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(青島大學附屬醫(yī)院婦產科，山東 青島 266003)

目前卵巢上皮癌主要以手術和化療為主要治療手段。其化療失敗的最主要原因之一是耐藥性的產生，因此，提高腫瘤對化療藥物的敏感性對改善病人預后意義重大。細胞分化抑制因子1(Id1)是螺旋-環(huán)-螺旋(HLH)蛋白質家族的一員，其二聚體可抑制腫瘤細胞凋亡，促進增生，在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用[1]。近期研究顯示,Id1在內皮細胞腫瘤組織中存在過表達的現象[2]。哺乳動物的絲氨酸蛋白酶家族由同源性的不同結構域的絲氨酸蛋白酶類組成。HtrA1是第一個被發(fā)現的人類絲氨酸蛋白酶家族成員,對惡性組織具有抑制作用，與惡性腫瘤的演進相關[3]。本研究采用免疫組織化學方法檢測Id1和HtrA1在卵巢上皮癌組織中的表達，分析其與臨床病理參數的關系，探討這兩種因子與卵巢上皮癌發(fā)生發(fā)展及化療耐藥的關系。

1 資料與方法

1.1 標本來源

收集我院婦科2008年1月—2010年12月住院手術病例，其中卵巢上皮癌病人40例(均行腫瘤細胞減滅術，術后病理確診為卵巢漿液性腺癌),良性卵巢腫瘤病人10例(術后病理確診為卵巢漿液性囊腺瘤)及正常卵巢組織病人10例(因子宮肌瘤行全子宮加雙附件切除術病人，卵巢組織無異常)。卵巢上皮癌病人年齡27～77歲，平均年齡50.90歲，中位年齡51.50歲，其中≥50歲30例，<50歲10例；腫瘤直徑≥5 cm者23例，<5 cm者17例；術前CA125水平≥200 kU/L者32例，<200 kU/L者8例；術前有大量腹水者33例,無或少量腹水者7例；高、中分化15例，低分化25例；按FIGO(2000年)卵巢癌分期標準，Ⅰ～Ⅱ期17例，Ⅲ～Ⅳ期23例；淋巴結轉移陽性30例，淋巴結轉移陰性10例?；熀筮_到臨床完全緩解(CR)，持續(xù)>6個月者20例(敏感組)；化療后達到CR，持續(xù)<6個月，或化療期間最好療效為部分緩解、疾病穩(wěn)定或疾病進展者20例(耐藥組)。

1.2 Id1和HtrA1檢測方法

采用免疫組化SP法檢測標本中Id1和HtrA1的表達。Id1單抗購自北京博奧森生物技術有限公司，HtrA1單抗為美國Santa Cruz公司產品，SP試劑盒和DNA顯色試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。標本以3 μm厚切片，按照試劑盒說明書操作。以二者已知陽性切片作為陽性對照，以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作陰性對照。

1.3 結果判定

Id1大部分在胞核、部分在胞漿著色，HtrA1在胞漿著色。隨機選擇5個高倍視野，計數腫瘤細胞100個以上，根據陽性細胞數及染色強度判斷結果。以陽性細胞數<5%，計0分；5%～25%，計1分；26%～50%，計2分；51%～75%，計3分；>75%，計4分。染色強度不著色為0分，淺棕色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。將每張切片兩項分數相加，0分為陰性(-)，1～2分為弱陽性(+)，3～4分為中陽性()，5～6分為強陽性()。

1.4 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件對數據進行χ2檢驗和Spearman相關分析，檢驗水準α=0.05。

2 結 果

2.1 Id1和HtrA1在正常卵巢、卵巢良性腫瘤和卵巢上皮癌組織中的表達

卵巢上皮癌組織中Id1陽性表達率為77.5%，均顯著高于卵巢良性腫瘤組織的40.0%和正常卵巢組織的30.0%(χ2=5.357、8.295，P<0.05)。卵巢上皮癌組織中HtrA1的陽性表達率為22.5%，均顯著低于卵巢良性腫瘤組織的40.0%和正常卵巢組織的60.0%(χ2=4.372、5.357，P<0.05)。

2.2 化療耐藥組及敏感組Id1和HtrA1表達比較

Id1在耐藥組中的陽性表達率為95.0%，顯著高于敏感組的60.0%(χ2=5.914，P<0.05)；HtrA1在耐藥組的陽性表達率為5.0%,顯著低于敏感組的40.0%(χ2=14.824,P<0.01)。

2.3 Id1和HtrA1表達與卵巢上皮癌臨床病理特征的關系

Id1和HtrA1的表達與病人年齡、腫瘤大小、臨床分期和有無腹水等均無關(P>0.05)，而與術前CA125水平、病理分級和淋巴結轉移等有關(χ2=4.215～10.753，P<0.05)。見表1。

表1 Id1和HtrA1表達與卵巢上皮癌臨床病理特征的關系(例(χ/%))

2.4 卵巢上皮癌組織Id1和HtrA1表達相關性

在40例卵巢上皮癌組織中，Id1和HtrA1表達均陽性者12例，均陰性者6例，兩者表達無明顯相關性(r=-0.186，P>0.05)。

3 討 論

3.1 Id1與卵巢上皮癌的關系

Id1中的HLH結構區(qū)域能夠與bHLH蛋白結合，起到抑制細胞分化、調節(jié)細胞周期的作用，其分子作用機制復雜多樣。表皮生長因子受體(EGFR)為酪氨酸激酶Ⅰ家族成員。該受體能與胞漿中過度表達的表皮生長因子結合，使其受體酪氨酸殘基磷酸化，通過胞漿信號通路，促進細胞分化、血管增生，抑制細胞凋亡。有研究結果表明，Id1過表達促進EGFR表達上調，兩者呈正相關[4]。周慶全等[5]研究結果顯示，在胃癌組織中Id1與EGFR呈現高表達，并且這兩種因子呈正相關。誘導細胞凋亡是化療藥物抑制腫瘤生長的重要途徑之一，抑制細胞凋亡的Bcl-2、Rb、P53表達異常與腫瘤細胞耐藥密切相關。LING等[6]報道，用Id1-siRNA降低Id1蛋白表達水平后Bcl-2、JNK表達明顯降低，細胞對紫杉醇耐藥性降低，表明Id1是調節(jié)腫瘤細胞耐藥的一個重要靶點。

本文研究結果顯示，Id1在卵巢上皮癌組織中呈高表達，且腫瘤細胞分化程度越低，Id1的陽性表達率越高，與MAW等[7]的研究結果相一致。渠力平等[8]的研究顯示，Id1在宮頸癌組織中高表達，并且與宮頸癌組織分化程度呈正相關。本文研究結果也顯示，Id1表達與病人術前CA125水平、淋巴結轉移和病理分級等密切相關，而與病人年齡、臨床分期、腫瘤大小和有無腹水等無關，且在化療耐藥組中Id1的陽性表達率高于敏感組。表明Id1的表達可能與卵巢上皮癌的發(fā)生、發(fā)展有關，與卵巢上皮癌細胞化療耐藥相關。

3.2 HtrA1與卵巢上皮癌的關系

HtrA1為一種具有熱休克蛋白性質的膜絲氨酸蛋白酶，體內和體外試驗研究顯示，該因子與腫瘤細胞的凋亡、侵襲等有關，但其分子作用機制不詳。HE等[9]報道，HtrA1表達下調可促進EGFR表達，兩者呈負相關，但具體通路不明。CHIEN等[10]報道，HtrA1與紫杉醇、順鉑誘導的細胞凋亡有關，該因子在應激條件下，通過N端Kazal抑制區(qū)域分離后活化，引起Caspase激活促進細胞凋亡，增強對化療藥物的敏感性。HtrA1可以作為臨床化療反應的預測指標。

本文研究結果顯示，HtrA1在卵巢上皮癌組織中呈低表達，且腫瘤細胞分化程度越低，HtrA1的陽性表達率越低，與BOWDEN等[11]的研究結果相一致。同時，HtrA1陽性表達與術前CA125水平、淋巴結轉移和病理分級等密切相關，術前CA125水平較高者、有淋巴結轉移者、腫瘤細胞分化程度低者HtrA1的陽性表達率低，而與病人年齡、臨床分期、腫瘤大小和有無腹水等無關，這表明HtrA1可能與卵巢上皮癌的發(fā)生、進展有關。在化療耐藥組中HtrA1的陽性表達率低于敏感組，推測HtrA1可能是卵巢上皮癌耐藥的重要因素之一。

3.3 Id1和HtrA1的關系

轉化生長因子β(TGF-β)是一種多功能的多肽類細胞因子，通過細胞表面的受體信號轉導途徑參與細胞的分化、增殖。STRONG等[12]研究表明，在PZ-HPV7、DU145細胞中TGF-β能增加Id1的表達，提示Id1與TGF-β的表達有相關性。HtrA1通過自身結構中的功能區(qū)域與TGF-β1結合并抑制其作用。另有研究結果表明，Id1過表達促進EGFR表達上調，兩者呈正相關[4]。HE等[9]報道，HtrA1表達下調可促進EGFR表達，兩者呈負相關。因此推測Id1和HtrA1可能通過共同通路，相互作用，共同參與卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展及耐藥。雖然本研究兩種因子在蛋白水平上無明顯相關性，但在分子水平上有待于進一步研究證實。

綜上所述，Id1和HtrA1的表達與卵巢上皮癌發(fā)生、發(fā)展及其耐藥性相關，可作為卵巢上皮癌耐藥的參考指標，預測病人的化療敏感性。

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