高文超，李啟艷，咸瑞卿，于海英，王小兵

（山東省食品藥品檢驗研究院，山東濟南250101）

氣相色譜法測定破壁靈芝孢子粉類保健食品中8種殘留溶劑

高文超，李啟艷，咸瑞卿，于海英，王小兵

（山東省食品藥品檢驗研究院，山東濟南250101）

目的建立直接進樣氣相色譜法測定破壁靈芝孢子粉類保健食品中8種有機溶劑殘留量。方法采用Agilent DB－624（30 m×0.53 mm，0.3μm）毛細管柱，氫火焰離子化檢測器，柱溫箱程序升溫，對破壁靈芝孢子粉類保健食品中甲醇、乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、苯、正丁醇、二乙烯基苯的殘留量進行檢測。結(jié)果8種殘留溶劑在19 min內(nèi)得到較好分離。各殘留溶劑在0.003 4～4.505 0 mg·mL－1范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.999 7。各殘留溶劑的回收率在93.00%～117.91%。結(jié)論該方法簡便、快速、準確，適用于檢測破壁靈芝孢子粉中8種有機溶劑的殘留。

直接進樣氣相色譜法；溶劑殘留；破壁靈芝孢子粉

靈芝孢子（Ganoderma Lucidum Spore）是靈芝的生殖細胞，靈芝生長成熟后從菌蓋彈射出來的顆粒。靈芝孢子粉具有靈芝的全部遺傳活性物質(zhì)，富含蛋白質(zhì)和氨基酸類、糖肽類、三萜類物質(zhì)［1］。近幾十年來的科學研究表明，靈芝孢子粉具有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、保肝和降血糖等功能。市場對靈芝孢子粉的需求也越來越多。靈芝孢子的孢壁是由幾丁質(zhì)和葡聚糖兩種成分構(gòu)成的兩層結(jié)構(gòu)，質(zhì)地堅硬，不易被人體消化吸收［2］。目前普遍采用生物法、化學法、物理法、機械法和綜合法［3］進行破壁處理。其中化學法包括溶劑浸泡，酸、堿降解等方法，以達到破壁效果，而溶劑浸泡后可能會有溶劑殘留在靈芝孢子粉中。目前國內(nèi)尚無關(guān)于破壁靈芝孢子粉中溶劑殘留檢測的報道。本文建立了直接進樣氣相色譜法同時檢測破壁靈芝孢子粉中8種有機溶劑殘留的方法，結(jié)果表明該方法快速、準確、分離度良好、精密度高，適用于破壁靈芝孢子粉類保健食品中殘留溶劑的檢測。

1 儀器與試劑

Agilent 7890A氣相色譜儀（配置FID；Agilent ChemStations軟件）；Mettler Toledo MS電子天平；甲醇、乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、苯、正丁醇、二乙烯基苯均為色譜純；溶劑N，N－二甲基甲酰胺（DMF）為色譜純；實驗用水為超純水。靈芝破壁孢子粉為5個不同廠家產(chǎn)品。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Agilent DB－624毛細管柱（30 m× 0.53 mm，0.3μm）；載氣為高純氮氣（≥99.99%），恒壓模式；進樣口溫度：200℃，檢測器溫度為230℃；氫氣流速：30 mL·min－1，空氣流速：400 mL·min－1，尾吹流速：28mL·min－1；柱溫升溫程序：50℃為初始柱溫，保持10 min，再以30℃·min－1的升溫速率升至200℃，保持4 min，最后以30℃·min－1的降溫速率使柱溫降至50℃，并保持2 min。進樣量：1.0 μL；分流比為10∶1。

2.2 溶液的配制

2.2.1 標準儲備液的配制 分別精密稱取甲醇、乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、苯、正丁醇、二乙烯基苯，置100 mL量瓶中。用N，N－二甲基甲酰胺稀釋至刻度，作為標準儲備液；其中，甲醇、乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、苯、正丁醇、二乙烯基苯的濃度分別為3.953 0、3.955 0、3.935 2、3.437 7、4.491 5、4.400 6、4.055 0、4.505 0 mg·mL－1。

2.2.2 標準曲線溶液的配制 分別精密量取標準儲備液0.01、0.04、0.2、1、2、10 mL，置10 mL量瓶中，加N，N－二甲基甲酰胺至刻度，作為標準曲線溶液，精密量取1μL，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，典型色譜圖見圖1。

2.2.3 供試品溶液的配制 精密稱取混勻后的靈芝破壁孢子粉，每份約1.0 g，于10 mL具塞比色管中，加溶劑N，N－二甲基甲酰胺8 mL，超聲提取15 min，冷卻后用溶劑定容至刻度，搖勻，進樣前樣品用0.45μm有機濾膜濾過，精密量取續(xù)濾液1μL，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，以標準曲線定量，典型色譜圖見圖1。

2.3 線性范圍及標準曲線 將“2.2.2”項下所配溶液按順序進樣，以峰面積（A）對試樣濃度（C）進行線性回歸，結(jié)果見表1。二乙烯基苯的峰面積為四種同分異構(gòu)體峰面積之和。

2.4 回收率試驗 取破壁靈芝孢子粉0.5 g，精密稱定于10 mL比色管中，平行制備9份。精確加入“2.2.2”項下標準曲線第5點的溶液50、100、500 μL，每個濃度3份，按供試品處理方法處理，進樣氣相色譜儀。以各組分峰面積求得濃度，計算回收率，結(jié)果見表2。二乙烯苯回收率按四種同分異構(gòu)體峰面積加和計算。

圖1 DMF溶劑氣相色譜圖

表1 殘留溶劑的線性關(guān)系

2.5 檢出限測定 分別精密稱取甲醇、乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、苯、正丁醇、二乙烯基苯適量，于容量瓶中，用N，N－二甲基甲酰胺溶解并稀釋成適宜濃度的溶液。用相同氣相色譜條件測定，S／N＝3時作為檢出限，檢出限依次為0.3、1.2、1.2、1.2、1.3、0.3、1.2、0.3 ng。

表2 回收率測定結(jié)果

2.6 樣品測定 實驗中選用了5批不同廠家的產(chǎn)品進行測定。其中5批均檢出甲醇和乙醇，甲醇含量在0.003 24%以下，乙醇含量在0.003 74%以下。其中兩批檢出乙酸乙酯，含量為0.002 62%、0.002 49%。一批檢出正丁醇，含量為0.002 12%。其他可能存在的溶劑均未檢出。5批樣品中有機溶劑殘留量均符合《中國藥典》2010年版（二部）對殘留溶劑限度的要求。

3 討論

3.1 直接進樣相比頂空進樣操作簡單，直接，適合于高沸點化合物的分析。但待測樣品易對色譜分析系統(tǒng)造成污染［4，5］。頂空進樣氣相色譜法檢測溶劑殘留方法［6，7］相比直接進樣方法增加了實驗步驟和時間。本實驗中比較了頂空氣相色譜法與直接進樣氣相色譜法對于破壁靈芝孢子粉樣品中溶劑殘留檢測的影響，破壁靈芝孢子粉樣品本身為粉狀樣品，品質(zhì)較為均勻細膩，實驗中用N，N－二甲基甲酰胺對其中的有機溶劑進行提取即可達到較高的準確性和重復性。實驗證明，直接進樣法在標準品及供試品中均沒有引入干擾組分，故實驗中采用了簡單快捷的直接進樣方式。

3.2 待分析成分中，甲醇、乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、苯、正丁醇的沸點均較低，且區(qū)分度不大。正丁醇與二乙烯基苯沸點相差較大，分別為117.7℃和195℃，選擇沸點為153℃的N，N－二甲基甲酰胺作為溶劑，在本方法中不會干擾其他溶劑的測定，使8種成分得到很好的分離，不額外增加檢驗時間。因此本文選用N，N－二甲基甲酰胺為溶劑。

3.3 本文建立了一種利用直接進樣氣相色譜法對破壁靈芝孢子粉中溶劑殘留的快速檢測方法。本方法精密度高，回收率良好，8種組分分離度均符合要求，具有很好的應(yīng)用前景。

［1］洪亮，楊開，邵平，等.破壁靈芝孢子粉的制備及體外抗氧化活性研究［J］.浙江食用菌，2009，17（4）：55－58.

［2］黃曉蘭，吳惠勤，黃芳，等.破壁與不破壁靈芝孢子粉多糖的分析［J］.中草藥，2006，37（6）：813－816.

［3］張守勤，朱俊潔，王長征，等.靈芝孢子食用方法與破壁技術(shù)研究進展［J］.農(nóng)業(yè)機械學報，2004，35（2）：160－162.

［4］魏京京，張啟明，朱維華.毛細管氣相色譜直接進樣檢測34種殘留溶劑［J］.藥物分析雜志，2008，28（10）：1767－1770.

［5］鄭靜，王小兵，徐志洲.氣相色譜法測定吡喹酮及片劑的殘留溶劑［J］.藥學研究，2014，33（3）：145－147.

［6］馬新榮，史雪蓮，孔令艷.頂空氣相色譜法測定拉米夫定中殘留溶劑［J］.藥學研究，2013，32（4）：205－207.

［7］鄧桂鳳，戴偉東，姚彤煒.頂空氣相色譜法測定淫羊蕾提取物中的殘留有機溶劑［J］.藥物分析雜志，2008，28（11）：1955－1960.

Determination of residual solvents in broken cellular wall ganoderma lucidum spore powder by DI－GC

GAOWen-chao，LIQi-yan，XIAN Rui-qing，YU Hai-ying，WANG Xiao-bing
（Shandong Institute for Food and Drug Control，Jinan 250101，China）

ObjectiveTo establish a novel strategy of8 kinds of residual solventbased on direct injection gas chromatography（DI－GC）.MethodsThe eight residual solventswere separated by Agilent DB－624 capillary column（30m× 0.53 mm，0.3μm）with FID detector.The 8 kinds of residual solvents in ganoderma lucidum spore powderwith broken cellular wallweremethanol，ethanol，acetone，hexane，ethylacetate，benzene，n－butanol，divinyl－benzene.The column temperature was programmed.ResultsThe eight resident solvents were excellently separated within 19 minutes.The calibration curve of residual solventswas linear in the concentration range of0.003 4～4.505 0 mg·mL－1.The correlation coefficient r＞0.999 7.The recoveries of resident solvents were between 93.00%～117.91%.ConclusionThe established method was simple，rapid，accurate.It can be used for the detection of resident solvents in broken cellular wall ganoderma lucidum spore powder.

DI－GC；Resident solvents；Broken cellular wall ganoderma lucidum spore powder

R927.11

A

2095－5375（2014）11－0642－003

高文超，女，研究方向：保健食品化妝品檢驗，E－mail：15106919596＠163.com

王小兵，男，主管藥師，研究方向：餐飲食品保健食品化妝品檢驗，Tel：0531－81216585，E－mail：wangxiaobing81＠163.com