金明超，任春云，王 星

(浙江大學醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院，浙江杭州310003)

·儀器使用與排障·

i-CHROMATMReader免疫熒光分析儀測定超敏C反應蛋白性能評價

金明超，任春云，王 星

(浙江大學醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院，浙江杭州310003)

目的對i-CHROMATMReader免疫熒光分析儀檢測超敏C反應蛋白(hypersensitive C-reactive protein,hs-CRP)的性能進行驗證和評價。方法根據(jù)美國臨床和實驗室標準化協(xié)會(CLSI)標準，結(jié)合工作實際，設計實驗方案，對韓國i-CHROMATMReader免疫熒光分析儀檢測hs-CRP的檢出限、精密度、準確度、線性、可比性、參考區(qū)間、加樣量、干擾等主要分析性能進行驗證和評價，將實驗結(jié)果與廠商(韓國Boditech Med Inc公司)提供的分析性能進行比較。結(jié)果批內(nèi)精密度(CV%)為3.90%～6.17%、批間精密度(CV%)為4.04%～5.56%，均在廠商承諾范圍內(nèi)；檢出限為0.5mg/L，符合臨床要求；準確度實驗顯示i-CHROMATMReader免疫熒光分析儀與Beckman-Coulter Immage免疫分析儀檢測結(jié)果有較好的相關性；儀器對標本類型無特殊要求，全血與血清標本測定hs-CRP結(jié)果差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，有較好的可比性；20個結(jié)果均小于8mg/L，即大于8mg/L樣本為0，可以引用廠商參考范圍0.00～8.00mg/L；甘油三酯、膽紅素對檢測結(jié)果的影響在可接受的范圍內(nèi)，抗干擾能力符合要求。結(jié)論i-CHROMATMReader免疫熒光分析儀檢測hs-CRP各項性能指標符合質(zhì)量目標要求，同時它具有操作簡便、檢測迅速、精密度高、準確度好、線性范圍廣、抗干擾能力強等優(yōu)點，值得推廣應用。

i-CHROMATMReader；hs-CRP；性能評價

根據(jù)美國臨床和實驗室標準化協(xié)會(CLSI)相關標準，參照醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力認可準則(CNAS-CL02)和醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力認可準則在臨床血液學檢驗領域的應用說明(CNASCL027)，實驗室在儀器投入使用前，應通過對分析系統(tǒng)的評價，驗證其性能是否能達到設備說明書的性能要求。本科室近期引進一臺韓國Boditech Med Inc公司i-CHROMATMReader免疫熒光分析儀，以免疫熒光定量測試和干化學層析技術為檢測原理，可檢測hs-CRP項目。為了保證檢驗結(jié)果的準確、可靠，根據(jù)CLSI的相關標準，自行設計實驗方案，對該免疫熒光分析儀檢測hs-CRP進行了性能評價，現(xiàn)總結(jié)如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源選取本院門診患者，采集靜脈血。全血標本為EDTA-K2抗凝、血清標本為分離膠高速離心。干擾物：TG含量6.72mmol/L的乳糜標本；TBIL含量341μmol/L的黃疸標本，且干擾物自身hs-CRP濃度均＜0.5mg/L。

1.2 儀器與試劑韓國Boditech Med Inc公司i-CHROMATMReader免疫熒光分析儀及配套hs-CRP試劑盒及質(zhì)控品、校準品(批號2108CP，2109CP，2110CP；M209266)；美國Beckman-Coulter Immage免疫分析儀及配套試劑盒及質(zhì)控品、校準品(批號M202312，M202313；M209266)原理為速率散射比濁法，可溯源至WHO,IFCC,BCR-470內(nèi)部方法標準化。BD一次性采血針及非可替真空采血管、定時器、Eppendorf移液器、生理鹽水。

1.3 檢測方法

1.3.1 檢出限實驗檢出限(limit of detection,LoD)或檢測低限(lower limit of detection,LLD)是指檢測系統(tǒng)可檢測的最低分析物濃度，按文獻[1]介紹的方法，以緩沖液為空白樣品，對空白樣品進行20次檢測,與廠商給出的LoD值進行比較。

1.3.2 精密度實驗[1-3]

1.3.2.1 批內(nèi)精密度實驗選取同一批號試劑盒，選取hs-CRP低、中、高濃度三個水平病人新鮮全血各一份，每份重復測定20次，計算批內(nèi)精密度,與廠商提供的性能參數(shù)相比較，判斷其符合性。

1.3.2.2 批間精密度實驗選取hs-CRP低、中、高濃度三個水平質(zhì)控品，每天測定一次，連續(xù)測定20d，計算批間精密度，與廠商提供的性能參數(shù)相比較，判斷其符合性。

1.3.3 準確度實驗(方法學比對)[1，2,4]選取40份患者血清標本，hs-CRP濃度范圍應覆蓋臨床可報告范圍，并保證結(jié)果有50%落于參考區(qū)間之外。每天分別在i-CHROMATMReader免疫熒光分析儀以及Beckman-Coulter Immage免疫熒光分析儀檢測8份標本，每份重復檢測2次(檢測順序為1，2……8；8，7……1)，連續(xù)檢測5d，共收集40個患者標本，記錄80對數(shù)據(jù)。對數(shù)據(jù)進行方法內(nèi)離群值檢驗、數(shù)據(jù)作圖，線性分析、方法間離群值檢驗、X值合適范圍檢驗、線性回歸。

1.3.4 線性實驗[1，2,5]選取接近檢出限低濃度標本(L)(本實驗選用試劑盒緩沖液)，另選取一份接近預期上線高值全血標本(H)，按比例配制成5個不同濃度標本即1H，8H+2L，6H+4L，4H+6L，2H+8L (100%、80%、60%、40%、20%比例稀釋)，每個標本重復測定3次，計算均值。根據(jù)系列濃度測量值繪制y軸為所有濃度測定均值，x軸為理論值的圖形，建立y=bx+a的回歸方程，驗證線性范圍。

1.3.5 可比性實驗(全血與血清)選取10份新鮮血標本，濃度范圍覆蓋儀器線性區(qū)間。用全血、血清分別在i-CHROMATMReader免疫熒光分析儀上檢測這10份標本，每份重復檢測兩次，計算全血和血清在該免疫熒光分析儀的結(jié)果偏差百分比。

1.3.6 參考范圍評估實驗[1，2,6]選取20份新鮮血標本，男女比例為1:1，濃度范圍在正常區(qū)間內(nèi)(0.00～8.00mg/L)，要求結(jié)果大于8mg/L的個數(shù)小于等于2個。

1.3.7 加樣量實驗選取低、中、高濃度的質(zhì)控品，每種質(zhì)控品分三組，每組實驗樣本量均為10μl樣本和緩沖液的混合液。將三組混合液加到檢測板上的量分別為1滴，2滴(對照組)，3滴，驗證其結(jié)果準確性。

1.3.8 干擾實驗[1，2,7]分別將干擾物用生理鹽水按100%、90%、80%……20%、10%、0%比例稀釋成不同濃度的溶液，然后將不同濃度的干擾物溶液與待測血清按1:1混合，最后將混合液在i-CHROMATMReader免疫熒光分析儀上檢測2次，結(jié)果取均值。根據(jù)影響度作為干擾實驗評價指標。影響度=[(加入干擾物的全血測定值-未加入干擾物的全血測定值)/未加入干擾物的全血測定值]×100%。1.4統(tǒng)計學方法采用SPSS16.0軟件進行統(tǒng)計分析。兩組間比較采用配對t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1.1 檢出限對空白樣品進行20次檢測，空白樣品有18次結(jié)果小于0.5mg/L，2次檢測結(jié)果大于0.5mg/L，根據(jù)文獻，若超過LoD的測定值不超過3個，則給出的LoD值可用。

2.1.2 精密度批內(nèi)精密度(CV%)為3.90%～6.17%、批間精密度(CV%)為4.04%～5.56%，詳見表1。

表1 不同濃度水平下hs-CRP批內(nèi)、批間精密度(CV%)(n=20)

2.1.3 準確度(方法學比對)根據(jù)EP9-A2標準計算i-CHROMATMReader免疫熒光分析儀與Beckman-Coulter Immage免疫分析儀的2次檢測數(shù)據(jù)組內(nèi)和組間均無離群值。回歸方程為y=0.9939x+ 0.8140(y:i-CHROMATMReader,x:Beckman-Coulter Immage)，r2=0.9865。

2.1.4 線性回歸方程為y=0.9873x-0.3595(y：理論值，x：實測值)，r2=0.9963，臨床可報告范圍與廠商承諾范圍(0.5～200mg/L)接近。

2.1.5 全血與血清可比性全血與血清標本在i-CHROMATMReader免疫熒光分析儀上測定hs-CRP結(jié)果差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，有較好的可比性。

2.1.6 參考范圍20個結(jié)果均小于8mg/L，即大于8mg/L樣本為0，可以引用廠商參考范圍0.00～8.00mg/L。

2.1.7 加樣量加1滴時，儀器報警或結(jié)果報＞200mg/L。加3滴與2滴(對照組)結(jié)果無明顯差異。2.1.8干擾將不同濃度的干擾物與待測全血等量1:1混合，加入干擾物濃度、測定值及影響度詳見表2、表3。

表2 TG對hs-CRP結(jié)果的干擾影響度

表3 TBIL對hs-CRP結(jié)果的干擾影響度

3 討論

臨床檢驗結(jié)果的質(zhì)量直接關系到患者的診斷、治療和預后，這就要求我們保證hs-CRP檢測結(jié)果的準確、可靠。按照CAP及CNAS認可要求，對一個新的檢測系統(tǒng)進行性能評價是必須的，這也是質(zhì)量監(jiān)控的前提。我們根據(jù)CLSI的相關標準，自行設計方案，對韓國i-CHROMATMReader免疫熒光分析儀檢測hs-CRP的主要分析性能進行驗證，結(jié)果顯示該儀器檢出限LoD為0.5mg/L；精密度(CV%)批內(nèi)為3.90%～6.17%，批間為4.04%～5.56%，均在廠家聲明范圍內(nèi)；方法學比對顯示回歸方程為y=0.9939x+0.8140，r2=0.9865，說明兩種分析系統(tǒng)檢測hs-CRP相關性較好、檢測性能相當，經(jīng)配對t檢驗(t=1.733，P＞0.05)顯示兩種分析系統(tǒng)檢測結(jié)果的差異無統(tǒng)計學意義；選取一份接近預期上線高值作系列稀釋成5個不同濃度水平，用理論值和實測值作回歸分析，回歸方程為y= 0.9873x-0.3595,r2=0.9963，表明線性范圍較好，且與廠家聲明的臨床可報告范圍接近，經(jīng)F檢驗(F= 1613,P＜0.001)，相關系數(shù)t檢驗(t=40.158,P＜0.001)顯示回歸方程有統(tǒng)計學意義；對全血與血清10份樣本t檢驗(P＞0.05)顯示全血與血清測定hs-CRP結(jié)果差異無統(tǒng)計學意義，說明該儀器對標本類型無明顯要求，有較好的可比性。實驗中發(fā)現(xiàn)應用血清檢測比全血檢測與Beckman-Coulter Immage相關性更好，可能為全血中有抗凝物質(zhì)存在一定干擾，但測定結(jié)果的誤差在臨床可接受范圍內(nèi)；加樣量顯示加1滴時，儀器報警或者結(jié)果報＞200mg/L，加3滴時，檢測結(jié)果與2滴(對照組)無明顯差異。即只要加到檢測板上的量足夠(75μl)，對準確性無影響，量不夠時，儀器會報警，需重做。脂血和黃疸標本對檢測的影響度分別為-7.5%～2.8%和-2.2%～9.3%絕對值都小于10%，說明該儀器具有較強的抗干擾能力，干擾實驗顯示隨干擾物濃度的增高對hs-CRP測定影響度也相應增加。

綜上可見，韓國i-CHROMATMReader免疫熒光分析儀的主要分析性能指標符合質(zhì)量目標要求，可用于臨床檢測。

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[2]馮仁豐.臨床檢驗質(zhì)量管理技術基礎[M].第2版.上海:上?？茖W技術文獻出版社,2008.

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R446.62

A

1674-1129(2014)02-0227-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2014.02.050

2013-10-22；收回日期2013-11-11)