邢俊波，曹 紅，王國(guó)佳

(中國(guó)人民解放軍總后勤部衛(wèi)生部藥品儀器檢驗(yàn)所，北京100071)

白芷為傘形科植物白芷的干燥根，性溫，味辛，具有散風(fēng)除濕，通竅止痛，消腫排膿的功效［1－2］，臨床上主治感冒頭痛、眉棱骨痛、鼻塞、牙痛等癥。歷版《中國(guó)藥典》均有收載。為了進(jìn)一步對(duì)其進(jìn)行研究開發(fā)，本文對(duì)白芷乙醇提取物(Ethanol extract of Radix Angelicae dahuricae，EEAD)的鎮(zhèn)痛作用進(jìn)行了初步研究。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥品與試劑 EEAD的制備

實(shí)驗(yàn)用白芷購(gòu)自北京綠野飲片有限公司，由總后藥檢所中藥室邢俊波鑒定為傘形科植物白芷Angelica dahurica(Fisch.Ex Hoffm.)Benth.Et Hook.f.的干燥根。取白芷藥材，加8倍量的70%乙醇，浸泡24 h，2 mL/min滲漉，干燥，得到白芷流浸膏，出膏率為22.9%。每克浸膏相當(dāng)于4.4 g原藥材，臨用時(shí)以0.5%吐溫－80溶液配成所需濃度。阿司匹林片(北京市曙光藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)100928);吐溫－80(分析純，中國(guó)醫(yī)藥公司，批號(hào)920920)，36%醋酸(北京化工廠，批號(hào)20061211)，水為蒸餾水。

1.2 儀器

ME215S電子天平，由德國(guó)賽多利斯公司生產(chǎn);GJ－8402型熱板測(cè)痛儀，由中國(guó)浙江寧海白石電子醫(yī)藥儀器廠生產(chǎn);DK98－1電熱恒溫水浴鍋，北京賽伯樂儀器公司。

1.3 動(dòng)物

昆明種雌性小鼠，體重18～22 g，購(gòu)于軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。

1.4 數(shù)據(jù)處理

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液的制備

按照小鼠平均體重20 g，灌胃0.4 mL，計(jì)算得高濃度、中濃度、低濃度的白芷浸膏溶液(相當(dāng)于白芷原藥材/小鼠體重為 4 g/kg、2 g/kg、1 g/kg)的濃度為0.045 5 g/mL、0.022 75 g/mL、0.011 38 g/mL。

精密稱取白芷浸膏4.55 g，研細(xì)，置于100 mL容量瓶，加吐溫80適量，加蒸餾水至刻度，搖勻，定容。制得高濃度白芷浸膏溶液。用移液管量取25mL和12.5 mL的高濃度白芷浸膏溶液，分別置于50 mL容量瓶中，加水至刻度，得中濃度和低濃度的白芷浸膏溶液。

阿司匹林片每片重約0.5 g，按70 kg人體重算0.007 2 g/kg體重，10倍于人的給藥劑量給小鼠，按照小鼠平均體重20 g，灌胃0.4 mL計(jì)算得阿司匹林片濃度為0.003 6 g/mL。精密稱取阿司匹林片0.361 9 g，置于100 mL量瓶中，加蒸餾水至刻度，定容，搖勻，配制成0.003 6 g/mL的阿司匹林片溶液100 mL。

用移液管移取36%的醋酸溶液1.7 mL，置于100 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，定容即得0.6%的醋酸溶液。

2.2 熱板法

2.2.1 熱板溫度 調(diào)節(jié)溫度水浴恒定于(55±0.1)℃

2.2.2 動(dòng)物篩選 取雌性小鼠放入燒杯后，30 s內(nèi)有舔后足反應(yīng)者為合格小鼠，對(duì)逃避跳躍者和30 s內(nèi)不出現(xiàn)添后足者，棄之不用。

2.2.3 實(shí)驗(yàn)分組 用GJ－8402熱板測(cè)痛儀，溫度為(55±0.5)℃，記錄小鼠足底接觸熱板至出現(xiàn)舔后足的時(shí)間(S)，即熱板反應(yīng)潛伏期作為痛閾指標(biāo)，室溫18℃ 左右，選用預(yù)篩基礎(chǔ)痛閾值在5S～30 S之雌性小鼠40只，8只一組，分空白、阿司匹林片、高濃度、中濃度、低濃度5個(gè)組，空白組給藥蒸餾水，按照0.2 mL/10g小鼠體重給藥，每只小鼠給藥0.4 mL，連續(xù)給藥3天。

2.2.4 測(cè)痛閾值 小鼠給藥前禁食12 h(不禁水)，第3天給藥前測(cè)定小鼠痛閾值一次，在口服給藥后20、40、60、90 min各測(cè)痛閾值一次，并記錄痛閾值。給藥后，若小鼠在熱板上60 s仍無痛覺反應(yīng)，應(yīng)取出，按60 s計(jì)算。按下式計(jì)算痛閾提高百分率。

2.2.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果見表1。

表1 白芷提取物素對(duì)熱板致小鼠疼痛反應(yīng)的影響

結(jié)果表明，白芷提取物可以顯著延長(zhǎng)小鼠熱板反應(yīng)的潛伏期，給藥后90 min最明顯。

2.3 扭體法

2.3.1 實(shí)驗(yàn)分組 50只小鼠，雌雄各半，10只一組，分空白、阿司匹林片、高濃度、中濃度、低濃度5個(gè)組，空白組給藥蒸餾水，按照0.2 mL/10g小鼠體重給藥，每只小鼠給藥0.4 mL，連續(xù)給藥3 d。

2.3.2 測(cè)扭體次數(shù) 給藥30 min后，各組小鼠腹腔注射新制的0.6%醋酸0.2 mL/只。分別在注射醋酸溶液后15～30 min內(nèi)出現(xiàn)的扭體反應(yīng)(即腹部?jī)?nèi)凹、軀干與后肢伸張、臀部高起、蠕行)次數(shù)及時(shí)間，記錄結(jié)果。

2.3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果見表2。

表2 白芷提取物對(duì)醋酸所致小鼠疼痛的影響

結(jié)果表明，白芷提取物和阿司匹林片都能延長(zhǎng)扭體反應(yīng)出現(xiàn)的時(shí)間，白芷提取物高濃度組與中濃度組能顯著抑制小鼠扭體反應(yīng)出現(xiàn)次數(shù)，其中高濃度組效果最明顯。

3 討論

3.1 在熱板實(shí)驗(yàn)小鼠篩選過程中，正常小鼠一般放入燒杯后10～15 s內(nèi)出現(xiàn)不安，舉前肢，添后足，踢后肢，跳躍等現(xiàn)象。這些動(dòng)作均不作為疼痛指標(biāo)，只有舔后足才作為疼痛的指標(biāo)。不用雄鼠，陰囊可觸燒杯底部，易呈現(xiàn)敏感反應(yīng)。

3.2 扭體實(shí)驗(yàn)時(shí)，0.6%醋酸溶液在臨用時(shí)新配為宜，存放過久可使作用減弱。小鼠體重輕，“扭體反應(yīng)”次數(shù)較低。鎮(zhèn)痛百分率大于50%時(shí)，才能認(rèn)為有鎮(zhèn)痛效力。室溫以20℃為宜，低溫時(shí)，小白鼠扭體次數(shù)減少。動(dòng)物的疼痛反應(yīng)個(gè)體差異較大，因此實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物數(shù)越多結(jié)果越可靠。

3.3 白芷作為一種解表藥，在臨床治療各種類型的疼痛癥狀中廣泛應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明EEAD在以上的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)中鎮(zhèn)痛效果確切，且維持時(shí)間較長(zhǎng)，對(duì)其進(jìn)一步進(jìn)行新藥研發(fā)提供了依據(jù)。

［1］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)［S］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:97.

［2］魏玉平，劉 俊，嚴(yán)小林，等.白芷治療頭痛的提取工藝評(píng)判指標(biāo)的研究［J］.中草藥，200l，32(4):318.