黃川峰

腦缺血再灌注損傷是由于缺血缺氧后，腦細(xì)胞在再灌注情況下發(fā)生損傷，在此損傷過程中，有多種機(jī)制參與，其中炎癥反應(yīng)、氧自由基損傷、鈣超載的等起著重要作用。研究認(rèn)為，腦缺血下誘導(dǎo)的炎癥細(xì)胞因子如白介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)等表達(dá)在腦缺血再灌注損傷中其著重要作用。醒腦靜注射液是由麝香、梔子、郁金、冰片等成分制成，具有清熱瀉火，涼血解毒，開竅醒腦之功效。本文觀察醒腦靜注射液對(duì)腦缺再灌注損傷小鼠血清IL-6和TNF-α水平影響。

1 材料和方法

1.1 動(dòng)物 選擇健康昆明雄性小鼠共60只，由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，體重為20～22 g，SPF級(jí)。

1.2 試驗(yàn)儀器、試劑和藥物 主要試驗(yàn)儀器:γ-放射免疫計(jì)數(shù)器、離心機(jī)等。醒腦靜注射液(河北天地藥業(yè)股份公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字Z41020664，批號(hào):110219);TNF-а和IL-6放免檢測(cè)試劑盒(購于深圳市科潤(rùn)達(dá)生物工程有限公司)。

1.3 腦缺血再灌注損傷小鼠模型 各組小鼠均在25℃下無菌環(huán)境下手術(shù)造模，10%水合氯醛麻醉，劑量為350 mg/kg。麻醉成功后，仰臥位，四肢固定。分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，4號(hào)絲線扣待用，拉緊絲線扣即可阻斷血流，松開絲線扣，血流可再灌注。阻斷血流后可見小鼠驚厥、呼吸深且慢、心率增加。阻斷血流10 min后絲線扣松開血流灌注10 min，而后再次拉緊絲線扣阻斷血流10 min，再次松開絲線扣再灌注血流10 min。觀察小鼠呼吸心跳，如平穩(wěn)，可關(guān)閉切口。而假手術(shù)組僅僅分離出頸總動(dòng)脈，不阻斷血流及再灌注。

1.4 試驗(yàn)分組和給藥方法 試驗(yàn)分為5組:假手術(shù)組、模型組、高劑量組、中劑量組、低劑量組，每組小鼠12只。5組均在術(shù)后的第二天給藥。假手術(shù)組和模型組給予生理鹽水腹腔注射，體積同其他三組。高、中、低三個(gè)劑量組均在造模后第2天給予醒腦靜注射液，劑量分別為10 ml/kg、5 ml/kg、2.5 ml/kg，稀釋為0.5 ml后腹腔注射。1次/d，連續(xù)注射液5 d。

1.5 指標(biāo)測(cè)定 各組小鼠在末次給藥后12 h后采用摘除眼球法取血，離心后取血清，采用放射免疫法測(cè)定小鼠血清IL-6和TNF-α水平。具體測(cè)定步驟依據(jù)試劑盒提供的步驟進(jìn)行。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 14.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組均數(shù)比較采用單因素方差分析，組件比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05顯示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

各組IL-6和TNF-α水平測(cè)定結(jié)果比較:模型組IL-6和TNF-α水平分別高于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);高、中、低劑量組IL-6和TNF-α水平分別低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);高劑量組IL-6和TNF-α水平分別低于中劑量組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);中劑量組IL-6和TNF-α水平分別低于低劑量組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 各組IL-6和TNF-α水平測(cè)定結(jié)果

3 討論

白介素-6屬于一種重要的炎癥細(xì)胞因子。但是，在正常狀態(tài)下，白介素-6水平很低，其在腦內(nèi)的表達(dá)處于低水平狀態(tài)。但是當(dāng)腦發(fā)生缺血再灌注損傷后，中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)加強(qiáng)，此時(shí)白介素-6表達(dá)水平升高。而腫瘤壞死因子-а在腦組織中主要是由星形細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞分泌，腫瘤壞死因子-а具有多方面生理作用，它可介導(dǎo)白介素-6等多種炎癥介質(zhì)，對(duì)免疫過程也有不同程度的調(diào)節(jié)作用，而腫瘤壞死因子也參與脂質(zhì)代謝，同時(shí)對(duì)糖的代謝也有一定的影響［1-3］。當(dāng)腦組織發(fā)生缺血缺氧及血流再灌注時(shí)，腫瘤壞死因子-а通過刺激損傷的血管內(nèi)皮細(xì)胞，提高白細(xì)胞對(duì)血管內(nèi)皮粘附作用，內(nèi)皮細(xì)胞相關(guān)狀態(tài)發(fā)生改變，導(dǎo)致血栓素A2、內(nèi)皮素等縮血管物質(zhì)釋放增加，從而導(dǎo)致血管收縮，引起血管閉塞。腫瘤壞死因子-а能夠促使興奮性氨基酸釋放水平提高，神經(jīng)毒性增強(qiáng)。研究表明，炎癥反應(yīng)在腦缺血再灌注損傷中起著重要作用。而在腦缺血再灌注損傷中，IL-6和TNF-а等炎性細(xì)胞因子的釋放增加，同時(shí)二者水平增加可導(dǎo)致級(jí)聯(lián)反應(yīng)，使血腦屏障受損，局部腦組織發(fā)生腫脹，導(dǎo)致神經(jīng)元損傷，引發(fā)局部神經(jīng)功能缺損癥狀［4，5］。

本文結(jié)果顯示，模型組IL-6和TNF-α水平分別高于假手術(shù)組;高、中、低劑量組IL-6和TNF-α水平分別低于模型組;高劑量組IL-6和TNF-α水平分別低于中劑量組;中劑量組IL-6和TNF-α水平分別低于低劑量組。說明IL-6和TNF-а在腦缺血再灌注損傷中表達(dá)水平升高，參與了腦缺血再灌注損傷，而醒腦劑注射液能夠降低IL-6和TNF-α表達(dá)，對(duì)腦缺血再灌注損傷中的炎癥反應(yīng)有一定的抑制作用。但醒腦靜注射液對(duì)腦缺血再灌注損傷中的氧自由基損傷、鈣超載等機(jī)制是否有影響，尚待進(jìn)一步研究。

［1］ 向贊，董大翠，劉慶瑩.腦缺血與白細(xì)胞介素-6的變化.江漢大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2005，23(2):83-87．

［2］ 張莉莉，王景周，周華東，等.腫瘤壞死因子-a在大鼠腦缺血再灌注損傷中的作用機(jī)制.中華老年醫(yī)學(xué)雜志，2003，22(2):102-104．

［3］ Caso JR，Moro MA，Lorenzo P，et al.Involvement of IL-1 beta in acute stress induced worsening of cerebral ischaemia in rats.Eur Neuropsychopharmacol，2007，17(9):600-607．

［4］ 吳建華，方云祥.法舒地爾對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷炎癥反應(yīng)的影響.中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2008，13(4):377．

［5］ 陳壽權(quán)，王萬鐵，王明山，等.醒腦靜對(duì)家兔腦缺血再灌注時(shí)TNF、IL-1、IL-6水平及腦超微結(jié)構(gòu)影響的實(shí)驗(yàn)研究.中國(guó)急救醫(yī)學(xué)，2000，20(11):637．