溫愛(ài)平 張秀艷 鄔衛(wèi)東 向萍 陳曉霞

1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古呼和浩特010110；2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑部，內(nèi)蒙古呼和浩特010050

蒙藥參竹精片中總黃酮的含量測(cè)定

溫愛(ài)平1張秀艷1鄔衛(wèi)東2向萍1陳曉霞1

1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古呼和浩特010110；2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑部，內(nèi)蒙古呼和浩特010050

目的建立參竹精片中總黃酮的含量測(cè)定方法。方法采用超聲法提取，利用黃酮類與NaNO2-Al（NO3）3-NaOH發(fā)生顯色反應(yīng)，以蘆丁為對(duì)照品，采用分光光度法對(duì)不同批號(hào)參竹精片中總黃酮的含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果蘆丁濃度在0.0102～0.0714 mg/mL范圍內(nèi)與吸收度呈良好的線性關(guān)系（r=0.9997），平均回收率為98.80%，RSD為0.86%（n=9）。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便，重復(fù)性好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可作為參竹精片質(zhì)量控制的方法。

參竹精片；總黃酮；分光光度法

蒙藥參竹精片是由參竹精顆粒（蒙藥名毛浩日查干-5）[1]改劑型而成的新藥，是由手掌參、黃精、玉竹、何首烏（制）、廣棗五味藥材組成，主要用于腎寒、腎虛、精血不足、筋骨酸痛、年邁體弱等癥狀，具有補(bǔ)腎壯陽(yáng)、滋補(bǔ)強(qiáng)身的功能[1]。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，參竹精片中的玉竹[2]、廣棗[3]、何首烏（制）[4]、黃精[5]均含有黃酮類成分?？傸S酮的含量測(cè)定方法有紫外-可見(jiàn)分光光度法[6-9]、熒光分光光度法[10]、高效液相色譜法[11-12]、薄層掃描法[13]、薄層-紫外分光光度法[14]、毛細(xì)管電泳法[15]等。有關(guān)參竹精片劑的定性定量報(bào)道有薄層鑒別[16]和大黃素的含量測(cè)定[17]，但未見(jiàn)有關(guān)總黃酮的報(bào)道，本文采用分光光度法對(duì)參竹精片劑中總黃酮的含量測(cè)定方法進(jìn)行研究，為參竹精片的質(zhì)量控制及闡釋其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供一定的科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

AgiLent 8453紫外-可見(jiàn)分光光度儀（美國(guó)安捷倫科技公司）；DL-720D型數(shù)控超聲儀（上海之信儀器有限公司）；SARTORIUS-BS224S型電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；其他容量?jī)x器均經(jīng)過(guò)校正。

參竹精片（內(nèi)蒙古元和藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：120601、120602、140101、140102、140401、140402、140403、140404），蘆丁對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：100080-200707）；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 定性鑒別

稱取參竹精片劑粉末0.5 g，置具塞錐形瓶中，加入80%乙醇25 mL，密塞，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液蒸去乙醇，加乙酸乙酯20 mL萃取，萃取液揮干，殘?jiān)?0%乙醇10 mL溶解，作為鑒別用溶液。

2.1.1 鹽酸-鎂粉反應(yīng)取供試液1 mL，分置兩支試管中，其中一支加入少量鎂粉，并滴加濃鹽酸數(shù)滴，同置于水浴上加熱1 min后，取出觀察，不加鹽酸鎂粉的溶液為黃色，加鹽酸鎂粉變?yōu)榧t棕色。

2.1.2 三氯化鋁反應(yīng)取供試液各1 mL，分置兩支試管中，其中一支加入少量1%三氯化鋁溶液，不加三氯化鋁溶液為黃色，加三氯化鋁溶液為黃綠色熒光。

2.1.3 氨水反應(yīng)取供試液各1 mL，分置兩支試管中，其中一支加少量氨水，不加氨水溶液為淡黃色，加氨水溶液為橙色。

2.2 定量測(cè)定

2.2.1 提取溶劑的選擇取本品（批號(hào)：120601）粉末約0.25 g4份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別以甲醇、60%乙醇、80%乙醇和95%乙醇作溶劑，超聲提取40 min，測(cè)定其含量。結(jié)果總黃酮含量分別為3.15%、3.44%、3.67%和1.37%。可見(jiàn)，采用80%乙醇作為提取溶劑總黃酮含量最高，故選擇80%乙醇作為提取溶劑。

2.2.2 提取時(shí)間的選擇取本品粉末（批號(hào)：120601）約0.25 g 4份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加80%乙醇25 mL，分別超聲處理20、30、40、60 min，測(cè)定其含量。結(jié)果總黃酮含量分別為2.98%、3.08%、3.67%、3.35%?？梢?jiàn)，提取40 min總黃酮含量最高，故選定提取時(shí)間為40 min。

2.2.3 供試品溶液的制備取參竹精片10片，精密稱定，研細(xì)，取粉末約0.25 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%乙醇25 mL，密塞，稱重，超聲處理40 min，放冷，再稱重，用溶劑補(bǔ)足減失重量，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.4 亞硝酸鈉用量的選擇精密量取同一供試品溶液（批號(hào)：120601）5份各1 mL，置10 mL量瓶中，分別精密加5%亞硝酸鈉溶液0.1、0.3、0.5、0.7、1.0 mL，混勻，放置6 min；精密加10%硝酸鋁溶液0.3 mL，混勻，放置6 min；加1 mol/L氫氧化鈉溶液4 mL，用80%乙醇稀釋至刻度，混勻，放置15 min，測(cè)定含量，結(jié)果總黃酮含量分別為2.98%、3.30%、3.39%、3.37%和3.27%?？梢?jiàn)，亞硝酸鈉加0.5 mL時(shí)，總黃酮含量最高，故亞硝酸鈉的加入量確定為0.5 mL。

2.2.5 硝酸鋁用量的選擇精密量取同一供試液（批號(hào)：120601）5份各1 mL，置10 mL量瓶中，精密加5%亞硝酸鈉溶液0.5 mL，混勻，放置6 min；分別精密加10%硝酸鋁溶液0.1、0.3、0.5、0.7、1.0 mL，混勻，放置6 min；加1 mol/L氫氧化鈉溶液4 mL，用80%乙醇稀釋至刻度，混勻，放置15 min，測(cè)定含量，結(jié)果總黃酮含量分別為2.98%、3.19%、3.36%、3.31%、3.28%?？梢?jiàn)，10%硝酸鋁加0.5 mL總黃酮含量最高，故選硝酸鋁的加入量為0.5 mL。

2.2.6 氫氧化鈉用量的選擇取同一供試液（批號(hào)：120601）5份各1 mL，置10 mL量瓶中，精密加5%亞硝酸鈉溶液0.5 mL，混勻，放置6 min；加10%硝酸鋁溶液0.5 mL，混勻，放置6 min；分別精密加1 mol/L氫氧化鈉溶液2、3、4、5、6 mL，用80%乙醇稀釋至刻度，混勻，放置15 min，測(cè)定含量，結(jié)果總黃酮含量分別為2.34%、3.34%、3.66%、3.58%、3.37%?？梢?jiàn)，氫氧化鈉加4 mL時(shí)，總黃酮含量最高，故選氫氧化鈉加入量為4 mL。

2.2.7 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇精密量取供試品溶液l mL，按照上述條件顯色后，在400～800 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果見(jiàn)圖1。由圖1可見(jiàn)，最大吸收波長(zhǎng)在495 nm處，故選擇495 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

圖1 供試品顯色后的光譜圖

2.2.8 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密稱取于120℃干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品適量，加80%乙醇溶解并稀釋成每1毫升含蘆丁0.204 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。分別精密量取上述對(duì)照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mL，置10 mL量瓶中，精密加5%亞硝酸鈉溶液0.5 mL，搖勻，放置6 min，精密加10%硝酸鋁溶液0.5 mL，搖勻，放置6 min，再加1 mol/L氫氧化鈉溶液4 mL，分別用80%乙醇至刻度，搖勻，放置15 min，以試劑為空白，照紫外-可見(jiàn)分光光度法，在495 nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以濃度C（mg/mL）為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見(jiàn)圖2。以吸光度對(duì)濃度作線性回歸，得回歸方程：A=12.815C-0.0064（r=0.9997），可見(jiàn)濃度在0.0102～0.0714 mg/mL范圍內(nèi)，與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

圖2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2.9精密度試驗(yàn)取同一供試品溶液（批號(hào)：140404），按上述方法顯色后，測(cè)定吸光度，連續(xù)測(cè)定6次，結(jié)果分別是0.609、0.609、0.607、0.608、0.608、0.608，平均值為0.608，RSD為0.14%。表明該法的精密度較好。2.2.10穩(wěn)定性試驗(yàn)對(duì)顯色后的供試品溶液（批號(hào)：140404），分別在0、10、20、30、40 min時(shí)測(cè)定吸光度，共測(cè)定5次，結(jié)果分別是0.609、0.603、0.599、0.590、0.580，平均吸收值為0.596，RSD為1.91%。結(jié)果表明：供試品溶液顯色后在40 min內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.11 重復(fù)性試驗(yàn)取本品（批號(hào)：140404）粉末約0.25 g 6份，精密稱定，按“樣品含量測(cè)定”項(xiàng)下操作，測(cè)定吸光度，計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表1。提示，該法的重復(fù)性較好。

表1 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.2.12 加樣回收率試驗(yàn)取已知含量的參竹精片劑粉末（批號(hào)：140404，含量4.8%）約0.125 g 9份，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，分別精密加入蘆丁對(duì)照品適量（約相當(dāng)于處方量的80%、100%、120%各3份），以下按“供試品溶液制備”項(xiàng)下操作，制備回收率測(cè)定溶液，并按“樣品含量測(cè)定”項(xiàng)下操作，測(cè)定吸光度，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.2.13 樣品含量測(cè)定精密量取供試品溶液1 mL，置10 mL量瓶中，按“標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備”項(xiàng)下方法操作，以不加氫氧化鈉的測(cè)定液為空白，測(cè)定吸光度，用回歸方程計(jì)算樣品中總黃酮含量，分別對(duì)8批參竹精片劑中總黃酮的含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n=3）

3 討論

3.1 空白的選擇

分別以試劑、供試品溶液和不加氫氧化鈉的測(cè)定液作空白，在400～800 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果以試劑為空白，在此波長(zhǎng)范圍內(nèi)無(wú)明顯的吸收峰，其余兩空白在500 nm左右均有吸收峰，且測(cè)定結(jié)果基本一致，因此本實(shí)驗(yàn)采用不加氫氧化鈉的測(cè)定液作為空白。

3.2 研究意義

本研究首次采用紫外-可見(jiàn)分光光度法對(duì)參竹精片中總黃酮的含量進(jìn)行了測(cè)定，通過(guò)方法學(xué)考察，表明該法簡(jiǎn)便、快速、測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，為闡釋蒙藥參竹精片的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及其質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)，有關(guān)參竹精總黃酮的藥效還有待于進(jìn)一步研究。

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（收稿日期：2014-08-07本文編輯：衛(wèi)軻）

The determination of total flavonoids in Shenzhujing Tablet

WEN Aiping1ZHANG Xiuyan1WU Weidong2XIANG Ping1CHEN Xiaoxia11.College of Pharmacy,Inner Mongolia Medical University,Inner Monggol Autonomous Region,Huhhot010110,China;2.Department of Pharmacy,the First Affiliated Hospital of Inner Mongolia Medical University,Inner Monggol Autonomous Region,Huhhot010050,China

Objective To establish the method of determination for total flavonoids in Shenzhujing Tablet.Methods The ultrasonic extraction was used,and rutin was used as reference substance,colorimetry was used to determine the total flavonoids in Shenzhujing Tablet from different batches,by flavonoids and sodium nitrite-aluminum nitrate-sodium hydroxidc producing color under alkaline conditions.Results Rutin showed good linear relationship in the range of 0.0102-0.0714 mg/mL(r=0.9997),the average recovery was 98.80%,RSD was 0.86%(n=9).Conclusion The method is simple,reproducible,the results are accurately and reliable and can be used to quality control of Shenzhujing Tablets.

Shenzhujing Tablet;Total flavonoids;Colorimetry

R284.2

B

1673-7210淵2014冤11淵b冤-0087-04

2014-08-07本文編輯：衛(wèi)軻）

內(nèi)蒙古自治區(qū)衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)醫(yī)療衛(wèi)生科研計(jì)劃項(xiàng)目（編號(hào)201302051）。

溫愛(ài)平（1962.1-），女，教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事中蒙藥質(zhì)量研究。

鄔衛(wèi)東（1960.10-），男，主任藥師，主要從事藥品質(zhì)量檢驗(yàn)工作。