楊曉亮，詹廷西，李 青，張國珍

（重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院輸血科 400016）

人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）破壞人體免疫功能，最終導(dǎo)致獲得性免疫缺陷綜合征（acquired immunodeficiency syndrome，AIDS），即艾滋病。由于AIDS的治療沒有特效藥以及HIV疫苗研制的失敗，AIDS病死率相當(dāng)高，已成為本世紀(jì)嚴(yán)重威脅人類健康的病毒性疾病之一［1－3］。目前最有效的手段仍以預(yù)防為主，能否對HIV感染做出快速、準(zhǔn)確的診斷是阻止其流行擴(kuò)散的關(guān)鍵。檢測HIV的酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme－linked immunosorbent assay，ELISA）試劑經(jīng)歷了4代發(fā)展［4－5］。目前第4代HIV診斷試劑是利用P24蛋白氨基酸順序高度保守這一特性，在第3代試劑基礎(chǔ)上加入了P24抗原檢測系統(tǒng)，可同時檢測血清或血漿中的HIV（1＋2）抗體與P24抗原，使診斷窗口期與第3代ELISA檢測試劑相比平均縮短4d。本院從2010年9月開始使用第4代HIV診斷試劑，現(xiàn)將其與膠體硒法、Western blot的檢測結(jié)果進(jìn)行比較，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集本院2010年9月至2011年7月住院患者的靜脈血標(biāo)本51 433例，其中，男27 532例，女23 901例。

1.2 主要試劑與儀器 第4代ELISA診斷試劑購自北京科衛(wèi)臨床診斷試劑有限公司，膠體硒試劑由Inverness Medical Japan Co.，Ltd.提供，Western blot試劑由重慶市疾病預(yù)防控制中心提供；匯松洗板機(jī)和TECAN酶標(biāo)儀（Sunrise）由重慶恩鳴醫(yī)療設(shè)備有限公司提供。

1.3 檢測方法 用進(jìn)口膠體硒試劑和國產(chǎn)第4代HIV（1＋2）及P24抗原聯(lián)合檢測ELISA試劑盒對每一份標(biāo)本進(jìn)行初檢，操作嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行。2種試劑均陰性，判為陰性；其中1種試劑陽性或2種試劑均陽性，判為初篩陽性；初篩陽性標(biāo)本送重慶市疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行Western blot確證試驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 住院患者的HIV檢測 采用第4代ELISA試劑檢測HIV抗體，陽性結(jié)果192例；膠體硒檢測，陽性結(jié)果164例。將上述可疑陽性的標(biāo)本送重慶市疾病預(yù)防控制中心采用Western blot進(jìn)行確診，結(jié)果陽性153例，不確定15例，陰性24例。ELISA試劑、膠體硒及 Western blot 3種方法檢測HIV的陽性率分別為0.37%、0.32%及0.30%。對15例Western blot檢測不能確定的標(biāo)本進(jìn)行分析：第4代ELISA試劑和膠體硒試劑均陽性5例；第4代ELISA試劑檢測HIV陽性，而膠體硒檢測HIV陰性8例；第4代ELISA試劑檢測陰性，而膠體硒檢測陽性2例。第4代ELISA試劑的HIV漏檢率（1.3%）低于膠體硒試劑（4.9%）。對24例 Western blot檢測結(jié)果為陰性的標(biāo)本進(jìn)行分析：第4代ELISA試劑和膠體硒試劑均陽性1例；第4代ELISA試劑檢測陽性，膠體硒檢測陰性18例；第4代ELISA試劑檢測陰性，膠體硒檢測陽性5例。第4代ELISA試劑的假陽性率（0.03%）高于膠體硒試劑（0.01%），并且18例ELISA假陽性的患者中，男6例，女12例，男女比例為1∶2；婦科和產(chǎn)科患者7例，約占38.9%。見表1。

表1 第4代ELISA試劑的18例假陽性結(jié)果分析

3 討 論

近年來，HIV感染和AIDS的發(fā)病率迅速增加，形勢嚴(yán)峻［6］。在沒有特效藥和疫苗的情況下，盡早準(zhǔn)確檢測出 HIV感染已成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)。P24蛋白是HIV病毒顆粒的主要結(jié)構(gòu)蛋白，在病毒的包裝和成熟過程中發(fā)揮重要作用，其氨基酸序列在HIV各毒株之間高度保守，缺失P24會導(dǎo)致病毒無法正常組裝［7］。在HIV感染早期，病毒大量復(fù)制而產(chǎn)生抗體極少時，第3代ELISA試劑是不能滿足臨床需要的［8］。通過檢測血清或血漿P24抗原，可以將“窗口期”縮短，此時HIV抗體尚為陰性［9－10］。目前，ELISA試劑已經(jīng)發(fā)展到 HIV（1＋2）抗體與P24抗原聯(lián)合檢測階段。

本研究將所使用的第4代ELISA試劑、膠體硒試劑和Western blot進(jìn)行初步比較，一方面，第4代ELISA試劑檢測HIV的假陽性率高于膠體硒法，而其與Western blot確證試驗(yàn)的陽性一致率明顯低于膠體硒法與Western blot確證試驗(yàn)的陽性一致率，也有文獻(xiàn)報道與本研究結(jié)果一致［11］。在24例Western blot確證陰性病例中，18例為第4代ELISA試劑檢測HIV假陽性，婦科和產(chǎn)科7例，約占38.9%，是否該科室患者血清中某種物質(zhì)與第4代ELISA試劑發(fā)生交叉反應(yīng)導(dǎo)致較高的假陽性率，還有待進(jìn)一步觀察研究。另一方面，第4代ELISA試劑檢測 HIV的漏檢率（1.3%）低于膠體硒法（4.9%）。15例Western blot檢測不確定的樣本中，膠體硒法檢測結(jié)果呈陽性者少于第4代ELISA試劑檢測結(jié)果呈陽性者，后者具有很好的初篩作用。這一特性，決定了第4代ELISA試劑適于大批量篩查［12－13］。并且國產(chǎn)第4代ELISA試劑盒實(shí)際應(yīng)用的敏感性和特異性與進(jìn)口第4代ELISA試劑盒相差不大［14］。

綜上所述，HIV（1＋2）抗體與P24抗原聯(lián)合檢測為一種操作簡單、經(jīng)濟(jì)、省時高效的實(shí)驗(yàn)方法，但缺點(diǎn)是假陽性率高；而膠體硒試劑檢測漏檢率高，二者聯(lián)合使用可以互相彌補(bǔ)不足，為臨床提供快速、準(zhǔn)確的信息，在疾病的早干預(yù)、早治療，降低輸血感染風(fēng)險，估計(jì)發(fā)病率等方面具有重要意義［15］。

［1］ 辛若雷，何翔，邵一鳴.HIV－1CRF07－BC重組毒株的起源和分子流行病學(xué)研究進(jìn)展［J］.中國艾滋病性病，2009，15（2）：200－202.

［2］ 光海紅，趙玉軍.中國 HIV－1的主要流行狀況［J］.中華醫(yī)學(xué)研究雜志，2007，7（9）：799－801.

［3］ 賈祥，李麗麗，王宏智，等.我國艾滋病的流行狀況［J］.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2008，29（3）：325－327.

［4］ Ly TD，Laperche S，Brennan C，et al.Evaluation of the sensitivity and specificity of six HIV combined p24antigen and antibody assays［J］.J VirolMethods，2004，122（2）：185－194.

［5］ 李敬云.艾滋病檢測方法與應(yīng)用［M］.北京：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版，2006.

［6］ 陳鈞，陳方祥，袁玲，等.97例人類免疫缺陷病毒感染者分析［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2010，39（2）：198－199.

［7］ 劉魚，王憬惺，黃毅.HIV－1P24抗原檢測方法及應(yīng)用研究進(jìn)展［J］.中國輸血雜志，2009，22（1）：65－67.

［8］ Daar ES，Moudgil T，Meyer RD，et al.Transient high levels of viremia in patients with primary human immunodeficiency virus type 1infection［J］.N Engl J Med，1991，324（14）：961－964.

［9］ Alter HJ，Epstein JS，Swenson SG，et al.Prevalence of human immunodeficiency virus type 1p24antigen in U.S.blood donors——an assessment of the efficacy of testing in donor screening.The HIV－Antigen Study Group［J］.N Engl J Med，1990，323（19）：1312－1317.

［10］Saville RD，Constantine NT，Cleghorn FR，et al.Fourthgeneration enzyme－linked immunosorbent assay for the simultaneous detection of human immunodeficiency virus antigen and antibody［J］.J Clin Microbiol，2001，39（7）：2518－2524.

［11］譚兵，詹廷西，李青，等.醫(yī)院患者HIV抗體篩查陽性與免疫印跡試驗(yàn)結(jié)果對比分析［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2011，40（28）：2862－2864.

［12］許四宏，李秀華，宋愛京，等.第4代HIV抗原抗體聯(lián)合檢測試劑的評價［J］.中國輸血雜志，2006，19（3）：188－191.

［13］何花，李兵，趙樹銘，等.ELISA試劑聯(lián)合檢測HIV結(jié)果分析［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2010，7（24）：2752－2753.

［14］李鎣玲.國產(chǎn)與進(jìn)口抗HIV試劑檢測結(jié)果分析［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2010，7（20）：2266.

［15］楊義中.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和硒標(biāo)法在HIV抗體篩查中的聯(lián)合應(yīng)用［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2011，8（6）：730－731.