宋偉峰 羅淑媛 李瑞明 梁耀榮

1.中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院，廣東廣州 510630；2.中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院，廣東廣州 510080

高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法鑒定山芝麻水提取液的化學(xué)成分

宋偉峰1羅淑媛1李瑞明2梁耀榮2

1.中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院，廣東廣州 510630；2.中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院，廣東廣州 510080

目的 鑒定山芝麻水提取液的化學(xué)成分。 方法 采用水為溶劑加熱回流提取法提取山芝麻藥材，提取液采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法鑒定其中的化學(xué)成分。 結(jié)果 從山芝麻水提取液中共分離得到10個主要的化學(xué)成分，并采用多級質(zhì)譜對其進行了結(jié)構(gòu)鑒定，其中8個化學(xué)成分通過對照品得到了確證，分別為奎尼酸、檸檬酸、新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸C、異綠原酸A和異綠原酸B。 結(jié)論本實驗為該藥材的開發(fā)和利用提供了科學(xué)基礎(chǔ)。

山芝麻；水提取液；化學(xué)成分；高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法

山芝麻為梧桐科植物山芝麻Helicteres angustifolia L.的干燥根，其味苦、性寒，歸肺、大腸經(jīng)，可解表清熱、解毒消腫，用于感冒發(fā)熱、痄腮、麻疹、咳嗽、泄瀉痢疾、癰腫[1-2]。山芝麻為民間常用的中藥，始載于《生草藥性備要》，是廣東涼茶的主要原料，也是多種中藥制劑的原料[3]。山芝麻為廣東地方特色中藥材，其研究水平較低，相關(guān)報道也較少，嚴(yán)重制約了該藥材的開發(fā)利用。近年來對其化學(xué)成分的研究逐漸深入開展，植物化學(xué)研究表明，山芝麻中含有有機酸、三萜、甾體和倍半萜內(nèi)酯類等有效成分[4-9]。由于中藥飲片主要采用水煎煮的方式服用，研究其水提取液的化學(xué)成分具有重要的意義。本文采用水為溶劑加熱回流提取山芝麻的活性成分，提取液采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLC-MSn）分析，研究結(jié)果將為山芝麻藥材的開發(fā)利用及其質(zhì)量控制提供理論依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent 1100 HPLC-MSD高效液相色譜離子阱質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國Agilent公司）；色譜柱：Zorbax-SB C18高效液相色譜柱（150.0mm × 2.1mm，5μm，美國 Agilent公司）。 乙腈為色譜純（美國Burdick&Jackson），水為Milli-Q超純水。山芝麻藥材購自廣州大參林藥店，經(jīng)鑒定為山芝麻（Helicteres angustifolia L.）。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品提取

取山芝麻藥材粉碎，稱取10 g置圓底燒瓶中，加100mL水，加熱回流提取2 h，提取液冷卻后轉(zhuǎn)移至100 mL的容量瓶中，定容后過0.45μm濾膜，待分析。

2.2 色譜及質(zhì)譜條件

2.2.1 色譜條件 Zorbax-SB C18高效液相色譜柱（150.0 mm×2.1 mm，5μm）；流動相A為0.5%的甲酸，B為乙腈，梯度洗脫：0～5 min，98%A+2%B；5～25 min，2%～12%B；25～55 min，12%～25%B；55～70 min，25%～95%B；后運行 10 min，98%A+2%B。流速為0.5mL/min，進樣量為5.0μL，柱溫為25℃，二極管陣列檢測器（DAD）掃描波長為190～400 nm。

2.2.2 質(zhì)譜條件 電噴霧（ESI）離子源，負(fù)離子檢測模式；霧化N2壓力 345 kPa，干燥 N2氣流速 10 L/min，干燥 N2氣溫度350℃；毛細(xì)管電壓 3 500 V；質(zhì)譜掃描：m/z 50～1 000，Auto MSn模式，自動選擇豐度最高的三個離子進行二級和三級質(zhì)譜分析。

2.3 成分分析

山芝麻藥材水提取液的HPLC-MSn分析總離子流色譜見圖1，色譜圖上有10個明顯的色譜峰，表明山芝麻水提取液中含有10個主要的化學(xué)成分。對每個化學(xué)成分進行多級質(zhì)譜分析，并結(jié)合相關(guān)的文獻(xiàn)報道，對這10個色譜峰進行了鑒定，相關(guān)信息見表1，圖2給出了異綠原酸A的多級質(zhì)譜裂解途徑。異綠原酸（m/z 515）為雙咖啡奎寧酸衍生物，多級質(zhì)譜失去1分子咖啡?；?，得到單咖啡奎寧酸衍生物（m/z353），m/z 353再失去1分子咖啡?；玫絤/z 191的碎片。

通過與對照品的保留時間、一級質(zhì)譜和多級質(zhì)譜信息進行比較，色譜峰 1、2、3、5、6、8、9 和 10 分別確證為奎尼酸、檸檬酸、新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸C、異綠原酸A和異綠原酸B?；衔?由于缺乏相關(guān)的文獻(xiàn)報道和對照品，故結(jié)構(gòu)未能鑒定，有待進一步分析?；衔?與化合物8、9和10的一級質(zhì)譜相同，顯示具有相同的分子量，而它們的多級質(zhì)譜碎片信息也非常相似，提示它們具有相似的結(jié)構(gòu)，因此推測化合物7為異綠原酸的異構(gòu)體。

3 討論

山芝麻作為嶺南常用中藥，資源極為豐富，常用于治療感冒發(fā)熱、痄腮、麻疹、咳嗽、泄瀉痢疾和癰腫等癥。HPLCMSn具有高選擇性、高靈敏度和能提供結(jié)構(gòu)信息的特性，在中藥化學(xué)成分鑒定中起著非常重要的作用。本實驗通過對山芝麻水提取液進行HPLC-MSn分析，研究了其水溶性化學(xué)成分，山芝麻水提取液主要成分為咖啡?？崴犷惢衔?。咖啡?？崴犷惢衔锞哂袕V泛的抗菌、抗炎、抗氧化等活性，是山芝麻水提取液的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)[10-11]。本實驗為山芝麻藥材的藥效作用研究和合理開發(fā)利用提供了實驗依據(jù)。

表1 山芝麻水提取液的化學(xué)成分分析

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Identification of the major com ponents from the water extract of Helicteres angustifolia L.by high-performance liquid chromatography coupled w ith tandem mass spectrometry

SONGWeifeng1 LUO Shuyuan1 LIRuiming2 LIANG Yaorong2
1.The Third Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University,Guangdong Province,Guangzhou 510630,China;2.The First Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University,Guangdong Province,Guangzhou 510080,China

Objective To identify themajor components from the water extract of Helicteres angustifolia L..MethodsThe Helicteres angustifolia L.was extracted by reflux extraction using water as solvent,and the extractwas analyzed by highperformance liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry.Results10 major componentswere separated,and their chemical structures were identified by tandem mass spectrometer.Among them,quinic acid,citric acid,neochlorogenic acid,chlorogenic acid,cryptochlorogenic acid,isochlorogenic acid C,isochlorogenic acid A and isochlorogenic acid B were confirmed by a comparison of MSn information with those of the reference substances.ConclusionThe method provides the scientific basis for the exploitation and utilization of Helicteres angustifolia L..

Helicteres angustifolia L.;Water extract;Components;High-performance liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry

R284.1

A

1673-7210（2012）12（a）-0108-02

廣東省科技計劃項目（項目編號：2011A080300004）。

宋偉峰（1972，4-），男，主管藥師；研究方向：醫(yī)院藥學(xué)。

李瑞明（1974，7-），男，主管藥師；研究方向：醫(yī)院制劑。

2012-06-05 本文編輯：衛(wèi) 軻）