陳舒 洪小珍 許先國(guó) 藍(lán)小飛 馬開(kāi)榮 劉瑛 何吉 呂杭軍

RhD陰性女性妊娠期意外抗體篩選的回顧性研究

陳舒 洪小珍 許先國(guó) 藍(lán)小飛 馬開(kāi)榮 劉瑛 何吉 呂杭軍

目的 分析RhD陰性女性妊娠期的意外抗體篩選情況。 方法 利用鹽水介質(zhì)法、聚凝胺法和抗人球蛋白法對(duì)376例Rh陰性妊娠期女性進(jìn)行了意外抗體篩查和抗體效價(jià)的測(cè)定，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行回顧性分析。結(jié)果 33例檢出意外抗體，檢出率為8.8%（33/376）。檢出抗體為抗D 24例（72.7%），抗D+C 2例（6.1%），抗E 2例（6.1%），抗Fyb 1例（3.0%），抗M 1例（3.0%）和抗P 11例（3.0%），2例未能鑒定出抗體特性。376例Rh陰性受檢者中78例篩查2次以上，其中10例第1次篩查陽(yáng)性而在隨后定期檢測(cè)抗體滴度呈現(xiàn)變化，包括8例呈現(xiàn)上升趨勢(shì)和2例下降趨勢(shì)；4例保持不變；3例第1次篩查陰性而在隨后的定期檢測(cè)呈陽(yáng)性，61例第1次篩查陰性而在隨后的檢測(cè)中未發(fā)現(xiàn)意外抗體。 結(jié)論 RhD陰性妊娠期女性中存在一定比例的意外抗體，定期篩查抗體有助于指導(dǎo)臨床及時(shí)采用干預(yù)措施。

RhD陰性 妊娠期女性 意外抗體篩查

新生兒溶血病（hemolytic disease of newborn，HDN）是一種常見(jiàn)于胎兒和新生兒的與溶血相關(guān)的自限性免疫綜合征,常由母嬰血型不合引起，主要見(jiàn)于A(yíng)BO血型系統(tǒng)和Rh血型系統(tǒng)。RhD-HDN主要發(fā)生于母親RhD陰性而胎兒陽(yáng)性，嚴(yán)重者可出現(xiàn)自然流產(chǎn)或不足月死胎[1-2]。對(duì)妊娠女性常規(guī)檢測(cè)Rh血型和不規(guī)則抗體，可以及早發(fā)現(xiàn)胎兒溶血風(fēng)險(xiǎn)以便采取相應(yīng)措施。本文系統(tǒng)回顧性分析了Rh陰性女性妊娠期意外抗體的篩查情況，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 2007-07—2012-10來(lái)血液中心篩查的376例RhD陰性妊娠期女性，年齡19～39歲。

1.2 試劑 凝聚胺介質(zhì)試劑（臺(tái)資珠海貝索生物技術(shù)有限公司），NOVACLONETMAnti-IgG抗人球蛋白試劑（美國(guó)Immucor公司），O型混合細(xì)胞（本實(shí)驗(yàn)室自制），Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號(hào)篩選細(xì)胞（上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司），譜細(xì)胞（上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司或美國(guó)Immucor公司）。

1.3 方法

1.3.1 意外抗體篩選 取試管3支，各加受檢血清2滴，再分別加篩選細(xì)胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各1滴，混勻后1 000g離心20s，肉眼和顯微鏡觀(guān)察。加低離子溶液0.7ml，混勻后加凝聚胺溶液2滴，1 000g離心10s，傾去上清液，管底殘留約0.1ml液體。輕輕搖動(dòng)試管，肉眼觀(guān)察紅細(xì)胞有無(wú)凝集，如無(wú)凝集則必須重作；加2滴懸浮液，搖動(dòng)試管并輕輕混勻，1min內(nèi)肉眼和顯微鏡觀(guān)察結(jié)果。無(wú)凝集則表示血清中無(wú)意外抗體；有凝集現(xiàn)象，則需進(jìn)一步采用譜細(xì)胞來(lái)進(jìn)行意外抗體鑒定。

1.3.2 意外抗體鑒定

1.3.2.1 鹽水介質(zhì)法 加受檢者血清2滴于標(biāo)記的試管中，加2%～5%譜細(xì)胞懸液1滴于每個(gè)試管中，混勻，1 000g離心15s，觀(guān)察溶血和凝集反應(yīng)并記錄結(jié)果，溶血和凝集都是陽(yáng)性結(jié)果。

1.3.2.2 抗人球蛋白試驗(yàn) 取受檢者血清3滴于標(biāo)記的小試管中，加2%～5%譜細(xì)胞懸液1滴，加低離子溶液3滴，混勻，37℃水浴孵育15min，用0.9%氯化鈉溶液洗滌3次后，加抗球蛋白試劑2滴，混勻，1 000g離心15s，肉眼觀(guān)察溶血和凝集。如結(jié)果為陰性，再加IgG致敏的細(xì)胞1滴，離心后應(yīng)出現(xiàn)凝集結(jié)果，否則試驗(yàn)無(wú)效。

1.3.3 血清抗體效價(jià)測(cè)定 取10支小試管，按順序編號(hào)，每管加0.9%氯化鈉溶液100μl。第1管中加入100μl受檢者的血清，從該管起做倍比稀釋至第10管。第10管去掉100μl。每管加入相應(yīng)血型抗原的2%～5%譜細(xì)胞懸液50μl混勻，置37℃水浴30min。每管用0.9%氯化鈉溶液洗滌3次后，加抗球蛋白試劑2滴，搖勻，1 000g離心15s，肉眼觀(guān)察凝集結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 RhD陰性妊娠期女性血清意外抗體篩選情況 共檢測(cè)Rh陰性女性376例，其中33例檢出含有意外抗體，檢出率8.8%（33/376）。檢出的抗體有抗D 24例（72.7%），其中效價(jià)≤1的6例，效價(jià)2的3例，效價(jià)32的2例，效價(jià)64的3例，效價(jià)128的6例，效價(jià)256的3例，效價(jià)1 024的1例；抗D+C 2例（6.1%），其中抗D的效價(jià)分別為64和256，抗C的效價(jià)分別為64和8；抗E 2例（6.1%），效價(jià)分別是16和128；抗Fyb、抗M各1例（3.0%），效價(jià)分別是32和8；抗P1 1例，未能測(cè)出效價(jià)值。未能鑒定出抗體特性2例（6.1%）。

2.2 RhD陰性妊娠期女性血清意外抗體定期檢測(cè)情況 376例Rh陰性受檢者中78例有2次及以上篩查結(jié)果，檢測(cè)次數(shù)為2～5次，間隔期為1～20周不等。其中10例樣本第1次篩查陽(yáng)性而在隨后定期檢測(cè)抗體滴度呈現(xiàn)變化，包括8例呈現(xiàn)上升趨勢(shì)和2例下降趨勢(shì)；有4例保持不變；3例樣本第1次篩查陰性而在隨后的定期檢測(cè)呈陽(yáng)性，61例（78.2%）標(biāo)本第1次篩查陰性而在隨后的檢測(cè)中未發(fā)現(xiàn)意外抗體，見(jiàn)表1。

表1 兩次以上受檢者定期監(jiān)測(cè)抗體效價(jià)情況

3 討論

研究顯示Rh血型系統(tǒng)抗原性強(qiáng)弱依次為D＞E＞C＞c＞e，而Rh溶血以RhD抗體最常見(jiàn)，其次為RhE[3]。本文結(jié)果顯示RhD陰性孕婦存在一定比例的意外抗體，以抗D為主，另外存在抗C和抗E，與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致。除Rh系統(tǒng)抗體外，本研究中存在抗Fyb、抗M和抗P1。它們歸屬于三個(gè)不同的紅細(xì)胞血型系統(tǒng)。抗-M大多為IgM，人群中可天然存在，它引起HDN很罕見(jiàn)[4]。抗-P1屬于冷抗體，其臨床意義有限，但偶有報(bào)道抗-P1發(fā)生免疫溶血[5]?？?Fyb可由妊娠和輸血刺激產(chǎn)生，已有報(bào)道抗-Fyb引起的HDN，但抗-Fyb是一個(gè)相對(duì)稀有的抗體[6]，因此其發(fā)生HDN的概率很低。

孕前或妊娠期篩查意外抗體對(duì)于優(yōu)生具有重要的意義，本文結(jié)果顯示RhD抗原陰性妊娠期婦女篩查次數(shù)從1～5次，兩次篩查的間隔時(shí)間從1～20周，提示臨床上已初步具備Rh陰性女性產(chǎn)前篩查意外抗體的理念，但是對(duì)于如何規(guī)范篩查頻次尚缺乏統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果中首次篩查陰性大多數(shù)隨后的檢測(cè)仍是陰性，僅2例效價(jià)增加達(dá)到4倍，因此對(duì)于首次血清意外抗體篩查陰性的RhD陰性女性，可以在妊娠20、28和34周再進(jìn)行篩查[7]，以避免不必要的檢測(cè)。

意外抗體呈現(xiàn)陽(yáng)性的受檢者中90.9%在首次篩查即被檢出，這可能與本實(shí)驗(yàn)的樣本來(lái)源有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)樣本大多來(lái)源于醫(yī)院意外抗體篩查陽(yáng)性而送檢的RhD抗原陰性孕婦，由于醫(yī)院已初步篩選，因此可能造成受檢者樣本中意外抗體首次篩選陽(yáng)性比例較高。本研究中意外抗體陽(yáng)性受檢者在定期監(jiān)測(cè)中大多抗體效價(jià)呈上升趨勢(shì)，這與文獻(xiàn)報(bào)道一致[8-10]。隨著妊娠時(shí)間的增加，抗體效價(jià)并非恒定不變。由于抗體效價(jià)的高低與HDN疾病程度密切相關(guān)，因此建議篩查陽(yáng)性的Rh陰性女性妊娠期間定期監(jiān)測(cè)抗體效價(jià)，以便指導(dǎo)臨床采取適當(dāng)?shù)母深A(yù)措施。

[1]Rubin L P,Hansen K.Testing for hematologic disorders and complications[J].Clin Lab Med,2003,23(2):317-343.

[2]Kraft P,Palmer C G,Woodward A J,et al.RHD maternal-fetal genotype incompatibility and schizophrenia:extending the MFG test to include multiple siblings and birth order[J].Eur J Hum Genet,2004,12(3):192-198.

[3]Nasseri F,Mamouri G A,Babaei H.Intravenous immunoglobulin in ABO and Rh hemolytic diseases of newborn[J].Saudi Med J, 2006,27(12):1827-1830.

[4]Nolan B,Hinchliffe R,Vora A.Neonatal pure red cell aplasia due to maternal anti-M[J].Arch Dis Child Fetal Neonatal,2006,91(6): F467-F468.

[5]Arndt P A,Garratty G,Marfoe R A,et al.An acute hemolytic transfusion reaction caused by an anti-P1 that reacted at 37 degree C[J].Transfusion,1998,38(4):373-377.

[6]杰夫·丹尼爾主編,朱自嚴(yán)主譯.人類(lèi)血型［M］.北京:科學(xué)出版社, 2007:172,215,388.

[7]劉達(dá)莊.免疫血液學(xué)[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,2002:128-144.

[8]Savithrisowmya S,Singh M,Kriplani A,et al.Assessment of fetomaternal hemorrhage by flow cytometry and Kleihauer-Betke test in Rh-negative Pregnancies[J].Gynecol Obstet Invest,2008, 65(2):84-88.

[9]Rubod C,Deruelle P,Le Goueff F,et al.Long-term prognosis for infants after massive fetomaternal hemorrhage[J].Obstet Gynecol,2007,110(2):256-260.

[10]凌雅,高潔錦,陳香娟,等.120例Rh陰性孕婦產(chǎn)前抗體篩查及效價(jià)檢測(cè)的意義[J].浙江實(shí)用醫(yī)學(xué),2010,15(5):380-382.

Retrospective study on screening of unexpected antibody in RhD-negative pregnant women

CHEN Shu,HONG Xiaozhen,XU Xianguo,

et al.Blood Centre of Zhejiang Province,Key Laboratory of Blood Safety Research,Ministry of Health,Hangzhou 310006,China

Objective To screen unexpected antibody in RhD-negative pregnant women. Methods Total 376 Rh-negative pregnant women were analyzed retrospectively.The screening of unexpected antibody and detection of antibody titer were conducted by salt medium,polyamine and antiglobulin methods. Results Unexpected antibodies were found in 33 cases accounting for 8.8%of total(33/376),including 24 cases with anti-D(72.7%),2 anti-D combined anti-C(6.1%),2 anti-E(6.1%),1 anti-Fyb(3.0%),1 anti-P1(3.0%)and 1anti-M(3.0%);and the antibodies specificity was not identified in 2 cases(6.1%).Seventy eight out of 376 cases were screened more than twice.During the follow-up among 14 positive cases 8 had increased antibodies titer,2 had decreased titer and 4 had no change;while among 64 negative cases unexpected antibodies turned to positive in 3 cases and 61 cases remained negative. Conclusion Unexpected antibodies exist in serum of RhD-negative pregnant women, which indicates that regularly screening of unexpected antibody will help to adopt intervention strategy promptly for the RhD-negative pregnant women.

Rh-negative Pregnant women Screening of unexpected antibodies

2012-11-16）

（本文編輯：胥昀）

310006 杭州，浙江省血液中心衛(wèi)生部血液安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

何吉，E-mail:heji1016@sina.com