周莉莉 包瓊瓊 劉云 莊曉賽 胡喬 孫妙璇 胡艷兵 張雄

PARK18基因多態(tài)性與中國漢族人帕金森病的相關(guān)性

周莉莉 包瓊瓊 劉云 莊曉賽 胡喬 孫妙璇 胡艷兵 張雄

目的 研究PARK18基因多態(tài)性與中國漢族人群帕金森病（PD）的相關(guān)性，旨在探討PD的發(fā)病機(jī)制，為PD的風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測提供新的遺傳標(biāo)記。 方法 選取224例PD患者（PD組）及同期體檢健康者309例（對照組），采用PCR、DNA測序等方法檢測比較兩組PARK18基因多態(tài)性位點(diǎn)，分析rs3129882與PD遺傳易感性的相關(guān)性。 結(jié)果 兩組對象rs3129882基因型頻率和等位基因頻率分布的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。rs3129882多態(tài)性與PD發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)性在3種遺傳模式下均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。 結(jié)論 本研究暫不支持中國漢族人群中PARKl8區(qū)域rs3129882位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與PD的發(fā)生有顯著關(guān)聯(lián)性。

帕金森病 PARK18 rs3129882 多態(tài)性 疾病遺傳易感性

帕金森?。≒D）是一種常見的漸進(jìn)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，其病因及發(fā)病機(jī)制至今尚不十分清楚。遺傳因素在PD病因與發(fā)病機(jī)制中的作用日益受到重視[1]。近來，歐洲研究者開展了較大規(guī)模的全基因組關(guān)聯(lián)研究（GWAS），發(fā)現(xiàn)了位于人類白細(xì)胞抗原（HLA）基因的一個新的易感區(qū)域，命名為PARK18，其中該區(qū)域的rs3129882位點(diǎn)與PD相關(guān)性最強(qiáng)[2]。HLA在機(jī)體免疫應(yīng)答和免疫調(diào)節(jié)中起關(guān)鍵作用。有研究發(fā)現(xiàn)，免疫反應(yīng)和炎癥過程參與PD疾病過程，在PD的發(fā)生和發(fā)展中有著重要作用[3]。因此位于HLA基因的PARK18區(qū)域可能是導(dǎo)致PD的重要遺傳因素。目前，盡管國內(nèi)外學(xué)者己經(jīng)對HLA基因多態(tài)性與PD易感性的關(guān)聯(lián)作了相關(guān)研究，但由于等位基因及其頻率存在種族及地區(qū)差異性，各地研究結(jié)果不一，尚無定論。本文通過研究PARK18基因多態(tài)性與中國漢族人群PD的相關(guān)性，旨在探討PD的發(fā)病機(jī)制，以期為早期診斷及治療提供幫助。

1 對象和方法

1.1 對象 選取2008—2011我院收治的PD患者224例（PD組），診斷依據(jù)英國PD協(xié)會腦庫標(biāo)準(zhǔn)，除外遺傳及免疫性PD。其中男127例，女97例；年齡33～86（65.05±11.19）歲；早發(fā)型PD（發(fā)病年齡＜50歲）36例。另擇同期體檢健康者309例作為對照組，男188例，女121例，年齡27～90（65.11±12.27）歲；排除錐體外系及其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病。兩組對象均簽署知情同意書，并經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。兩組對象性別及年齡的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。

1.2 方法 標(biāo)本采集：取外周靜脈血2ml，肝素抗凝后-80℃冰箱保存?；蚪MDNA提?。翰捎肣iagen公司的QIAmp DNA blood mini kit血液基因組DNA提取試劑盒，從全血中提取基因組DNA。引物合成：采用Primer5.0

軟件設(shè)計(jì)，由上海捷瑞生物工程有限公司完成，正向引物序列為F：5′-ATTATTCCCTTGGTGTTGGTT-3′，反向引物序列為R：5′-TAGTTTTCCTATTATGTAGCCCTG-3′。序列測定及分析：純化產(chǎn)物測序委托上海申速生物公司完成。采用NCBI網(wǎng)站提供的Blast軟件進(jìn)行比對，根據(jù)比對結(jié)果判別基因分型。

圖1 包含rs3129882多態(tài)性位點(diǎn)的DNA片段測序圖（箭頭所指為rs3129882基因型）

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 通過直接計(jì)數(shù)法對SNP位點(diǎn)基因型和等位基因頻率進(jìn)行計(jì)算。采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，兩組間率的比較采用χ2檢驗(yàn)。相關(guān)性檢驗(yàn)采用Logistic回歸分析。

2 結(jié)果

2.1 測序結(jié)果 兩組均發(fā)現(xiàn)rs3129882位點(diǎn)的AA、AG、GG的3種基因型，PD組部分測序峰見圖1。

2.2 兩組對象rs3129882基因型頻率和等位基因頻率分布的比較 見表1。

表1 兩組對象rs3129882基因型頻率和等位基因頻率分布的比較[例（%）]

由表1可見，其差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。

2.3 Logistic回歸分析 rs3129882多態(tài)性與PD發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)性在3種遺傳模式下均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（顯性遺傳模式下OR=1.326，95%CI：0.937～1.878，P=0.111；隱性遺傳模式下 95%OR=1.025，CI：0.644～1.631，P=0.917；加性遺傳模式下OR=1.171，95%CI：0.909～1.508，P=0.221）。

2.4 不同臨床亞型（震顫為主型、強(qiáng)直型和混合型）PD患者該多態(tài)性位點(diǎn)的基因型和等位基因分布 見表2。

表2 不同臨床亞型PD患者該多態(tài)性位點(diǎn)的基因型和等位基因分布[例（%）]

由表2可見，不同臨床亞型（震顫為主型、強(qiáng)直型和混合型）PD患者該多態(tài)性位點(diǎn)的基因型和等位基因的分布差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。

3 討論

目前，散發(fā)性PD的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，可能涉及免疫、遺傳、環(huán)境等諸多因素。Hamza等[2]對歐州人的研究中發(fā)現(xiàn)了新的PD相關(guān)區(qū)域，命名為PARK18基因。但后續(xù)有關(guān)PARK18與PD的相關(guān)性研究并不能完全重復(fù)Hamza等的研究結(jié)果，如Mata等[4]在西班牙人群及Sim n-S nchez等[5]在荷蘭人群中檢測基因rs3129882位點(diǎn)時未發(fā)現(xiàn)其與PD的發(fā)病相關(guān)。表明PARK18基因的SNP在不同的人群中與PD的相關(guān)性存在差異，其是否為PD的危險(xiǎn)因素還需進(jìn)一步研究。

PARKl8位于6p21.3，其中與PD相關(guān)性最強(qiáng)的SNP位點(diǎn)rs3129882位于HLA-DRA基因的1號內(nèi)含子。rs3129882被認(rèn)為是一個順式作用調(diào)節(jié)因子，其功能為調(diào)節(jié)HLA-DRA、HLA-DQA2和HLA-DRB5的表達(dá)量[6]。HLA基因是一組免疫應(yīng)答基因，具有高度多態(tài)性，其基因多態(tài)性決定了HLA系統(tǒng)參與的免疫反應(yīng)的多樣性和復(fù)雜性。關(guān)于PARK18基因多態(tài)性導(dǎo)致PD的易患性增加的機(jī)制仍在探索中。本研究結(jié)果暫不支持rs3129882多態(tài)性是中國人群PD的危險(xiǎn)因素，但不能就此排除PARK18基因參與PD發(fā)病的可能性。一方面可能是由地區(qū)或者種族差異所致，另一方面也可能本研究樣本量相對較小有關(guān)。

由于PD的易感性與多基因相關(guān)，除SNCA、LRRK2等已知易感基因外，PARK16、17、18等新發(fā)現(xiàn)的候選基因也可能影響患者PD易感性[2,7-8]。因此中國人群PD與其它基因易感性也值得進(jìn)一步研究。

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Association between PARK18 gene polymorphisms and Parkinson's disease in Han China population

ZHOU Lili，BAO Qiongqiong，LIU

Yun，et al.Department of Neurology，the Second Affiliated Hospital of Wenzhou Medical College，Wenzhou 325027,China

Objective To investigate whether PARK18 gene polymorphism is associated with Parkinson's disease (PD)in Han Chinese population.Methods Polymerase chain reaction(PCR)and sequencing analysis were employed to determine the genotype of 224 PD patients and 309 age-matched healthy controls.The representative SNP rs3129882 in PARKl8 was analyzed and the role of rs3129882 in PD was assessed with dominant,recessive and additive model. Results No significant difference was found in allelic frequencies or genotypic distributions among different subsets of patients(P＞0.05).No association between rs3129882 and the risk of PD was detected under dominant,recessive and additive model(P＞0.05). Conclusion No evidence shows that PARK18 gene rs3129882 polymorphisms are associated with Parkinson's disease in Han Chinese population in the current study.

Parkinson's disease PARK18 locus rs3129882 Polymorphism Genetic predisposition to disease

2011-12-04）

（本文編輯：歐陽卿）

325027 溫州醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科通信作者：張雄，E-mail：zhangxiong98@gmail.com