張永康 （寧夏職業(yè)技術(shù)學(xué)院生命科學(xué)技術(shù)系 寧夏 銀川 750021）

影響雞新城疫HI抗體檢測(cè)的因素分析

張永康 （寧夏職業(yè)技術(shù)學(xué)院生命科學(xué)技術(shù)系 寧夏 銀川 750021）

新城疫也稱(chēng)亞洲雞瘟或偽雞瘟，是由病毒引起的雞和火雞急性高度接觸性傳染病，常呈敗血癥經(jīng)過(guò)。主要特征是呼吸困難、下痢、神經(jīng)紊亂、黏膜和漿膜出血，是嚴(yán)重危害養(yǎng)雞業(yè)的重要疾病之一[1]。紅細(xì)胞血凝抑制試驗(yàn)( HI)是監(jiān)測(cè)ND 免疫狀態(tài)的一種簡(jiǎn)便、快速的血清學(xué)方法, 但影響因素較多。為提高新城疫HI抗體測(cè)定的準(zhǔn)確性，現(xiàn)就雞新城疫抗體監(jiān)測(cè)中幾個(gè)應(yīng)注意的問(wèn)題提出來(lái)和大家一起探討。

1 溫度的影響

監(jiān)測(cè)時(shí)如若室溫高時(shí)，HA、HI試驗(yàn)反應(yīng)速度加快，同時(shí)紅細(xì)胞的解凝時(shí)間也變短；當(dāng)室溫低時(shí)可出現(xiàn)相反的結(jié)果。當(dāng)室溫過(guò)高時(shí)配制的各種試劑應(yīng)及時(shí)放置于4℃冰箱中保存，使用時(shí)再取出來(lái)。另外由于反應(yīng)的速度加快，因此判定的時(shí)間也要相應(yīng)的提前。不可在接近解凝時(shí)才判定，否則測(cè)出的HI 抗體水平會(huì)升高。當(dāng)冬季溫度低時(shí)可延長(zhǎng)HA 和HI 的反應(yīng)時(shí)間，或者把反應(yīng)板置37℃培養(yǎng)箱中，可解決溫度過(guò)低造成的影響。

2 抗原的影響

當(dāng)抗原比較陳舊時(shí)，抗原對(duì)紅細(xì)胞的凝集能力下降，凝集后解凝時(shí)間也變短，因此一般要用新的抗原。

3 雞紅細(xì)胞的濃度的影響

有的使用1%的紅細(xì)胞懸液，有的使用0.5%的紅細(xì)胞懸液。不管是1%或0.5%的紅細(xì)胞懸液，都要配置準(zhǔn)確。相對(duì)紅血球濃度大時(shí)，測(cè)出的HI值相對(duì)較小，而紅血球濃度稀時(shí)，則測(cè)出的HI值相對(duì)較大一些。在新城疫HI監(jiān)測(cè)中，紅細(xì)胞的濃度要求為1%或0.5%。離心時(shí)要控制在一定的時(shí)間和一定的離心速度，這樣配出的紅細(xì)胞懸液才能準(zhǔn)確。另外，在使用前必須把紅細(xì)胞混勻，并不時(shí)的搖動(dòng)。

4 血清的影響

被檢血清如有陳舊、溶血、變質(zhì)現(xiàn)象，就會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，使結(jié)果出現(xiàn)偏差。被檢血清要求足量、新鮮、色清、無(wú)雜質(zhì)、無(wú)溶血現(xiàn)象。置清潔無(wú)菌的血容器, 操作時(shí)每批樣品用生理鹽水和標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清作陽(yáng)性和陰性對(duì)照, 防止判定偏差。目的是為了讀取HI 抗體滴度時(shí), 時(shí)間上有一個(gè)較正確的判定依據(jù)。即對(duì)照孔的紅細(xì)胞達(dá)到完全凝集時(shí)，進(jìn)行判讀。

5 反應(yīng)板清潔程度的影響

反應(yīng)板用的時(shí)間長(zhǎng)了，洗刷不及時(shí)或洗刷不徹底，有時(shí)使反應(yīng)前后跳孔，無(wú)法判定結(jié)果，因此洗刷反應(yīng)板時(shí)一定要細(xì)心。使用前要檢查一下反應(yīng)板是否清潔。保持反應(yīng)板清潔的方法是：在試驗(yàn)做完后，要及時(shí)用水進(jìn)行沖洗和甩干，反復(fù)兩次甩干后，V型孔的孔底無(wú)任何沉積物，方可干燥后使用，干燥時(shí)最好翻轉(zhuǎn)反應(yīng)板以保持V型孔底無(wú)沉積物。使用數(shù)次的反應(yīng)板應(yīng)用蒸餾水浸泡過(guò)夜。對(duì)臟的反應(yīng)板應(yīng)先用1%鹽酸處理，再用1%火堿處理，最后用自來(lái)水漂洗，用蒸餾水浸泡過(guò)夜后烘干備用。

6 移液器的影響

在使用過(guò)程中，移液器常引起移液量的不準(zhǔn)確，有時(shí)吸取的量不夠，有時(shí)排液量不充分，都影響監(jiān)測(cè)的結(jié)果。移液器在使用時(shí)要注意量的準(zhǔn)確，移液器嘴要緊，使用前在液體中反復(fù)吸排，吸排量相等，吸嘴內(nèi)無(wú)液體滯留者為好用的，若吸頭內(nèi)有液體滯留，則移液器不準(zhǔn)。移液器用完后一定要回到松弛狀態(tài)，即擰到最大刻度。移液器不準(zhǔn)時(shí)，可以維修，修不好就淘汰。

7 操作方法的影響

在操作過(guò)沖中常常因?yàn)槿藶橐蛩卦斐山Y(jié)果不準(zhǔn)確的現(xiàn)象，所以在操作中要盡量避免人為因素的影響。在稀釋血清時(shí)，要把移液器內(nèi)的液體排空后，再吸出 25μl，排至下一孔去稀釋?zhuān)来祟?lèi)推。若吸嘴沒(méi)排空就稀釋下去，這樣可能使所測(cè) HI抗體變高； 在移去液體時(shí)，移液器盡量呈垂直狀態(tài)；在倍比稀釋時(shí)，盡量使每孔稀釋的次數(shù)一致，并且每次稀釋次數(shù)至少 3次以上。HI值讀取在規(guī)定作用時(shí)間后進(jìn)行， 紅細(xì)胞對(duì)照孔內(nèi)紅細(xì)胞應(yīng)完全沉淀， 抗原對(duì)照孔紅細(xì)胞應(yīng)完全凝集，陽(yáng)性血清對(duì)照孔紅細(xì)胞應(yīng)完全沉淀( 即完全抑制凝集)，樣品檢測(cè)以完全凝集抑制為判定界限，作為判定標(biāo)準(zhǔn)。

總之，隨著養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展，雞病會(huì)越來(lái)越復(fù)雜，但雞新城疫在未來(lái)一段時(shí)間內(nèi)仍是危害養(yǎng)雞業(yè)發(fā)展的重要疫病，因些準(zhǔn)確地進(jìn)行雞新城疫HI抗體的監(jiān)測(cè)顯得非常重要，也會(huì)越來(lái)越普及，因此對(duì)影響雞新城疫HI抗體監(jiān)測(cè)的因素應(yīng)給予足夠的重視，以確保監(jiān)測(cè)準(zhǔn)確，有力地指導(dǎo)生產(chǎn)，減少雞新城疫對(duì)養(yǎng)雞業(yè)的損失。

S858.31

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1007-1733(2014)06-0063-01

2014–03–31）