戴一，曹殿潔，夏蓮鳳 (安徽新華學(xué)院藥學(xué)院，安徽 合肥 230088)

二子菊花飲由女貞子、枸杞子、菊花 (質(zhì)量比:3∶3∶2)，組方而成，煎水飲服。本方中女貞子、枸杞子補肝腎、明目，菊花養(yǎng)肝明目，用于肝腎陰虛，眼目干澀，視物昏花，或視力減退［1］，該方對久坐注視、久用電腦、電子輻射等帶來的損害有積極治療保健作用。研究報道顯示女貞子中含有豐富的紅景天苷［2］?，F(xiàn)代藥理研究表明紅景天苷具有多種藥理作用，如抗疲勞作用［3］、抗衰老［4］、心肌損傷保護作用［5-6］。由于紅景天苷極性較大，在水中溶解度答，二子菊花飲又以茶形式使用，因此研究二子菊花飲中是否含有紅景天苷對于揭示二子菊花飲的保健作用具有重要參考價值，同時對于二子菊花飲質(zhì)量的保證、保健價值的提升、商業(yè)化的開發(fā)具有重要意義。本實驗采用水煎煮后濃縮干燥，對所得提取物采用HPLC測定紅景天苷的含量，為進一步研究與開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料與儀器

女貞子購自于亳州藥材市場，枸杞子、菊花為貢菊 (藥圣堂制藥有限公司)。紅景天苷對照品 (天津一方科技有限公司);甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

安捷倫1260高效液相色譜儀，安捷倫1260MWD檢測器，安捷倫1260二元泵 (美國安捷倫科技公司);梅特勒-托利多AB135-S電子分析天平 (梅特勒-托利多國際股份有限公司);FA2004型電子天平(上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司);Eppendorf Research移液器 (德國Eppendorf股份公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Inertsil ODS-3C18(250mm×4.6mm，5μm);流動相:甲醇∶水 (17∶83);流速1ml/min;檢測波長:220nm;柱溫:室溫;進樣量:20μl［7］。在此條件下對照品及供試品溶液圖譜見圖1。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取紅景天苷對照品4.60mg，置10ml容量瓶中，加甲醇制成每1ml含紅景天苷0.460mg的溶液，搖勻，即得對照品貯備液，低溫避光貯藏，備用。

2.3 供試品溶液的制備

取女貞子、枸杞子各18g，菊花12g，加10倍量水，于圓底燒瓶中煎煮1.5h，抽濾，煎煮3次，濾液合并、濃縮至干后真空40℃干燥48h，得干膏，精密稱取二子菊花飲干膏1.0g，加水25ml，超聲溶解，搖勻，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾，即得。

圖1 紅景天苷對照品 (a)及二子菊花飲供試品 (b)HPLC色譜圖

2.4 方法學(xué)考查

HPLC法［7］測定紅景天苷的含量。

2.4.1 線性關(guān)系考察 精密吸取“2.2”項下對照品貯備液3、5、7、10、12μl，按上述色譜條件進樣分析。以進樣量(X)為橫坐標(biāo)，峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo)，制備標(biāo)準曲線，得回歸方程為Y=644.67X－551.74，r=0.9992。結(jié)果表明，紅景天苷檢測濃度在1.38～5.52μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

2.4.2 精密度試驗 精密吸取同一對照品溶液20μl，按上述色譜條件重復(fù)進樣5次。結(jié)果:紅景天苷峰面積的RSD=0.75%，表明儀器精密度較好。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗 取同一樣品，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，分別于0、1、2、4、6h精密吸取20μl進樣。結(jié)果:紅景天苷峰面積的RSD=0.83%，表明供試品溶液在6 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.4.4 重復(fù)性試驗 精密稱取同一批樣品5份，分別按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定。結(jié)果:二子菊花飲的紅景天苷提取率RSD=1.37%，表明方法重復(fù)性較好。

2.4.5 加樣回收率試驗 取已知含量的樣品9份，每份1g，分別精密加入一定量紅景天苷對照品，照“2.3”項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定，計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 紅景天苷回收率試驗

2.5 樣品含量測定

精密稱取二子菊花飲提取物1.00g，3批，分別按“2.3”項下方法制成供試品溶液，按上述色譜條件測定峰面積并用外標(biāo)法計算二子菊花飲的紅景天苷提取率分別為0.0832%、0.0855%、0.0829%，平均為0.0839%，相當(dāng)于1g二子菊花飲可提取出紅景天苷0.832mg，可見二子菊花飲中紅景天苷含量較高。

3 結(jié)論

二子菊花飲為一藥茶，具有較高的保健價值，研究該茶中所含成分，對于其保健作用物質(zhì)基礎(chǔ)的揭示具有重要參考意義。本實驗建立了HPLC法測定二子菊花飲中主要成分紅景天苷的含量。該方法精密度良好、穩(wěn)定、具有較好的重復(fù)性及較高的回收率，用該法測得二子菊花飲中紅景天苷的含量平均為0.0839%，為二子菊花飲的進一步開發(fā)提供了參考。

［1］國家藥典委員會.中國藥典 (一部)［S］.2010版.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2010:43.

［2］李曼玲，徐丹，仝會娟，等.女貞子不同市售品炮制品及不同果實部位中紅景天苷的含量測定［J］.中國實驗方劑學(xué)雜志，2010，16(2):14-16.

［3］張俊，吳振剛，王慶偉，等.紅景天苷系列類似物的設(shè)計合成及抗疲勞活性初篩 ［J］.第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2009，30(19):1916-1918.

［4］邱強，毛根祥，申佳佳，等.紅景天苷對力達霉素誘導(dǎo)人二倍體成纖維細胞衰老的干預(yù)作用 ［J］.中國新藥雜志，2012，21(1):82-87.

［5］朱寧，張喆，劉莉，等.紅景天苷對缺氧誘導(dǎo)培養(yǎng)乳鼠心肌細胞的保護作用［J］.中成藥，2012，34(8):1587-1589.

［6］禹曉寧，陳安九.紅景天苷對異丙腎上腺素誘導(dǎo)的大鼠心肌損傷的保護作用［J］.時珍國醫(yī)國藥，2013，24(8):1926-1927.

［7］戚志華，王慶偉，王四旺，等.HPLC法測定不同生長期女貞子中紅景天苷的含量［J］.中國藥房，2010，21(11):996-997.