趙海珍 曹坤

【摘要】目的 建立紅曲保健食品中洛伐他汀的含量測定方法。方法 采用Hypersil C18（4.6×250mm，5μm），以甲醇-水-磷酸（75：25：0.2）為流動(dòng)相，流速1.0mL/min，檢測波長238nm，進(jìn)樣10μL。結(jié)果 線性：洛伐他汀在0.205～1.845μg濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系；回收率：平均回收率為99.89%，RSD為1.05%。結(jié)論 本法簡便、快速、準(zhǔn)確，可作為紅曲保健食品中洛伐他汀的質(zhì)控方法。

【關(guān)鍵詞】HPLC；恩替卡韋分散片；含量測定

紅曲是以秈米為原料，采用現(xiàn)代生物工程技術(shù)分離出優(yōu)質(zhì)的紅曲霉菌（monascuspurpureus）經(jīng)液體深層發(fā)酵精制而成的一種純天然、安全性高、有益于人體健康的食品添加劑。紅曲內(nèi)含有多種他汀類成分（最主在的存在形式為酸式和內(nèi)酯式），輔助降血脂功效顯著，因此而被廣泛的應(yīng)用于保健食品領(lǐng)域，目前，國內(nèi)生產(chǎn)企業(yè)大多采用《保健食品功效成分及衛(wèi)生檢驗(yàn)規(guī)范》中的方法測定洛伐他汀含量，原理是將不同存在形式的洛伐他汀經(jīng)預(yù)處理轉(zhuǎn)化為內(nèi)酯式，采用內(nèi)酯式對(duì)照品定量，從而控制保健食品質(zhì)量。然而，經(jīng)我中心研究表明：該方法萃取程序受樣品狀態(tài)影響嚴(yán)重，并不能完全保證紅曲中的洛伐他汀成分完全被檢出而經(jīng)常會(huì)造成檢驗(yàn)結(jié)果偏低，影響實(shí)驗(yàn)人員正確的結(jié)果判定，本文采用堿化預(yù)處理方法，將不同存在形式的洛伐他汀轉(zhuǎn)化為酸式結(jié)構(gòu)，再經(jīng)HPLC法測定含量，樣品處理方法簡便，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器 Waters515型高效液相色譜儀，Waters2487紫外檢測器。

1.1.2 試劑 甲醇為色譜純，水為超純水，磷酸為色譜純，氫氧化鈉為分析純，洛伐他汀對(duì)照品（購自中國藥品生物制品檢定所），紅曲保健食品制劑均為本廠自制。

2 試驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Hypersil C18（4.6×250mm，5μm），以甲醇-水-磷酸（75：25：0.2）為流動(dòng)相，流速1.0mL/min，檢測波長238nm，進(jìn)樣10μL。理論塔板數(shù)按洛伐他汀峰計(jì)算應(yīng)不低于3000，洛伐他汀峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。

2.2 溶液的配制

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備 準(zhǔn)確稱取洛伐他汀標(biāo)準(zhǔn)品50mg，加入流動(dòng)相并定容至100mL。此溶液每mL含0.5mg洛伐他汀。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)使用液的制備 精密量取上述標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1mL用0.2mol/L氫氧化鈉溶液定容至5mL，50℃條件下超聲1.5小時(shí)，放置至室溫后靜置1小時(shí)。此溶液每mL含100μg洛伐他汀。

2.2.2 供試品溶液制備 取樣品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于洛伐他汀50mg）于100 mL量瓶中，加入60mL75%乙醇搖勻，室溫下超聲50min，加入75%乙醇定容至刻度，冷卻至室溫后以3000r/min的旋轉(zhuǎn)速度離心10min，取上清液，用0.45μm微孔濾膜過濾，精密吸取續(xù)濾液1mL置5mL量瓶中，用0.2mol/L氫氧化鈉溶液定容，50℃條件下超聲1.5小時(shí)，放置至室溫后靜置1小時(shí)。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專屬性試驗(yàn)

按處方配制不含紅曲的空白片，依法測定，結(jié)果在洛伐他汀出峰處無吸收，故空白輔料不干擾含量測定。

2.3.2 線性關(guān)系

精密稱取洛伐他汀對(duì)照品0.1025g，依法配制標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、標(biāo)準(zhǔn)使用液，濃度為205μg/mL。精密量取1.0、3.0、5.0、7.0、9.0mL，分別置10mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻；精密量取10μL分別注入高效液相色譜儀，以峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)照品濃度為模坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明，在0.205～1.845μg范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，得回歸方程：A=4.902×105C+5.882×104 r=0.9999。

2.3.3 精密度試驗(yàn)

取線性關(guān)系試驗(yàn)項(xiàng)下（濃度為102.5μg/mL）的對(duì)照品溶液，精密量取10μL注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，連續(xù)進(jìn)樣6次RSD%為0.29%，方法精密度良好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取含量測定線性關(guān)系試驗(yàn)項(xiàng)下（濃度為102.5μg/mL）的供試品溶液，分別于0、1、2、3小時(shí)精密量取10μL注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果RSD值小于2%，表明含量測定溶液在3小時(shí)內(nèi)測定穩(wěn)定。

2.3.5 回收率試驗(yàn)

取相當(dāng)于20片的主藥量與輔料量，精密稱定，混合均勻，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于洛伐他汀40mg、50mg、60mg）各三份，分別置100 mL量瓶中，加入60mL75%乙醇搖勻，室溫下超聲50min，加入75%乙醇定容至刻度，冷卻至室溫后以3000r/min的旋轉(zhuǎn)速度離心10min，取上清液，用0.45μm微孔濾膜過濾，精密吸取續(xù)濾液1mL置5mL量瓶中，用0.2mol/L氫氧化鈉溶液定容，50℃條件下超聲1.5小時(shí)，放置至室溫后靜置1小時(shí)。取線性關(guān)系試驗(yàn)項(xiàng)下（濃度為102.5μg/mL）的供試品溶液，作為對(duì)照品溶液。精密量取上述溶液各10μL分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果：平均回收率為99.88%，RSD為1.05%。本方法準(zhǔn)確度良好。

3 討論

紅曲中洛伐他汀存在形式多樣，其主要為酸式和內(nèi)酯式結(jié)構(gòu)，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道：洛伐他汀含量測定方法有3種：第一種是分別測一內(nèi)酯和開環(huán)形式，但有機(jī)溶劑提取后除了內(nèi)酯與開環(huán)形式外，尚含有有機(jī)溶劑和洛伐他汀的酯化形式，檢測結(jié)果不準(zhǔn)確；第二種是酯化處理將酯式形式轉(zhuǎn)化為內(nèi)酯形式，測定其總量，而實(shí)際上很難轉(zhuǎn)化完全；第三種是堿化處理將內(nèi)酯式轉(zhuǎn)化為酸式形式，測定其總量，因內(nèi)酯式僅在純甲醇中較為穩(wěn)定，在水-醇溶劑中酸式形式更穩(wěn)定。本文采用第三種方法對(duì)紅曲保健食品進(jìn)行含量測定，回收率接近100，方法科學(xué)、準(zhǔn)確、可靠。并且，我中心通過對(duì)含量測定堿化條件的充分篩選，使樣品預(yù)處理過程簡便快捷。

參考文獻(xiàn)

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