗(yàn)前將大鼠置于光線柔和、潔凈、安靜、室溫20～25℃，相對(duì)濕度40%~70%的環(huán)境中適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d，然后采用數(shù)字隨機(jī)法將大鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組、陽性組、模型組、正常組，每組12只。均以3%戊巴比妥鈉35 mg/kg腹腔注射麻醉，麻醉后下腹部剪毛、皮膚消毒，在臍與恥骨前緣中點(diǎn)沿正中線切開皮膚約2 cm；切開腹白線及腹膜，打開腹腔；在切口下方找到子宮體及一側(cè)子宮角，沿子宮角向前導(dǎo)出卵巢。再分組處理，實(shí)驗(yàn)組、陽性組、模型組均結(jié)扎卵巢系膜血管后摘除雙側(cè)卵巢，將子宮復(fù)位后關(guān)腹，正常組僅摘除腹腔內(nèi)左右各1塊脂肪，將子宮復(fù)位后關(guān)腹；造模手術(shù)中嚴(yán)格遵循無菌操作原則，術(shù)后給予慶大霉素1.5 mg，肌肉注射，每日1次，連續(xù)3 d，預(yù)防感染。動(dòng)物摘除卵巢后1周，逐只行陰道上皮角化檢查，每日1次，連續(xù)5 d，明確造模成功。動(dòng)物分籠喂養(yǎng)，自由飲食。

1.5 給藥方法 造模術(shù)后大鼠喂養(yǎng)12周，第13周開始給藥，持續(xù)12周。模型組和正常組給予0.9%氯化鈉注射液10 mL/（kg·d）灌胃；實(shí)驗(yàn)組予活血滋腎湯水提液10 mL/（kg·d）灌胃；陽性組予尼爾雌醇混懸液10 mL/（kg·d）灌胃。

1.6 標(biāo)本采集與檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)觀察期間有5只大鼠死亡，最后取材標(biāo)本為43只大鼠。各組動(dòng)物均于給藥12周后摘眼球取血，標(biāo)本置于-20℃冰箱保存集中檢測(cè)。采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血中鈣（Ca）、磷（P）、堿性磷酸酶（AKP）含量，采用放射免疫分析法測(cè)定骨鈣素（BGP）、降鈣素（CT）水平。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（±s）表示，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組血清Ca、P、AKP檢測(cè)值比較 見表1。實(shí)驗(yàn)組、陽性組、正常組AKP測(cè)值顯著低于模型組 （P＜0.05），實(shí)驗(yàn)組、陽性組和正常組AKP測(cè)值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），血清Ca、P在各組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.2 各組BGP、CT水平檢測(cè)值比較 見表2。模型組BGP測(cè)值顯著高于實(shí)驗(yàn)組、正常組和陽性組 （P＜0.05），實(shí)驗(yàn)組、正常組、陽性組間BGP測(cè)值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；實(shí)驗(yàn)組CT測(cè)值顯著高于模型組（P＜0.05），實(shí)驗(yàn)組CT測(cè)值與陽性組、正常組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 各組血清鈣、磷、堿性磷酸酶檢測(cè)比較（±s）

表1 各組血清鈣、磷、堿性磷酸酶檢測(cè)比較（±s）

與模型組比較，△P＜0.05。下同。

組別 n A K P（I U / L）C a（m m o l / L） P（m m o l / L）實(shí)驗(yàn)組 1 0 1 5 3 . 8 4 ± 4 1 . 2 2△陽性組 1 0 1 6 1 . 9 3 ± 3 5 . 3 7△模型組 1 2 2 7 3 . 2 5 ± 8 2 . 1 6 2 . 5 3 ± 0 . 2 3 1 . 4 2 ± 0 . 2 6 2 . 4 7 ± 0 . 2 5 1 . 3 9 ± 0 . 3 2 2 . 5 1 ± 0 . 2 1 1 . 4 4 ± 0 . 2 7正常組 1 1 1 4 7 . 3 5 ± 3 9 . 4 1△2 . 6 0 ± 0 . 2 8 1 . 4 9 ± 0 . 3 0

表2 各組骨鈣素、降鈣素檢測(cè)比較（±s）

表2 各組骨鈣素、降鈣素檢測(cè)比較（±s）

組別 n B G P（μ g / L） C T（n g / L）實(shí)驗(yàn)組 1 0陽性組 1 0模型組 1 2 0 . 3 1 ± 0 . 2 7△1 6 3 . 8 1 ± 3 4 . 2 6△0 . 2 9 ± 0 . 1 9△1 6 7 . 9 3 ± 4 2 . 3 5 0 . 7 3 ± 0 . 2 2 1 2 4 . 3 7 ± 3 2 . 4 1正常組 1 1 0 . 3 8 ± 0 . 2 6△1 7 5 . 1 4 ± 3 7 . 5 8

3 討 論

骨質(zhì)疏松是一種系統(tǒng)性骨骼疾病，表現(xiàn)為骨量減少、骨微細(xì)結(jié)構(gòu)破壞、骨脆性增高、骨折危險(xiǎn)性增加［3］，常見于絕經(jīng)后婦女和老年人［4-5］。中醫(yī)學(xué)無骨質(zhì)疏松這一病名，根據(jù)其臨床表現(xiàn)，大致與中醫(yī)文獻(xiàn)所記載的“骨痹”“骨痿”“虛勞”“腰脊不舉”等類似。中醫(yī)理論認(rèn)為“腎藏精，精生髓，髓養(yǎng)骨”，“精足則髓足”，若腎精虧損，則髓無以養(yǎng)，從而導(dǎo)致骨質(zhì)疏松?；钛棠I湯根據(jù)中醫(yī)學(xué)對(duì)原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥病機(jī)及治療的認(rèn)識(shí)，辨證治療本病，以活血益氣、健脾滋腎為主，同時(shí)根據(jù)證型特點(diǎn)，突出健脾益氣或滋陰壯骨。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥主要與雌激素缺乏和老年化有關(guān)，有研究表明，由于雌激素水平下降或缺乏，使其對(duì)破骨作用抑制解除，骨吸收顯著增加，隨之骨形成也增加，形成的新骨量少于被吸收的骨量，從而導(dǎo)致總骨量丟失，高轉(zhuǎn)換率骨質(zhì)疏松形成［6-7］。對(duì)成年雌性大鼠切除卵巢后，伴隨骨轉(zhuǎn)換增強(qiáng)，其松質(zhì)骨骨量減少，骨強(qiáng)度下降，能較好模仿人類正常絕經(jīng)后發(fā)生高轉(zhuǎn)換型骨質(zhì)疏松時(shí)的骨丟失狀態(tài)［8］，適于骨質(zhì)疏松的研究與藥物評(píng)價(jià)，故而，本研究亦采用此中醫(yī)界公認(rèn)的較為理想的去勢(shì)造模法。

血清中部分AKP由成骨細(xì)胞產(chǎn)生，作為骨形成所必需的酶，AKP是成骨細(xì)胞活性的一個(gè)敏感反應(yīng)，是成骨細(xì)胞分化的早期標(biāo)志物［9］；Ca、P作為骨鈣化的重要物質(zhì)，貫穿于骨代謝過程的始終。一般認(rèn)為，絕經(jīng)后女性或去勢(shì)后動(dòng)物血清Ca、P因雌激素水平低下影響而有增加傾向，但多在正常范圍內(nèi)波動(dòng)，而AKP則伴隨著骨吸收亢進(jìn)、代償性骨形成增加引起活性升高。本研究中血清Ca、P在各組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，亦表明雌激素水平低下對(duì)血清Ca、P影響不大，活血滋腎湯不影響血清Ca、P水平；模型組AKP測(cè)值顯著高于正常組，反映出骨礦化的不足，實(shí)驗(yàn)組堿性磷酸酶測(cè)值和正常組接近，提示活血滋腎湯具有抑制去勢(shì)大鼠骨吸收的作用。

血清中的BGP由成骨細(xì)胞分泌，能直接反映成骨細(xì)胞的活性和骨生理代謝變化，被認(rèn)為是評(píng)價(jià)成骨功能的較特異參數(shù)，國(guó)內(nèi)外已將其作為骨代謝、轉(zhuǎn)換的一個(gè)敏感指標(biāo)，用于檢測(cè)代謝性骨病的骨轉(zhuǎn)換率［10］。本實(shí)驗(yàn)表明，雌性大鼠去勢(shì)后，實(shí)驗(yàn)組血清BGP顯著低于模型組而與正常組、陽性組無明顯差異，提示活血滋腎湯能夠減少大鼠去勢(shì)后骨形成的過度增加，抑制高骨轉(zhuǎn)換，維持正常骨轉(zhuǎn)換率。血清CT主要是抑制破骨細(xì)胞的活性，從而抑制骨吸收；同時(shí)也調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞活性，促進(jìn)骨的生成，其降低明顯影響到進(jìn)行性骨丟失。本實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)組血清CT測(cè)值顯著高于模型組，而與陽性組、正常組無顯著差異，表明活血滋腎湯能提高去勢(shì)大鼠血清CT水平，從而抑制骨吸收。

［1］ 孫權(quán)，秦華清．中西醫(yī)結(jié)合治療原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥42例臨床觀察［J］．河北中醫(yī)，2012，34（2）：231．

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The Effects of Huoxue Zishen Decoction on the Blood Biochemical Index of Osteoporosis Rats Model

SUN Quan，HUANG Wanling，QIN Huaqing，et al.Hubei college of Chinese medicine，Hubei，Jingzhou 434020，China

Objective：To observe the effect of Huoxue Zishen Decoction on the blood biochemical index of osteoporosis rats model，and the study on the mechanism of Huoxue Zishen Decoction in prevention and treatment of osteoporosis.Methods：48 8-month-old female SD rats，randomly divided into the experimental group，positive group，model group，and normal group，12 in each group.The normal group underwent sham operation，while other three groups were ovariectomized.Medicines were given 13 weeks later，lasting for 12 weeks.After that，blood was taken to observe the blood serum calcium （Ca），phosphorus（P），alkaline phosphatase（AKP）and osteocalcin（BGP），calcitonin（CT）.Results：Ca and P did not differ among groups（P＞0.05）；value of AKP measured in the experimental group and the positive group，the normal group had no difference（P＞0.05），significantly lower than that in the model group（P＜0.05）；BGP of the model group was significantly higher than that of the experimental group，the normal group and the positive group（P＜0.05）；CT of the experiment group was significantly higher than that of the model group（P＜0.05）.Conclusion：Huoxue Zishen Decoction has no effect on serum calcium，and phosphorus level，but can inhibit bone resorption in ovariectomized rats，inhibit high bone turnover，adjust the activity of bone cells，promote bone formation，maintain normal bone turnover rate，and thus benefit the prevention and treatment of postmenopausal osteoporosis.

Osteoporosis；Huoxue zishen decoction；Drug therapy；Ovary resection；Rats

R285.5

A

1004-745X（2015）06-0958-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.06.007

2015-03-10）

湖北省教育廳科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目（B2013134）