周麗娟，韓崇旭

(蘇北人民醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)檢測(cè)中心，江蘇 揚(yáng)州225001)

血清低密度脂蛋白 (Low Density Lipoprotein,LDL)顆粒在大小、密度和脂質(zhì)組成上具有異質(zhì)性。根據(jù)顆粒相對(duì)大小，LDL一般分為A、B兩型，A型為較大顆粒，是大而輕低密度脂蛋白(large,buoyant LDL,lLDL)，顆粒較小的B型即小而密低密度脂蛋白(small,dense low density lipoprotein,sdLDL)，是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生的強(qiáng)危險(xiǎn)因素，與冠心病(coronary heart disease,CHD)的形成密切相關(guān)[1-4]。目前，sdLDL作為冠心病危險(xiǎn)性指標(biāo)的研究較少，為了解CHD患者LDL亞組分的分布情況，本文探討血漿sdLDL水平與CHD及其它危險(xiǎn)因素的關(guān)系，旨在為CHD的防治提供新依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2011年1月至2011年6月在我院住院CHD患者50例(冠狀動(dòng)脈造影確診)。對(duì)照組：經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影排除冠心病的住院病人30例；選擇性別、年齡匹配并排除心腦、肝、腎等疾病的健康人30例。

1.2 方法

1.2 .1密度梯度超速離心法制備LDL亞型 取20份正常人混合血清制備LDL亞型，用作2%~16%非變性梯度凝膠電泳的參照物。超速離心制備sdLDL(d=1.044～1.063)，空腹 12h 采血，以 3000 r/min離心10 min，分離得到血清(超速離心機(jī)為美國 Beckman Coulter公司，OptimaTML-90K)。KBr調(diào)整血清密度為 d=1.044，50，000 r/min離心 18h。離心后除去上層淡黃色脂蛋白與無色中間層，用KBr調(diào)整下層液密度為 d=1.063，50，000 r/min 離心 18 h， 用 pH7.4、0.15mol/L NaCl(含 0.3 mmol/L EDTA-Na2)將上層淡黃色脂蛋白透析后備用。相同的方法制備大而輕的LDL(lLDL,密度為1.020~1.044 kg/L)。透析，濃縮，負(fù)染經(jīng)過多媒體彩色病理圖像分析系統(tǒng)作圖像分析處理，電子顯微鏡(日本JEOL 公司，JEM-100S)測(cè)定 lLDL、sdLDL 顆粒平均直徑分別為26.3 nm和23.9 nm。

1.2 .2 空腹 12h后采血，0.5 mol/L EDTA-Na2抗凝，30分鐘內(nèi)以3000 r/min離心分離血漿。采用2%~16%非變性聚丙烯酰胺梯度膠電泳法[5](電泳儀為美國HOEFER，梯度發(fā)生器為 Hoefer SG500)。電泳緩沖液為pH 8.3的Tris-硼酸-EDTA緩沖液，加樣緩沖液為0.1%溴酚藍(lán)．蔗糖緩沖液，加樣50μl，預(yù)電泳施加125V電壓15min，電泳施加200V電壓16h，400V電壓4h，電泳過程在10℃的循環(huán)水浴中進(jìn)行。凝膠用油紅O染色24h，dH2O恢復(fù)。掃描時(shí)以超速離心法得到的sdLDL與lLDL確定兩組分在膠上的相應(yīng)位置，掃描并由波峰面積算出sdLDL占總的LDL的相對(duì)百分比含量?？偰懝檀?TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDLC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、用羅氏全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 計(jì)量資料比較用t檢驗(yàn)，率及例數(shù)分布用χ2檢驗(yàn)，多因素分析用多元逐步回歸和偏回歸分析，全部檢驗(yàn)用SPSS 11.5軟件運(yùn)行，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 冠脈造影陽性組和對(duì)照組血漿sdLDL變化，以sdLDL>50%為異常(表1)：與對(duì)照組比較，冠造陽性組sdLDL明顯升高(P<0.01)，與冠造陰性組比較：冠造陽性組sd LDL也明顯升高(P<0.01)。

表1 各組sdLDL(x±s)異常率比較

2.2 sdLDL與血脂水平的關(guān)系 根據(jù)2.1的結(jié)果將120份檢測(cè)樣本分為兩組：sdLDL異常組與正常組。如表2所示，sdLDL異常組比正常組TG、LDLC、apoB水平均顯著增高，HDL-C水平顯著降低。sdLDL正常組TC水平低于異常組但未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表 2)。

3 討論

sdLDL易被氧化，促使泡沫細(xì)胞形成，與CHD的發(fā)生、發(fā)展呈高度相關(guān)性[6]，Coresh等[7]認(rèn)為sdLDL常見于CHD發(fā)病前數(shù)年，與冠心病有明確的關(guān)系。檢測(cè)sdLDL-C有助于冠狀動(dòng)脈硬化心血管疾病的早期預(yù)測(cè)與治療過程中的療效觀察[8-10]。冠造陽性組血清sdLDL明顯高于冠造陰性組與對(duì)照組，與相關(guān)報(bào)道一致。

表2 sdLDL異常組與正常組血脂指標(biāo)(±s)

表2 sdLDL異常組與正常組血脂指標(biāo)(±s)

注：與正常組比較：**P<0.01，*P<0.05。

指標(biāo) 異常組(n=56) 正常組(n=54)TC(mmol/L)TG(mmol/L)HDL-C(mmol/L)LDL-C(mmol/L)apoB(g/L)4.56±1.05 1.52±0.53**1.27±0.34*2.68±0.47**0.98±0.28**4.48±0.86 0.98±0.35 1.40±0.24 2.36±0.51 0.74±0.21

既往報(bào)道，sdLDL 與 TG、HDL-C、apo-B 具有一定的相關(guān)性[11]。結(jié)果顯示，sdLDL異常組TG水平增高，HDL-C水平降低，均與正常組存在顯著差異，與 Rizzo等[12]報(bào)道高 sdLDL、高 TG、低 HDL-C為“動(dòng)脈粥樣硬化脂蛋白譜”一致。sdLDL致動(dòng)脈粥樣硬化作用較強(qiáng)的機(jī)制尚不清楚，可能與以下因素有關(guān)：顆粒小易透過動(dòng)脈壁；顆粒表面極性分子減少，與動(dòng)脈內(nèi)膜上蛋白聚糖親和力強(qiáng)；apoB等結(jié)構(gòu)改變，不易被受體識(shí)別，清除緩慢，滯留時(shí)間長(zhǎng)，進(jìn)入動(dòng)脈壁的機(jī)會(huì)多；顆粒表面保護(hù)層單薄，抗氧化成分少，易被氧化修飾等。

本文結(jié)果表明，sdLDL相對(duì)獨(dú)立于CHD其他危險(xiǎn)因素，其檢測(cè)作為了解冠心病患者脂蛋白代謝紊亂的新指標(biāo)，對(duì)評(píng)價(jià)冠心病的危險(xiǎn)因素、實(shí)現(xiàn)對(duì)冠心病的早期檢測(cè)預(yù)防及有效制定冠心病防治策略具有重大意義。

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