張金艷 ，李貽奎 ，黃 穎 ，趙 樂 ，伍 軍 ，周勁松

(1．中國中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所·北京市中藥藥理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100091； 2．中國中醫(yī)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，北京 100700； 3．廣州市香雪制藥股份有限公司，廣東 廣州 510663）

雙龍保心方來源于臨床經(jīng)驗(yàn)方中的雙龍方，雙龍方由人參和丹參兩味中藥組方，丹參活血化瘀，人參補(bǔ)氣養(yǎng)血，兩者協(xié)同共奏益氣活血之功效，主治胸痹（氣虛血瘀型），適用于心絞痛和心肌梗死等冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(簡稱冠心病)[1]。從20世紀(jì)80年代起，開始對原雙龍方組方、配伍比例和提取工藝的優(yōu)化進(jìn)行研究[2－5]。經(jīng)長期、大量對比精選，最終確定了仍由丹參和人參組方，采用最佳配伍比例和最佳制備工藝的雙龍保心方，即原雙龍方的精制方。本研究中通過試驗(yàn)驗(yàn)證雙龍保心方對大鼠急性心肌梗死的治療作用，并明確其藥物配伍優(yōu)勢，為其后續(xù)的新藥開發(fā)提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 動物、試藥及儀器

動物：健康 Wistar大鼠，雄性，體重 200～220 g，由北京華阜康科技股份有限公司提供，許可證編號為SCXK京2009－0007。

試藥：雙龍保心方，黃褐色粉末，每1 g折合人參和丹參生藥共2．741 g，批號為201007003。鹽酸地爾硫 （天津田邊制藥有限公司，批號為 1102006）；氯化硝基四氮唑藍(lán)（N－BT，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號為F20050421）；水合氯醛（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號為 T20050609）；肌酸激酶（CK）試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司，批號為 1107401），乳酸脫氫酶（LDH）試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司，批號為100311），超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號為20110524）；丙二醛（MDA）試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號為20110523）。

儀器：紛騰V7掃描儀（中晶科技）；DT－2000型電子天平（美國雙杰兄弟有限公司）；MPIDS－500型多媒體彩色病理圖像分析系統(tǒng)（北京空海公司）；RT－9600型半自動生化儀（雷杜生命科學(xué)股份有限公司）。

1．2 方法

動物模型制備：大鼠按10 mL／kg腹腔注射3．5%水合氯醛麻醉，仰臥固定。于大鼠左側(cè)第4，5肋間切口，打開胸腔，撕開心包，輕壓胸廓擠出心臟，用0號手術(shù)線于左心耳下2 mm處結(jié)扎冠狀動脈左前降支，立即將心臟放回胸腔，關(guān)閉切口，縫合皮膚。假手術(shù)動物只穿線不結(jié)扎，其余操作均同模型動物。

分組及給藥：造模成功大鼠，按體重分層隨機(jī)分為6組，每組11～15只，即假手術(shù)組、模型組、鹽酸地爾硫 8．1 mg／kg組、雙龍保心方生藥 5．0 g／kg組、雙龍保心方生藥2．5 g／kg組、雙龍保心方生藥 1．25 g／kg組。動物于造模后 10 min，按 10 mL／kg十二指腸一次性給藥，假手術(shù)組和模型組給予等體積的蒸餾水。

指標(biāo)檢測：大鼠處死前腹主動脈取血2 mL，常溫靜置大約30 min，以3 000 r／m的速率常溫離心 10 min，制得血清。按試劑盒說明書分別用半自動生化分析儀測定CK和LDH水平，用酶標(biāo)儀測定并計算 MDA和SOD水平。造模后4 h，立即取出心臟，用生理鹽水沖洗心腔殘留的血液，用濾紙吸干多余液體后稱重；自結(jié)扎線下平行冠狀動脈溝均勻地將心室部分切成等厚5片，分別稱重后置 0．2%硝基四氮唑藍(lán)染液（N－BT）中，常溫避光染色2～3 min；用掃描儀分別掃描5片心肌的正、反面，獲得掃描圖像，用多媒體彩色病理圖像分析系統(tǒng)測量每片心肌雙側(cè)的梗死區(qū)（N－BT非染色區(qū)）和非梗死區(qū)（N－BT染色區(qū)）面積，計算心室肌總面積、梗死區(qū)總面積及梗死區(qū)面積占心室面積和全心面積的百分比。

1．3 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

結(jié)果見表 1?？梢?，與假手術(shù)組比較，模型組血清 SOD和MDA無明顯變化，血清CK和LDH水平有明顯升高趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義；與模型組比較，雙龍保心方高、中、低劑量組的血清LDH水平有明顯降低趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義；各給藥組血清CK，SOD，MDA水平與模型組比較，差異也無統(tǒng)計學(xué)意義。與假手術(shù)組比較，模型組心肌梗死面積顯著增大（P＜0．01）；與模型組比較，地爾硫 組及雙龍保心方高、中劑量組的心肌梗死面積顯著降低（P ＜0．05）。

表1 雙龍保心方對急性心肌梗死模型大鼠血清CK，LDH，SDD，MDA水平及心肌梗死面積的影響()

表1 雙龍保心方對急性心肌梗死模型大鼠血清CK，LDH，SDD，MDA水平及心肌梗死面積的影響()

注：與模型對照組比較， P ＜0．05，△ P ＜0．01。

組別假手術(shù)組模型組鹽酸地爾硫 組雙龍保心方高劑量組雙龍保心方中劑量組雙龍保心方低劑量組劑量（生藥，g ／kg）－ －0．008 1 5．0 2．5 1．25大鼠（只）14 16 14 13 11 11 CK（U ／L）529．8 ± 331．6 627．1 ± 335．8 674．8 ± 161．1 660．6 ± 241．2 770．0 ± 317．9 778．1 ± 183．5 LDH（U ／L）302．7 ± 126．1 746．5 ± 916．8 512．4 ± 157．1 528．5 ± 246．64 544．2 ± 172．7 495．8 ± 206．0 SOD（U ／L）169．1 ± 41．7 176．7 ± 41．0 157．8 ± 45．3 168．2 ± 44．1 150．5 ± 45．5 174．8 ± 42．2 MDA（ mol／L）30．76 ± 10．52 26．89 ± 5．50 29．72 ± 4．94 27．85 ± 5．70 31．04 ± 7．61 30．41 ± 3．24 μ心梗／心室(%)0．59 ± 0．72 25．93 ± 11．14 17．94 ± 9．37 13．98 ± 6．41 16．70 ± 10．70 20．06 ± 9．77△△△△心梗／全心(%)0．49 ± 0．58 19．07 ± 8．26 12．59 ± 6．68 10．67 ± 5．33 12．40 ± 8．32 14．14 ± 6．28

3 討論

急性心肌梗死屬“胸痹”“心痛”“真心病”等范疇。其發(fā)病機(jī)制正如《素問·痹論》所述：“心痹者，脈不通”“痹……在于脈則血凝而不流?！庇捎谛闹餮}，心氣虛弱則無力鼓動心血之運(yùn)行，致使血澀不通而成真心痛[6]。因此，益氣活血以恢復(fù)心血運(yùn)行為其主要治法[7－10]。雙龍保心方中，丹參活血化瘀，人參補(bǔ)氣養(yǎng)血，兩者協(xié)同共奏益氣活血之功效。本研究結(jié)果表明，雙龍保心方對大鼠急性心肌梗死有顯著保護(hù)作用，該結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了益氣活血療法在治療冠心病中的優(yōu)勢。

以往的研究認(rèn)為，心肌細(xì)胞在缺血、缺氧和受損時，產(chǎn)生各種氧自由基，對細(xì)胞膜及生物大分子進(jìn)行過氧化反應(yīng)，破壞細(xì)胞膜正常結(jié)構(gòu)，心肌細(xì)胞CK，LDH等心肌酶隨著細(xì)胞膜的破壞漏出細(xì)胞外，膜脂質(zhì)分子的過氧化物MDA大量產(chǎn)生，表現(xiàn)出血液中CK，LDH，MDA水平的升高；與此同時，心肌細(xì)胞抗氧化能力減弱，表現(xiàn)出清除氧自由基的SOD水平下降。而本研究結(jié)果卻顯示，所有受試組的血清CK，LDH，SOD，MDA水平與模型組比較，均無顯著差異；即使是模型組與假手術(shù)組比較，也未能在上述血液學(xué)指標(biāo)上反映出顯著性差異。這是由于在試驗(yàn)過程中，假手術(shù)組也接受了開胸、斷肋和心肌穿線操作，這些外科損傷可能同樣導(dǎo)致了上述血液學(xué)指標(biāo)的變化，而模型組和假手術(shù)組的區(qū)別僅在于冠脈結(jié)扎與否，該區(qū)別未能從上述血液指標(biāo)上反映出來。故認(rèn)為上述血液學(xué)指標(biāo)只能間接反應(yīng)心肌缺血和受損程度，其測定具有一定的局限性和不穩(wěn)定性，而心肌梗死面積仍然是動物試驗(yàn)中反映心肌缺血程度最直觀、最重要的指標(biāo)。

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