林曉燕, 林秋平, 許昌聲, 寧若冰, 祝 江, 林金秀, 柴大軍△

(1福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院超聲影像科， 2福建省腫瘤醫(yī)院， 3福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院心血管內(nèi)科，福建省高血壓研究所，福建 福州 350005)

血脂代謝異常及血管壁的氧化應(yīng)激損傷在動脈粥樣硬化 (atherosclerosis, AS) 的形成及斑塊進(jìn)展過程中具有重要作用，是冠狀動脈粥樣硬化發(fā)生的主要病理基礎(chǔ)[1]。流行病學(xué)證實，低密度脂蛋白膽固醇(low-density lipoprotein choleste-rol, LDL-C)、甘油三酯 (triglycerid, TG)和總膽固醇 (total choleste-rol, TC) 水平升高是導(dǎo)致血管壁脂質(zhì)沉積并形成粥樣斑塊重要因素[2]。糖尿病是動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的獨(dú)立危險因素，高糖誘導(dǎo)氧自由基水平升高，促使血管內(nèi)皮氧化損傷，導(dǎo)致動脈粥樣硬化形成。血脂水平無明顯差異的糖尿病患者動脈粥樣硬化發(fā)生率顯著升高，糖尿病患者動脈粥樣硬化形成和發(fā)展與其高糖狀態(tài)下抗氧化能力下降，氧自由基增加導(dǎo)致血管內(nèi)皮損傷有密切相關(guān)[3]。還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸 (nicotinamide-adenine dinucleotide phosphate, NADPH) 氧化酶是血管內(nèi)皮細(xì)胞活性氧簇 (reactive oxygen species, ROS) 的主要來源, 并參與了動脈粥樣硬化的病理生理過程，NADPH氧化酶的活化需要gp91phox亞基的參與[4-5]。

他汀類藥物作為膽固醇生物合成過程中限速酶3-羥-3-甲基戊二酰輔酶A (3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A，HMG-CoA) 還原酶的抑制劑，已成為降脂治療的關(guān)鍵用藥。他汀通過降低血脂水平減少動脈脂質(zhì)斑塊沉積，在改善動脈粥樣硬化的形成具有重要作用[6]。大量臨床和基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)，他汀的抗動脈粥樣硬化效應(yīng)遠(yuǎn)不局限于降脂作用，其降脂外效應(yīng)也參與其中，如抗炎、抑制內(nèi)皮細(xì)胞ROS生成、改善內(nèi)皮細(xì)胞損傷等[7]。

類視黃醇X受體 (retinoid X receptor, RXR) 在核受體家族中具有獨(dú)特性，因其可與許多核受體形成異源二聚體在心血管功能的調(diào)控方面具有重要作用[8]。既往研究發(fā)現(xiàn)RXR可以通過與過氧化物酶體增殖物激活受體 (peroxisome proliferator-activated receptor, PPAR)及肝臟X 受體 (liver X receptor, LXR) 形成PPAR/RXR及LXR/RXR二聚體，改善小鼠血脂代謝水平[8]，RXR活性的增強(qiáng)可以顯著抑制高糖誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激反應(yīng)對人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)的損傷[9]。

阿托伐他汀及RXR激活均能改善血脂代謝、抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)，降低動脈粥樣硬化的形成。我們推測二者發(fā)揮抗動脈粥樣硬化過程可能存在某種聯(lián)系。本研究將探討阿托伐他汀對鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)誘導(dǎo)糖尿病高脂喂養(yǎng)載脂蛋白E敲除(apolipoprotein E knockout,ApoE-/-)小鼠動脈粥樣硬化的影響、機(jī)制及RXRα的介導(dǎo)效應(yīng)。

材 料 和 方 法

1 材料和試劑

STZ、2’,7’-dichlorodihydro-fluoresceindiacetate(H2-DCFDA)和dihydroethidium (DHE)購自Sigma；ROS檢測試劑盒購自南京建成生物工程研究所；小干擾RNA (siRNA) 轉(zhuǎn)染試劑盒(Trasspass R2 transfection reagent)購自New England BioLab；脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑(X-treme GENE HP DNA transfection reagent)購自Roche；Protease Inhibitor Cocktail試劑盒購自Pierce；鼠抗人β-actin單克隆抗體、鼠抗人gp91phox多克隆抗體及HRP標(biāo)記Ⅱ抗購自Abcam。

2 動物和分組

8周齡SPF級雄性ApoE-/-小鼠及SPF級C57BL/6小鼠體重(23±2) g，購于北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部，均在相同的條件下飼養(yǎng)[恒溫(22±2) ℃，恒濕(55±5)%，人工光照明暗各12 h/d，24 h自由取食和飲水]。高脂飼料配方：膽固醇1%、脂肪5%、蛋黃粉5%、膽酸鈉0.1%，所有飼料由上海斯萊克公司提供。高脂喂養(yǎng)34只ApoE-/-小鼠隨機(jī)分為3組，其中2組ApoE-/-小鼠給予腹腔注射STZ(100 mg/kg)。實驗動物共分為4組：C57組8只；ApoE-/-組10只；STZ-ApoE-/-組12只；STZ-ApoE-/-+Atorv(10 mg·kg-1·d-1)組12只。將藥物溶于蒸餾水中，灌胃法給藥，每天1次，共3個月，非給藥組均用等量蒸餾水灌胃，每天1次。

3 STZ腹腔注射法構(gòu)建糖尿病動物模型

STZ配制: 枸櫞酸緩沖液 (pH 4.4) 10 mL加100 mg STZ充分溶解(STZ濃度為10 g/L),于腹腔注射STZ前動物禁食12 h，注射量為0.1 mL/10g體重小鼠，注射STZ后給予自由飲水取食，3 d后測定小鼠空腹血糖，血糖水平達(dá)到11.2 mmol/L及以上小鼠用于實驗。

4 方法

4.1血清及胸主動脈勻漿ROS水平測定 摘取小鼠眼球取血，3 500 r/min 離心10 min，取血清于EP管中-80 ℃保存待測，血清檢測需生理鹽水稀釋5倍后進(jìn)行。取胸主動脈段 (長度為0.5 cm)加0.5 mL生理鹽水于勻漿器中勻漿2 min，500 r/min離心5 min，取上清于EP管中-80 ℃保存待測。采用Fenton反應(yīng)及Griess顯色測定血清及胸主動脈勻漿液ROS水平 (測量步驟根據(jù)說明書)，以每mL血清或勻漿上清液37 ℃ 1 min H2O2濃度下降 1 mmol/L為ROS 1 U。

4.2HE染色步驟 取約0.5 cm胸主動脈PBS沖洗，4%甲醛固定24 h，脫水石蠟包埋切片。常規(guī)HE染色，中性樹脂封片，血管內(nèi)斑塊面積采用自動成像分析軟件系統(tǒng) (Olympus) 分析，每只動物取8張切片計算斑塊面積平均值。

4.3gp91phox蛋白表達(dá)檢測 小鼠胸主動脈總蛋白及細(xì)胞總蛋白抽提后備用。取15 μg蛋白提取液于10% SDS-PAGE電泳分離、轉(zhuǎn)膜，5%脫脂奶粉/TBST (10 mmol/L Tris·HCl, 150 mmol/L NaCl, 0.1% Tween, pH 7.2)室溫30 min，加gp91phox抗體(1∶500)4 ℃過夜，TBST漂洗3×5 min，加HRP標(biāo)記Ⅱ抗(1∶2 000)，37 ℃孵育1.5 h，TBST漂洗3×5 min后曝光。gp91phox與β-actin蛋白吸光率值比值作為gp91phox相對含量。

4.4HUVECs的培養(yǎng) 參照J(rèn)affe等[10]的方法。無菌條件下取新生兒臍帶約15 cm， PBS 沖洗臍靜脈2～3次；向臍靜脈內(nèi)注入約10 mL 0.1% I型膠原酶，37 ℃、15～20 min，用M199 培養(yǎng)液沖洗3～4次，1 000 r/min離心10 min；棄上清，加入含20% FBS 的M199 培養(yǎng)基，置37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱24 h,更換培養(yǎng)基；鏡下觀察，待細(xì)胞長至80% ～ 90%匯合時行1∶2傳代，取3 ～5代細(xì)胞進(jìn)行實驗。

4.5RXRαsiRNA和質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 用無菌雙蒸水稀釋合成的RXRαsiRNA (正義鏈5’-CCUUAUUUCUGUUACUACU-3’，反義鏈5’-AGUAGUAACAGAAAUAAGG-3’)及對照siRNA序列(scrambled) (正義鏈5’-UUGUCCGAACGUGUCACGUTT-3’，反義鏈5’-ACGUGACACGU-UCGGAGAATT-3’)，終濃度至50 μmol/L，取2.5 μL Trasspass R2 transfection solution A加到1.2 mL Opti-MEM中，混勻；將5 μL solution B加入A液體，混勻；吸取0.6 μLRXRαsiRNA加入上述稀釋液，混勻，室溫放置20 min；轉(zhuǎn)染前(HUVECs接種于6孔培養(yǎng)板，細(xì)胞生長至40%～60%匯合)更換無血清的Opti-MEM漂洗2次，加入轉(zhuǎn)染混合液，混勻；置于37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2～4 h，每孔再加入1 mL含有10% FBS的Opti-MEM 24 h更換20% FBS的Opti-MEM培養(yǎng)液，置于培養(yǎng)箱中孵育進(jìn)行后續(xù)干預(yù)。Western blotting檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞內(nèi)RXRα表達(dá)水平。

4.6流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)ROS水平 于待測細(xì)胞中加入H2-DCFDA (10 μmol/L)，37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱2 h，棄培養(yǎng)液，PBS漂洗細(xì)胞2次，加1 mL 0.1%胰酶-EDTA，迅速棄除，待細(xì)胞變圓并少量脫落加入完全培養(yǎng)液l.5 mL，反復(fù)吹打并制成細(xì)胞懸液， 1 000 r/min離心5 min，棄上清，每管內(nèi)加入PBS 0.5 mL，重懸細(xì)胞，波長525 nm進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)檢測，每次采用復(fù)管檢測，共進(jìn)行3～4次獨(dú)立檢測計算均值進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。

4.7NADPH氧化酶活性的測定 將待測細(xì)胞用預(yù)溫的PBS洗滌細(xì)胞2次，每孔(6孔板)加入1 mL PBS，刮下細(xì)胞制成細(xì)胞懸液，4 ℃、4 000×g離心5 min，棄上清，每管內(nèi)加入100 μL預(yù)冷的PBS(含protease inhibitor cocktail)，快速凍融細(xì)胞4次， 12 000×g4 ℃離心10 min，取蛋白上清液待測；96孔不透光微孔板進(jìn)行檢測，每孔內(nèi)預(yù)加入含有1 mmol/L EGTA、150 mmol/L蔗糖、5 pmol/L lucigenin (電子接受體) 和100 μmol/L NADPH (反應(yīng)底物)的磷酸鹽緩沖液，而后每孔加入50 μL蛋白上清液，Oriton Ⅱ冷光儀進(jìn)行測定，每隔30 s測定1次樣本的光子發(fā)射量，連續(xù)測定30 min，計算均值， NADPH氧化酶活性表示方法為counts·min-1·ng-1蛋白，每次測定采用復(fù)管，重復(fù)3次。

5 統(tǒng)計學(xué)處理

數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)，采用統(tǒng)計軟件SPSS 13.0處理，多組間的比較采用單因素方差分析(One-way ANOVA)，組間比較使用最小顯著性差異(least significant difference，LSD)法檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

1 阿托伐他汀對STZ誘導(dǎo)的糖尿病ApoE-/-小鼠空腹血糖及血脂水平影響

ApoE-/-組與C57對照組空腹血糖水平無顯著差異。與ApoE-/-組相比，STZ-ApoE-/-組空腹血糖水平顯著增高 (P<0.01)。阿托伐他汀 (10 mg·kg-1·d-1) 治療對STZ誘導(dǎo)的糖尿病ApoE-/-小鼠空腹血糖水平無明顯影響，見表1。與C57組相比，ApoE-/-組血清TG、TC及LDL-C水平均顯著升高 (P<0.01)，HDL-C水平未見明顯改變； STZ-ApoE-/-組血清TC、LDL-C和HDL-C水平勻顯著高于ApoE-/-組，血清TG水平與ApoE-/-組相比無明顯差異；與STZ-ApoE-/-組相比，STZ-ApoE-/-+ Atorv組血清TG、TC、LDL-C和HDL-C水平無明顯差異,見表1。

表1 阿托伐他汀對STZ誘導(dǎo)糖尿病高脂飲食ApoE-/-小鼠的血脂、血糖水平的影響

2 阿托伐他汀對STZ誘導(dǎo)的糖尿病ApoE-/-小鼠血清及胸主動脈ROS水平的影響

ApoE-/-組小鼠血清及胸主動脈ROS水平顯著高于C57組，STZ誘導(dǎo)糖尿病后使ApoE-/-小鼠血清及胸主動脈ROS水平進(jìn)一步升高；與STZ-ApoE-/-組相比，STZ-ApoE-/-+ Atorv組血清及胸主動脈ROS水平明顯降低 (P<0.05)，見表2。

表2 阿托伐他汀對STZ誘導(dǎo)糖尿病高脂飲食喂養(yǎng)ApoE-/-小鼠血清及胸主動脈勻漿上清液ROS水平的影響

3 Western blotting觀察阿托伐他汀對STZ誘導(dǎo)的糖尿病ApoE-/-小鼠胸主動脈NADPH氧化酶亞基gp91phox蛋白水平的影響

與C57組小鼠相比，ApoE-/-組小鼠胸主動脈NADPH氧化酶亞基gp91phox蛋白水平顯著增加 (P<0.05)；STZ-ApoE-/-組小鼠胸主動脈gp91phox亞基的蛋白表達(dá)水平顯著高于ApoE-/-組(P<0.01)；阿托伐他汀顯著降低STZ-ApoE-/-小鼠胸主動脈gp91phox蛋白的表達(dá)(P<0.01)，見圖1。

Figure 1. The effects of atorvastatin on gp91phox expression in the thoracic aorta of STZ-induced diabetic ApoE-/- mice with fat-rich diet. 1: C57 group (n=8); 2: ApoE-/- group (n=10); 3: STZ-ApoE-/- group (n=12); 4: STZ-ApoE-/- +Atorv group (n=12).Mean±SD.**P<0.01 vs C57 group; #P<0.05 vs ApoE-/- group;△△P<0.01 vs STZ-ApoE-/- group.

4 阿托伐他汀對STZ誘導(dǎo)的ApoE-/-小鼠胸主動脈斑塊的影響

C57組小鼠胸主動脈內(nèi)膜光滑，未見到脂質(zhì)斑塊形成；ApoE-/-組小鼠可見內(nèi)膜粗糙及小斑塊形成；STZ-ApoE-/-組小鼠血管內(nèi)膜不規(guī)則并形成巨大斑塊，斑塊纖維帽薄，斑塊內(nèi)有空泡形成，斑塊外層有一薄纖維層，斑塊面積顯著大于ApoE-/-組(P<0.01)；STZ-ApoE-/-+Atorv組胸主動脈脂質(zhì)內(nèi)膜只見小斑塊形成，斑塊內(nèi)空腔小，可見到少量脂質(zhì)，斑塊有一厚纖維層，斑塊面積明顯小于STZ-ApoE-/-組 (P<0.05)，見圖2。

5 siRNA轉(zhuǎn)染對RXRα表達(dá)的影響

與非干預(yù)組對比，RXRαsiRNA 12.5 nmol/L干預(yù)明顯下調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞RXRα表達(dá)，RXRαsiRNA 25 nmol/L干預(yù)使內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)RXRα表達(dá)進(jìn)一步下調(diào)。RXRα質(zhì)粒轉(zhuǎn)染增加內(nèi)皮細(xì)胞RXRα表達(dá)，見圖3。

Figure 2. The effect of atorvastatin on plaque area of thoracic aorta in STZ-induced diabetic ApoE-/- mice with high-fat chow (HE staining,×40). 1: C57 group (n=8); 2: ApoE-/- group (n=10); 3: STZ-ApoE-/- group (n=12); 4: STZ-ApoE-/-+Atorv group (n=12).**P<0.01 vs C57 group；#P<0.05 vs ApoE-/- group；△P<0.05 vs STZ-ApoE-/- group.

6 阿托伐他汀抑制高糖環(huán)境下HUVECs NADPH氧化酶活性

與對照組相比，高糖組NADPH氧化酶活性明顯增加(P<0.05)；阿托伐他汀呈濃度 (10-8～10-6mol/L) 依賴性抑制高糖誘導(dǎo)的HUVECs中NADPH 氧化酶活性的增加，見圖4。

7 阿托伐他汀對高糖誘導(dǎo)的HUVECs中NADPH氧化酶亞基gp91phox表達(dá)的影響

與對照組相比，高糖組NADPH氧化酶亞基gp91phox表達(dá)水平顯著增加(P<0.05)，阿托伐他汀呈濃度 (10-8～10-6mol/L) 依賴性抑制高糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞gp91phox表達(dá)；與高糖組相比，阿托伐他汀(10-6mol/L)gp91phox蛋白水平明顯降低(P<0.05)，見圖5。

Figure 3. The effects of RXRα siRNA (A) and RXRα plasmid (B) on RXRα expression. Mean±SD.n=4.. **P<0.01 vs control (without treatment)；#P<0.05 vs RXRα siRNA (12.5 nmol/L).

Figure 4. The effects of atorvastatin on NADHP activity in high glucose-treated HUVECs. Mean±SD. n=4.*P<0.05 vs control (without treatment); #P<0.05 vs glucose (25 mmol/L).

Figure 5. The effects of atorvastatin on gp91phox expression in high glucose-treated HUVECs.Mean±SD. n=4. *P<0.05 vs control (without treatment); #P<0.05 vs glucose (25 mmol/L).

8 RXRα介導(dǎo)阿托伐他汀的抗氧化應(yīng)激效應(yīng)

將特異性的RXRα siRNA轉(zhuǎn)染進(jìn)HUVECs之后，阿托伐他汀(10-6mol/L)對高糖環(huán)境下ROS生成及NADPH氧化酶活性的抑制作用顯著減弱(P<0.05)，HUVECs轉(zhuǎn)染RXRα質(zhì)粒之后，高糖環(huán)境下阿托伐他汀對ROS及NADPH氧化酶活性抑制作用明顯加強(qiáng)(P<0.05)，見圖6。

討 論

本研究發(fā)現(xiàn)高脂喂養(yǎng)ApoE-/-小鼠出現(xiàn)血脂代謝異常，血清及胸主動脈ROS水平增加；鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的糖尿病高脂喂養(yǎng)ApoE-/-小鼠血脂水平進(jìn)一步升高，阿托伐他汀并沒有降低糖尿病高脂喂養(yǎng)ApoE-/-小鼠血脂、血糖水平，但可抑制血清及胸主動脈ROS水平，減少胸主動脈gp91phox表達(dá)，減輕胸主動脈脂質(zhì)斑塊的形成，說明阿托伐他汀抗糖尿病高脂喂養(yǎng)ApoE-/-小鼠動脈硬化可能與其抑制高糖高脂引起的氧化應(yīng)激有關(guān)。

動脈粥樣硬化不僅與血脂有關(guān)，與高糖引起的氧化應(yīng)激也有關(guān)。Shen等[11]研究發(fā)現(xiàn)：即使血脂水平無差異，糖尿病患者冠狀動脈粥樣硬化程度仍顯著升高。糖尿病患者血糖升高通過激活多種信號途徑使內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)NADPH 氧化酶活化和ROS生成增加, 從而對血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激損傷導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙, 這是糖尿病促進(jìn)動脈粥樣硬化等心血管并發(fā)癥形成和發(fā)展的重要機(jī)制[12]。我們前期研究發(fā)現(xiàn)在人血管內(nèi)皮細(xì)胞中，gp91phox是NADPH 氧化酶的重要亞基, 高糖環(huán)境下內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)gp91phox的表達(dá)水平顯著上調(diào)，通過轉(zhuǎn)染gp91phox特異性反義寡核苷酸降低gp91phox的表達(dá)后, 高糖環(huán)境下細(xì)胞內(nèi)ROS的生成顯著減少[10]。在本研究中，我們觀察到糖尿病高脂喂養(yǎng)ApoE-/-小鼠胸主動脈斑塊面積明顯高于單純高脂喂養(yǎng)ApoE-/-小鼠，ApoE-/-小鼠和STZ誘導(dǎo)的糖尿病ApoE-/-小鼠的胸主動脈組織中g(shù)p91phox表達(dá)明顯增高，血清及胸主動脈ROS水平也顯著增加，因此糖尿病增加血脂異常狀態(tài)下的氧化應(yīng)激作用可能是促進(jìn)動脈粥樣硬化的重要原因。

Figure 6. Atorvastatin reduced high glucose-induced ROS production (A) and NADHP activity (B) via RXRα.Mean±SD.n=3.*P<0.05 vs control (without treatment); #P<0.05 vs glucose (25 mmol/L); △P<0.05 vs glucose+atorvastatin+scrambled; ▲P<0.05 vs glucose+atorvastatin+liposome.

動脈內(nèi)皮細(xì)胞的損傷是脂質(zhì)沉積和粥樣斑塊形成的始動因素，冠狀動脈脂質(zhì)斑塊與內(nèi)皮功能障礙密切相關(guān)[13]。Jiang等[14]發(fā)現(xiàn)氧化應(yīng)激反應(yīng)可引起內(nèi)皮損傷，在高脂條件下動脈粥樣硬化發(fā)生率顯著增加。本研究觀察到高脂喂養(yǎng)ApoE-/-小鼠血脂顯著升高，ROS水平也顯著增加，說明高脂血癥可增加氧化應(yīng)激反應(yīng)。阿托伐他汀可顯著下調(diào)糖尿病ApoE-/-小鼠胸主動脈gp91phox的表達(dá)，減少血清及胸主動脈組織內(nèi)ROS的產(chǎn)生，抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)，不僅與我們前期體外實驗結(jié)果一致，而且在不影響血糖水平、改善血脂代謝的情況下產(chǎn)生了明顯的抗動脈粥樣硬化作用。在體證實了阿托伐他汀可以通過下調(diào)高糖環(huán)境下的NADPH氧化酶gp91phox亞基的表達(dá)，抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)，進(jìn)而可能通過減少內(nèi)皮細(xì)胞損傷，抑制動脈粥樣硬化產(chǎn)生，并且這一抗動脈粥樣硬化效應(yīng)不依賴于血脂水平改變。阿托伐他汀10 mg·kg-1·d-1干預(yù)沒有產(chǎn)生降血脂作用考慮與他汀劑量偏小及動物持續(xù)進(jìn)食高脂食物有關(guān)。

體外細(xì)胞研究觀察到，高糖環(huán)境下人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)ROS顯著增加，NADPH氧化酶活性及NADPH氧化酶gp91phox亞基表達(dá)均明顯升高；通過流式細(xì)胞術(shù)和熒光顯微鏡技術(shù)，我們發(fā)現(xiàn)阿托伐他汀能抑制高濃度葡萄糖刺激的ROS水平，弱化高糖誘導(dǎo)下內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的氧化應(yīng)激反應(yīng)。NADPH氧化酶在人血管內(nèi)皮細(xì)胞受高濃度葡萄糖刺激產(chǎn)生ROS的過程中發(fā)揮了重要作用，NADPH氧化酶發(fā)揮作用有賴于其在胞漿中的催化亞基gp91phox水平[15]。體外細(xì)胞實驗又觀察到阿托伐他汀抑制高糖誘導(dǎo)NADPH氧化酶gp91phox亞基表達(dá)，降低NADPH氧化酶活性，也說明阿托伐他汀抑制高糖條件下氧化應(yīng)激是通過降低NADPH氧化酶gp91phox亞基水平從而降低NADPH氧化酶活性。我們前期研究發(fā)現(xiàn)了RXRα可以抑制高糖對血管內(nèi)皮的氧化應(yīng)激損傷作用[16]；本研究中也觀察到RXRα siRNA干擾后，阿托伐他汀抗高糖氧化應(yīng)激作用減弱，RXRα質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后，阿托伐他汀抗氧化應(yīng)激加強(qiáng)，說明RXRα受體可調(diào)節(jié)阿托伐他汀抗氧化應(yīng)激作用，因此推測阿托他汀保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷可能是通過RXRα實現(xiàn)，從而起到抗動脈粥樣硬化作用。

總之，本研究發(fā)現(xiàn)阿托伐他汀可以在不改變STZ誘導(dǎo)的ApoE-/-小鼠血脂代謝情況下抑制動脈粥樣硬化斑塊形成。這一過程可能是通過下調(diào)NADPH氧化酶亞基gp91phox表達(dá)，降低NADPH氧化酶活性，抑制高脂喂養(yǎng)糖尿病APOE小鼠ROS水平，而產(chǎn)生抗動脈粥樣硬化作用，且這種作用可能是通過核受體RXRα介導(dǎo)的保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷實現(xiàn)的。

[參 考 文 獻(xiàn)]

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