張曉峰，劉大鐸

（吉林師范大學(xué)體育學(xué)院體育教育教研室，吉林 四平 136000）

羅漢果提取物對運(yùn)動(dòng)疲勞小鼠的抗疲勞作用

張曉峰，劉大鐸

（吉林師范大學(xué)體育學(xué)院體育教育教研室，吉林 四平 136000）

目的：研究羅漢果提取物（SGFE）的抗運(yùn)動(dòng)疲勞作用，為SGFE的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。方法：將144只雄性ICR小鼠隨機(jī)分為對照組、SGFE低劑量組、SGFE中劑量組和SGFE高劑量組，每組36只。對照組小鼠每天口服1.0mL生理鹽水，其他3組小鼠每天給予1.0mL SGFE（SGFE分別為100、200和400mg·kg－1），所有小鼠每周進(jìn)行3次持續(xù)15min的被動(dòng)游泳訓(xùn)練，持續(xù)28d。末次小鼠被動(dòng)游泳實(shí)驗(yàn)后處死，采集血液、肝臟和腓腸肌分別檢測小鼠血乳酸（BLA）、血尿素氮（BUN）、肝糖原和肌糖原濃度。結(jié)果：與對照組比較，SGFE低、中和高劑量3組小鼠的游泳力竭時(shí)間延長（P＜0.05），但SGFE 3組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；SGFE低、中和高劑量組小鼠BLA濃度明顯低于對照組（P＜0.05），且隨SGFE劑量增加有下降趨勢；SGFE中劑量組和高劑量組小鼠BUN濃度明顯低于對照組（P＜0.05），但低劑量組小鼠BUN濃度與對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。SGFE低、中和高劑量組小鼠肝糖原和肌糖原濃度明顯高于對照組（P＜0.05），且隨著SGFE劑量的增加有升高趨勢。結(jié)論：補(bǔ)充SGFE對運(yùn)動(dòng)疲勞小鼠有明顯的抗疲勞功效。

羅漢果提取物；運(yùn)動(dòng)疲勞；血乳酸；血尿素氮；小鼠，ICR

羅漢果為葫蘆科多年生草質(zhì)藤本植物羅漢果的干燥成熟果實(shí)，主要分布于廣東、廣西、貴州、江西和湖南等地區(qū)。羅漢果作為傳統(tǒng)中藥，在廣西民間用藥歷史已有300多年，主要被用于治療喉炎、支氣管炎和胃腸疾病?，F(xiàn)今研究［1］顯示：羅漢果提取物（siraitia grosvenorii fruit extracts，SGFE）有廣泛的藥理學(xué)和促進(jìn)健康的作用，包括提高免疫力、抗氧化、抗糖尿病、抗腫瘤和抗炎癥作用。羅漢果主要活性成分是羅漢果苷，屬于葫蘆烷型三萜類，包括羅漢果苷Ⅳ、羅漢果苷Ⅴ、羅漢果皂苷ⅣA、羅漢果二醇Ⅰ苯甲酸醞、羅漢果新苷、羅漢果苷Ⅲ、羅漢果皂苷ⅡA1、賽門苷Ⅰ、11－氧化－羅漢果苷Ⅴ、羅漢果ⅡE、羅漢果苷ⅢE和羅漢果苷A等。苷類是很多名貴中藥的主要活性成分，常被用來研制新藥，如SGFE一直被用作抗肝炎藥物，而有關(guān)SGFE抗疲勞功效的研究報(bào)道較少，本研究探討SGFE對運(yùn)動(dòng)疲勞小鼠的作用，為運(yùn)動(dòng)營養(yǎng)補(bǔ)劑的研究提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 144只雄性ICR小鼠（體質(zhì)量18～22g）購于吉林省長春市動(dòng)物繁育實(shí)驗(yàn)研究中心，動(dòng)物合格證號(hào)：1204015。小鼠被單獨(dú)飼養(yǎng)，環(huán)境溫度保持在（23±2）°C、濕度（50±5）%，維持12h光亮和12h黑暗交替循環(huán)，小鼠可自由攝取水和食物。一切實(shí)驗(yàn)操作均遵守中國動(dòng)物保護(hù)法律法規(guī)和吉林師范大學(xué)道德規(guī)范。小鼠在實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為對照組、SGFE低劑量、SGFE中劑量和SGFE高劑量組，每組36只。對照組小鼠每天給予1.0mL生理鹽水，其他3組小鼠每天給予1.0mL SGFE，劑量分別為100、200和400mg·kg－1，持續(xù)28d。各組小鼠每周均進(jìn)行3次15min的被動(dòng)游泳訓(xùn)練。末次被動(dòng)游泳實(shí)驗(yàn)后處死，采集各組小鼠血液、腓腸肌和肝臟組織待測。

1.2 主要試劑 血乳酸（blood lactic acid，BLA）、組織糖原測定試劑盒（動(dòng)物測試用）購于南京建成生物工程研究所，血尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）測定試劑盒購于北京中生北控生物科技股份有限公司；實(shí)驗(yàn)用水和溶液由美國Milli－Q純化系統(tǒng)制備；其他藥品均購于吉林省長春化學(xué)試劑有限公司。

1.3 SGFE的制備 羅漢果購于吉林省長春市醫(yī)藥公司，由吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材學(xué)院專家鑒定。樣品標(biāo)本被保存在吉林師范大學(xué)。SGFE制備方法依據(jù)參考文獻(xiàn)［2］并適當(dāng)改良，具體方法：取500g風(fēng)干的羅漢果，研磨成粉末（顆粒直徑0.2～0.5mm），溶解在70℃的3L蒸餾水中1h后提取水溶液，重復(fù)3次。采用高效液相色譜通過柱層析法將水溶液提取物進(jìn)一步真空、純化、分離，最后真空風(fēng)干制成SGFE（質(zhì)量23.2g）。高效液相色譜分析顯示：提取物中苷類占76.4%，其中主要為羅漢果苷。SGFE使用前用生理鹽水溶解。高效液相色譜系統(tǒng)由 Waters 1525Binary HPLC泵、Waters 2487dualλAbstorbance檢測器和XTerra RP18色譜柱構(gòu)成。

1.4 各組小鼠被動(dòng)游泳實(shí)驗(yàn) 各組分別取出12只小鼠進(jìn)行被動(dòng)游泳實(shí)驗(yàn)。小鼠游泳場所為90cm×45cm×45cm的塑料池，池水溫度保持在（25±2）℃，深度35cm。每只小鼠尾巴上附加重物（小鼠體質(zhì)量的10%），從實(shí)驗(yàn)開始到小鼠出現(xiàn)協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)失調(diào)及10s內(nèi)不能露出水面［3－4］，即判斷為運(yùn)動(dòng)力竭，記錄各組小鼠的游泳時(shí)間。

1.5 血生化指標(biāo)檢測 各組分別取出12只小鼠進(jìn)行血生化指標(biāo)分析。小鼠先負(fù)重（小鼠質(zhì)量的2%）進(jìn)行30min游泳運(yùn)動(dòng)［4］，休息60min后，于小鼠眼眶部位采血，按試劑盒說明書操作檢測BLA和BUN水平。各組剩余12只小鼠進(jìn)行組織糖原分析。小鼠先進(jìn)行無負(fù)重90min游泳運(yùn)動(dòng)，休息60min后，宰殺小鼠獲得肝臟和腓腸?。?］。按照試劑盒測試方法檢測組織糖原濃度。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。各組小鼠BLA、BUN、肝糖原和肌糖原水平以±s表示，組間采用Duncan多重比較。

2 結(jié) 果

2.1 各組小鼠體質(zhì)量 實(shí)驗(yàn)前（第0天）和實(shí)驗(yàn)后（第28天）稱量各組小鼠體質(zhì)量。與實(shí)驗(yàn)前比較，實(shí)驗(yàn)后各組小鼠體質(zhì)量均有增加，但SGFE低、中和高劑量組小鼠與對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），表明補(bǔ)充SGFE對小鼠體質(zhì)量無影響。見表1。

2.2 各組小鼠血生化檢測結(jié)果 與對照組比較，SGFE低、中和高劑量組小鼠游泳力竭時(shí)間延長（P＜0.05），且隨著SGFE劑量的增加，小鼠游泳力竭時(shí)間延長越明顯；SGFE各劑量組小鼠BLA濃度隨SGFE劑量的增加呈現(xiàn)下降趨勢，且均明顯低于對照組（P＜0.05）；中和高劑量組小鼠BUN濃度明顯低于對照組（P＜0.05），而低劑量組與對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；SGFE各劑量組小鼠肝糖原和肌糖原濃度較對照組明顯增高（P＜0.05），且隨SGFE劑量的增加有升高趨勢。見表2。

表1 各組小鼠體質(zhì)量Tab.1 Body weights of mice in various groups（n＝3，±s，m／g）

表1 各組小鼠體質(zhì)量Tab.1 Body weights of mice in various groups（n＝3，±s，m／g）

Group Body weight Pre－experiment Post－experiment Control 19.57±1.48 28.23±1.78 SGFE low dosage 20.55±1.30 27.65±1.64 SGFE middle dosage 19.33±1.42 28.30±1.91 SGFE high dosage 20.58±1.56 29.31±2.02

表2 各組小鼠血生化指標(biāo)的比較Tab.2 Comparisons of blood biochemical indexes of mice in various groups （n＝12，±s）

表2 各組小鼠血生化指標(biāo)的比較Tab.2 Comparisons of blood biochemical indexes of mice in various groups （n＝12，±s）

＊P＜0.05 vs control group.

.44±2.11 1.15±0.21 SGFE low dosage 724.52±19.61＊ 9.52±0.84＊ 9.14±1.15 14.35±3.26＊ 1.84±0.35＊SGFE middle dosage 768.76±18.93＊ 8.86±0.93＊ 8.22±0.73＊ 17.41±3.73＊ 1.92±0.28＊SGFE high dosage 821.15±20.11＊ 7.45±0.96＊ 7.63±0.66＊ 19.63±3.51＊ 2.13±0.55）］Control 550.35±17.34 13.01±1.21 9.85±1.01 7 Group Exhaustive swimming time（t／s）BLA［cB／mmol·L－1）］BUN［cB／（mmol·L－1）Liver glycogen［wB／（mg·g－1）］Muscle glycogen［wB／（mg·g－1＊

3 討 論

抗疲勞效果的直接體現(xiàn)是小鼠運(yùn)動(dòng)耐力的增加。力竭游泳運(yùn)動(dòng)是常用的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，可以很好地評價(jià)小鼠的耐力水平，該實(shí)驗(yàn)具有較高的重復(fù)性［5］。為了減少小鼠游泳時(shí)間、使工作負(fù)荷標(biāo)準(zhǔn)化，在小鼠的尾部按其體質(zhì)量的百分比附加一定重物［6］。有報(bào)道［7］顯示：游泳時(shí)間增加與疲勞敏感性下降有關(guān)。上述研究提示SGFE對小鼠有一定的抗疲勞作用，且功效與補(bǔ)充劑量密切關(guān)聯(lián)。

BLA是碳水化合物在無氧條件下的酵解產(chǎn)物，糖酵解是短期劇烈運(yùn)動(dòng)的主要供能方式［8］。游泳是全身劇烈運(yùn)動(dòng)，消耗大量的能量和氧氣，產(chǎn)生大量的乳酸，乳酸解離生成的氫離子占肌肉中全部酸性物質(zhì)解離的85%以上，BLA增多使肌肉pH值下降，進(jìn)而引起一系列的生理化學(xué)變化，成為導(dǎo)致疲勞的重要原因［9］。因此，BLA是判斷疲勞程度的重要指標(biāo)之一，BLA濃度也代表著運(yùn)動(dòng)后的疲勞程度和恢復(fù)條件［3］。小鼠游泳耐力的增加提示SGFE能降低小鼠體內(nèi)乳酸的生成。

BUN是蛋白質(zhì)和氨基酸代謝的產(chǎn)物，是評價(jià)機(jī)體承受負(fù)荷耐力的敏感指標(biāo)。長跑運(yùn)動(dòng)員在運(yùn)動(dòng)后，其BUN 濃度明顯升高［10－12］。有研究［7，13］顯示：BUN濃度增加越多，機(jī)體運(yùn)動(dòng)耐力越差，因此BUN也是重要的疲勞狀態(tài)指標(biāo)。根據(jù)小鼠游泳時(shí)間的延長，提示補(bǔ)充一定劑量的SGFE可以減少蛋白質(zhì)和氨基酸分解供能。小鼠BLA和BUN濃度的變化表明SGFE具有明顯的抗疲勞功效。

糖是機(jī)體運(yùn)動(dòng)時(shí)的主要供能物質(zhì)，體內(nèi)存在方式為血糖和糖原，糖原是糖的儲(chǔ)存形式，主要有肝糖原和肌糖原2種形式，用以維持血糖的穩(wěn)定和滿足骨骼肌運(yùn)動(dòng)時(shí)的能量需求，與運(yùn)動(dòng)疲勞的發(fā)生有密切關(guān)聯(lián)。運(yùn)動(dòng)時(shí)的能量來源于糖原的分解，劇烈運(yùn)動(dòng)時(shí)肌糖原首先被消耗，之后能量的獲得來自肝糖原不斷釋放進(jìn)入血中的葡萄糖，因此，機(jī)體糖原含量是判斷疲勞的敏感指標(biāo)。本研究結(jié)果提示：SGFE對增加小鼠糖原儲(chǔ)備、降低糖原消耗和減少運(yùn)動(dòng)時(shí)機(jī)體對碳水化合物的利用有一定的功效。

綜上所述，SGFE能夠延長小鼠游泳時(shí)間，增加肝糖原和肌糖原含量，降低BLA和BUN濃度，表明SGFE對小鼠有顯著的抗疲勞作用，且作用大小與SGFE劑量有密切關(guān)聯(lián)。但當(dāng)前對SGFE的生物活性研究還不夠深入，缺少細(xì)胞和分子水平研究報(bào)道，這將是今后研究的重點(diǎn)。

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Anti－fatigue effect of siraitia grosvenorii fruit extracts on mice with exercise fatigue

ZHANG Xiao－feng，LIU Da－duo
（Department of Physical Education，School of Physical Education，Jilin Normal University，Siping 136000，China）

Objective To discuss the anti－fatigue effects of siraitia grosvenorii fruit extracts（SGFE）on the mice with exercise fatigue and to provide basis for clinical application of SGFE.Methods 144male ICR mice were randomly divided into control group（n＝36），SGFE low dosage group（n＝36），SGFE middle dosage group（n＝36）and SGFE high dosage group（n＝36）.The mice in control group were

an oral administration of physiological saline in a volume of 1.0mL，and the mice in other three groups were received 1.0mL of SGFE（100，200and 400mg·kg－1，once a day）for 28d.All mice were forced to swim for 15min each day.After 28d，the blood，liver and gastrocnemius were collected after forced swimming test，and the biochemical parameters related to fatigue，including blood lactic acid（BLA），blood urea nitrogen（BUN），liver glycogen，and muscle glycogen were measured.Results Compared with control group，the exhautive swimming time of the mice in SGFE low，middle and high dosage groups was prolonged（P＜0.05），but there were no significant differences between SGFE low dosage，middle dosage and high dosage groups（P＞0.05）；the levels of BLA of mice in SGFE low dosage，middle dosage and high dosage groups were significantly lower than that in control group（P＜0.05），and the BLA levels showed a decreasing trend with the increase of SGFE in SGFE low，middle and high dosage groups.The levels of BUN of mice in SGFE middle and high dosage groups were significantly lower than that in control group（P＜0.05），but there was no significant difference between SGFE low dosage group and control group.The levels of liver glycogen and muscle glycogen of mice in SGFE low，middle and high dosage groups were significantly higher than that in control group（P＜0.05），and they showed a increasing trend with the increase of SGFE dosagein SGFE low，middle and high dosage groups.Conclusion SGFE has significant anti－fatigue effect on the mice with exercise fatigue.

siraitia grosvenorii fruit extracts；physical fatigue；blood lactic acid；blood urea nitrogen；mice，ICR

R962

A

1671－587Ⅹ（2013）03－0494－04

10.7694／jldxyxb20130314

2012－09－20

吉林省科技廳自然科學(xué)基金資助課題 （20070573）

張曉峰 （1977－），男，吉林省四平市人，講師，醫(yī)學(xué)碩±，主要從事運(yùn)動(dòng)人體科學(xué)方面研究。

劉大鐸 （Tel：0434－3292037，E－mail：chinaboy20000＠163.com）

時(shí)間：2013－04－23 18：40

網(wǎng)絡(luò)出版地址：http：／／www.cnki.net／kcms／detail／22.1342.R.20130423.1840.005.html