何榮芬

(安徽省淮北市人民醫(yī)院，安徽 淮北 235000)

復(fù)方白芷乳膏是淮北市人民醫(yī)院的自制制劑，主要成分為白芷、維生素E。白芷具有美白除斑、潤(rùn)膚、控油、延緩皮膚衰老的作用。白芷維生素E乳膏經(jīng)臨床驗(yàn)證，療效好、使用方便、無(wú)刺激性、無(wú)不良反應(yīng)[1]。維生素E是自由基清除劑，使細(xì)胞的脂質(zhì)免受自由基氧化的損害，從而延緩衰老。筆者采用高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方白芷乳膏中歐前胡素和異歐前胡素的含量，方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、穩(wěn)定、靈敏度高，適用于制劑的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

Waters e2695 HPLC色譜系統(tǒng);Empower Waters工作站;Waters 2489 UV/visible Detector檢測(cè)器;超聲波處理器(濟(jì)寧奧波超聲電氣有限公司，批號(hào)為JAC-300);Mettler AE-240電子分析天平(0．1 mg，0．01 mg)。歐前胡素對(duì)照品(批號(hào)為 110826-200511，中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用，置五氧化二磷減壓干燥12 h以上使用);異歐前胡素對(duì)照品(批號(hào)為110827-201008，中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用，含量以99．4%計(jì)，置五氧化二磷減壓干燥12 h以上使用);復(fù)方白芷乳膏(淮北市人民醫(yī)院制劑，批號(hào)分別為 20120928，20121025，20121030);甲醇為色譜純，水為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，Hypersil ODS2 C18柱(150 mm×4．6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇 -水(62 ∶38);流速:1．0 mL/min;柱溫:25 ℃;進(jìn)樣量:20 μL;檢測(cè)波長(zhǎng):254 nm[2]。在此條件下，色譜圖見圖1。

2．2 溶液制備

圖1 高效液相色譜圖

分別精密稱取歐前胡素對(duì)照品6．37 mg(置五氧化二磷減壓干燥14 h)，異歐前胡素對(duì)照品6．73 mg(置五氧化二磷減壓干燥14 h)，置100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得對(duì)照品貯備液[3]。取本品2 g，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加甲醇20 mL，80℃水浴中放置10 min使其完全破乳，再置超聲儀中超聲10 min，放冷至室溫，用甲醇溶解至刻度，置冰浴冷卻1 h，取出后迅速過濾，取續(xù)濾液放冷至室溫，用0．45 μm濾膜過濾，即得供試品溶液[4]。取處方中不含白芷的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:分別精密量取對(duì)照品貯備液 1．0，2．0，4．0，6．0，10．0，20．0 mL，置 50 mL 容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，按上述色譜條件，精密量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖(圖1A)，以峰面積為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(μg/mL)進(jìn)行線性回歸分析，得回歸方程。歐前胡素 Y=78 855．639 8X＋1 167．223 7(r=0．99999)，進(jìn)樣質(zhì)量濃度在 1．274 ～25．48 μg/mL 范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關(guān)系;異歐前胡素 Y=74 122．810 8 X-5229．1326(r=0．99999)，進(jìn)樣質(zhì)量濃度在 1．338 ～ 26．76 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):取同一對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果歐前胡素峰面積為 405 800，406 400，408 900，409 600，410 900，413 800，RSD=0．72%;異歐前胡素峰面積為 394 500，395 100，395 800，398 700，399 800，401 800，RSD=0．74%。表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取樣品測(cè)定項(xiàng)下的同一供試品溶液(批號(hào)為20121025)在 0，2，4，6，8，10，12 h 時(shí)分別進(jìn)樣測(cè)試，記錄色譜圖。結(jié)果歐前胡素峰面積的 RSD為1．76%，異歐前胡素峰面積的RSD為0．90%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批號(hào)的樣品(批號(hào)為20121025)6份，各測(cè)定2次，照樣品測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定，計(jì)算含量。結(jié)果歐前胡素的平均含量為標(biāo)示量的0．092%，RSD為0．79%;異歐前胡素的平均含量為標(biāo)示量的0．047%，RSD為1．28%。結(jié)果表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn):精密稱取已知含量的樣品(批號(hào)為20121025)9份，分別置10 mL容量瓶中，分成3組，每組分別精密加入 5．096 μg/mL 的對(duì)照品貯備液 2．0，2．4，3．0 mL，照供試品溶液制備方法，精密量取20 μL注入液相色譜儀，按擬訂的色譜條件測(cè)定。結(jié)果見表1和表2。

表1 歐前胡素加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2．4 樣品含量測(cè)定

取本品3批，各取2份，精密稱取適量，置50 mL容量瓶中，按供試品制備方法得供試品溶液。精密量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖(圖1B)，用回歸方程計(jì)算含量。結(jié)果見表3和表4。

3 討論

有文獻(xiàn)報(bào)道[5-7]，歐前胡素和異歐前胡素的測(cè)定波長(zhǎng)選擇300 nm和254 nm。取同一對(duì)照品溶液，分別在300 nm和254 nm波長(zhǎng)處測(cè)定，結(jié)果在254 nm波長(zhǎng)處測(cè)定時(shí)歐前胡素和異歐前胡素的峰面積及峰高值均大于在300 nm測(cè)定值。故選擇254 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

表2 異歐前胡素加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

表3 樣品歐前胡素含量測(cè)定結(jié)果

表4 樣品異歐前胡素含量測(cè)定結(jié)果

在供試品溶液色譜圖中，歐前胡素和異歐前胡素色譜峰之間還有別的組分峰，通過調(diào)節(jié)甲醇-水的比例，可以將歐前胡素和異歐前胡素與其他相鄰的色譜峰達(dá)到完全分離。本研究中采用甲醇 -水(62∶38)為流動(dòng)相，Hypersil ODS2 C18柱(150 mm ×4．6 mm，5 μm)，得到了滿意的效果。

[1]梓 萱．白芷美容稱上品[J]．中國(guó)保健營(yíng)養(yǎng)，2010(9):40-42．

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[3]肖永慶，李 麗，游小淋，等．白芷質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J]．中國(guó)中藥雜志，2004，29(7):467-468．

[4]蔣 劍，田立江，趙 新．復(fù)方白芷乳膏中歐前胡素的高效液相色譜法測(cè)定[J]．新疆中醫(yī)藥，2005，23(3):9．

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