王粉安 鄭海波 趙東玲

[摘要] 目的 建立婦炎舒片中丹酚酸B的含量測定方法。 方法 以丹酚酸B為測定指標(biāo)，HPLC測定婦炎舒片中丹酚酸B的含量。色譜條件：色譜柱為KromasilC18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）；檢測波長：286 nm；流速：1.0 mL/min。 結(jié)果 丹酚酸B對照品在0.508～3.176 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r ＝ 0.999 9；平均回收率為97.94%，RSD = 1.14（n = 6）。 結(jié)論 本定量方法簡便、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)，能有效控制婦炎片的質(zhì)量。

[關(guān)鍵詞] 婦炎舒片；高效液相色譜法；丹酚酸B；含量測定

[中圖分類號] R286.0[文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B[文章編號] 1674-4721（2012）07（c）-0079-02

Determination of salvianolic acid B in Fuyanshu Tablets by HPLC

WANG Fen'an1 ZHENG Haibo2 ZHAO Dongling3

1.Ruixin Pharmaceuticals Co.Ltd of Xi'an Jiaotong University in Shannxi Province, Xi'an 710061, China; 2.Medical college of Xi'an Jiaotong University in Shannxi Province, Xi'an 710061, China; 3. Hospital of Xi'an Jiaotong University in Shannxi Province, Xi'an 710061, China

[Abstract] Objective To determine of salvianolic acid B in Fuyanshu tablets by HPLC. Methods With salvianolic acid B as the Determination index, HPLC was used to determine the contents of salvianolic acid B in Fuyanshu tablets. The analysis was performed on a Kromasil C18 column(250 mm×4.6 mm, 5 μm); The mobile phase was methanol-acetonitrile- formic acid-water (30∶10∶1∶59) at a flow rate of 1.0 mL/min; The detective wavelength was 286 nm. Results The standard of curves of salvianolic acid B showed a good linearity from 0.508 μg to 3.176 μg, (r = 0.999 9); average recovery was 97.94%，RSD = 1.14(n = 6). Conclusion The quantitative method is simple and convenient, accuracy, and strong specificity which can effective control the quality of Fuyanshu Tablets.

[Key words] Fuyanshu tablets; HPLC；Salvianolic acid B; Content determination

婦炎舒膠囊為《國家藥品監(jiān)督管理局國家藥品標(biāo)準(zhǔn)中成藥地標(biāo)升國標(biāo)外科婦科分冊》中收載的品種，具有清熱涼血，活血止痛的功效[1]。婦炎舒片為改劑型品種，處方由忍冬藤、大血藤、丹參、芍藥、甘草等十一味藥味組成，文獻(xiàn)報道及該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中都采用HPLC法測定芍藥中芍藥苷的含量[2-3]。處方中丹參具有祛瘀止痛、涼血消癰、清心除煩的功效[4]，本文筆者結(jié)合文獻(xiàn)采用HPLC法增加丹參中丹酚酸B的含量測定方法[5-6]，有利于制劑中多組分的質(zhì)量控制，報道如下：

1 儀器與試劑

1.1 儀器

島津LC-2010CHT 型高效液相色譜儀，LCsolution工作站。

1.2 試劑

丹酚酸B對照品（購自中國藥品生物制品檢定所，批號：111562-200605）；婦炎舒片（自制，批號：01、02、03）。

2方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）；流速：1.0 mL/min；檢測波長286 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。在此條件下，色譜圖顯示供試品中丹酚酸B與其他雜質(zhì)峰基線分離。見圖1。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取對照品丹酚酸B 15.88 mg，置于25 mL量瓶中，加甲醇制成每1毫升含0.635 2 mg的溶液，作為貯備液。分別精密吸取2、3、5、3、5mL貯備液分別置于25、25、25、10、10 mL量瓶中，加入70%甲醇稀釋至刻度，分別得到每1毫升含丹酚酸B 0.050 8、0.076 2、0.127 0、0.190 6、0.317 6 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品10片，研細(xì)，取約0.5 g，精密稱定，精密加入70%甲醇50 mL，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，稱定重量，加70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 按供試品處方工藝制備不含丹參的陰性樣品1 g，按2.2.2項下方法制成陰性對照溶液。

2.3 線性試驗

精密吸取上述對照品溶液各10 μL，按2.1項下色譜條件測定峰面積，以進(jìn)樣量（C，μg）對峰面積（A）作標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算丹酚酸B的回歸方程為A=6.605 6×105C-8 230.7（r = 0.999 8），結(jié)果表明在0.508～3.176 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗

精密吸取供試品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，測定色譜峰面積，丹酚酸B RSD = 0.57。

2.5 重復(fù)性試驗

取同一批號供試品（批號：01），平行稱取6份，按2.2.2項下方法制備，精密吸取10 μL，按2.1項下色譜條件測定，樣品平均含量9.91 mg/g，RSD = 1.15。

2.6 穩(wěn)定性試驗

取同一批供試品溶液，精密吸取10 μL，按2.1項下色譜條件分別在0、2、4、8、24、48 h測定，丹酚酸B色譜峰面積RSD = 1.09，表明穩(wěn)定性良好。

2.7 加樣回收率試驗

取2.3項下已知含量的樣品（批號：01，樣品平均含量9.91 mg/g）約0.25 g，平行精密稱取6份，分別精密加入丹酚酸B對照品（0.127 0 mg/mL）溶液2 mL，揮干溶劑后，按2.2.2項下同法制備，測定含量，平均回收率為97.94%，RSD = 1.14。見表1。

2.8 樣品測定

按2.1項下色譜條件，精密吸取供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定，結(jié)果見表2。

3 討論

（1）由于處方中丹參經(jīng)過乙醇提取，筆者結(jié)合文獻(xiàn)考察了丹參飲片中丹酚酸B在提取工藝中的含量變化，再結(jié)合芍藥苷的含量變化，多指標(biāo)優(yōu)化工藝參數(shù)[7-8]，有利于在批量生產(chǎn)中保持藥品質(zhì)量的穩(wěn)定。（2）本試驗對樣品的處理方法進(jìn)行了考察，比較了樣品回流提取、超聲提取的方法，證明兩種方法測定結(jié)果接近，而超聲處理方法相對簡便，故選用超聲提取的方式。但由于丹酚酸B含有多個酚羥基和酯鍵，對光和溫度都比較敏感，非常容易發(fā)生氧化和水解反應(yīng)。因此，在制備和放置樣品的過程中應(yīng)注意保持低溫和避光，且超聲時間不宜過長，以免因溶液過熱而發(fā)生降解。經(jīng)試驗比較，超聲10 min即可。（3）關(guān)于檢測波長的選擇，筆者用丹酚酸B對照品在200～400 nm進(jìn)行紫外掃描，發(fā)現(xiàn)其在286 nm波長處有最大吸收，響應(yīng)值大、靈敏度高、便于檢測，故選擇286 nm為檢測波長。（4）關(guān)于流動相的選擇，筆者經(jīng)查閱文獻(xiàn)，對不同的流動相如：甲醇-乙腈-冰醋酸-水（15∶15∶5∶65）、乙腈-水（10∶90）、乙腈-0.1%磷酸溶液（13∶87）、甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）以及本文采用的甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）等進(jìn)行了比較，因為丹酚酸B為酸性化合物，在流動相中加入適量的酸可以改善峰形，避免發(fā)生拖尾現(xiàn)象，故本試驗采用甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）為流動相，可以達(dá)到很好的分離效果，且陰性試驗無干擾。（5）筆者增加制劑中丹酚酸B的含量測定方法，重復(fù)性好，能整體控制藥品的質(zhì)量，保證療效。

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（收稿日期：2012-04-17本文編輯：魏玉坡）