葉綠萍，李啟軍，劉小意

1.廣西中醫(yī)學(xué)院一附院藥學(xué)部，廣西南寧 530023；2.廣西壯族自治區(qū)南寧市武鳴縣人民醫(yī)院藥劑科，廣西南寧 530100

中藥配方顆粒又稱免煎中藥，單味中藥濃縮顆粒是將單味中藥飲片經(jīng)過(guò)科學(xué)加工并提取中藥材的有效成分后，制成的中藥飲片新劑型[1]。五味子配方顆粒劑以五味子藥材或飲片為原料，經(jīng)水提取后加適量輔料，濃縮，噴霧干燥，干式制粒而制成的顆粒劑型，臨床要求其要具有與原藥材相同的功效[2]。本實(shí)驗(yàn)依據(jù)中藥傳統(tǒng)湯劑的煎煮方法，以提取率、五味子甲素（DSSD）、五味子乙素（γ-schisandrin，γ-SSD）含量為指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)法優(yōu)選北五味子配方顆粒的最佳提取工藝?，F(xiàn)報(bào)道如下：

1 儀器與試藥

1.1 儀器

美國(guó)Agilent 1100高效液相色譜儀，G1322A-Degasser（真空脫氣機(jī)），G1311A 四元泵（QuatPump），G1313A 自動(dòng)進(jìn)樣器（ALS），DAD 檢測(cè)器，Agilent Chemstation（化學(xué)工作站）。AND GR202 電子分析天平（0.01 mg，日本），CREST 超聲波清洗器 （美國(guó)），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE-52A（上海亞榮生化儀器廠），KDM型連續(xù)可調(diào)控溫電熱套（山東鄄城）。

1.2 試藥

五味子甲素 （中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：110764-200905）、五味子乙素（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：110765-200905）。北五味子配方顆粒（自制，批號(hào)：20100401、20100501、20100502）。 HPLC 用甲醇（天津四友生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司，色譜純），娃哈哈純凈水（桂林娃哈哈飲用水有限公司），氯仿等化學(xué)試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Hypersil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（75∶25）；流速：1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：10 μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取減壓干燥至恒重的五味子甲素及五味子乙素對(duì)照品適量，分別加甲醇配制成0.100 mg/ml及0.125 mg/ml的對(duì)照品。

2.2.2 供試品溶液的制備 取北五味子顆粒約2.0 g，精密稱定，加氯仿10 ml，超聲提取30 min，濾過(guò)，濾液置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，定容?0 ml量瓶中，作為供試品溶液。

2.3 線性關(guān)系考察

分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液各10 μl，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件，測(cè)定DSSD及γ-SSD的含量。結(jié)果在既定的HPLC測(cè)定方法下，北五味子配方顆粒中 DSSD 及 γ-SSD 含量分別在 0.265～1.590 μg和 0.638～3.188 μg范圍內(nèi)，進(jìn)樣量與峰面積的線性關(guān)系良好（r=1.0000和r=0.9999），平均回收率分別為101.12%和100.38%，RSD值分別為1.75%和1.10%。

2.4 正交因素水平的選定

北五味子的傳統(tǒng)用法主要是與其他藥材配成處方，加水煎成湯劑服用，而北五味子配方顆粒是北五味子飲片的替代品。為保留中藥湯劑的特點(diǎn)，筆者在設(shè)計(jì)處理因素時(shí)，主要選擇水作為提取溶媒，以用水量（倍數(shù)）、提取次數(shù)、提取時(shí)間作為處理因素，每個(gè)因素選擇三個(gè)水平，進(jìn)行L9（34）正交試驗(yàn)，以五味子DSSD、γ-SSD含量作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，同時(shí)參考提取率，篩選出五味子提取的最佳條件?？疾煲蛩厮揭?jiàn)表1。

表1 考察因素水平情況

2.5 正交試驗(yàn)篩選五味子的提取工藝

依據(jù)L9（34）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)安排，按照既定要求提取并制備北五味子配方顆粒，計(jì)算綜合評(píng)分時(shí)，由于顆粒中DSSD、γ-SSD含量較低，故在計(jì)算綜合評(píng)分時(shí)，將該數(shù)據(jù)擴(kuò)大500倍，以求合理性。綜合評(píng)分=提取率+五味子甲素含量（%）×500+五味子乙素含量（%）×500。結(jié)果顯示，影響北五味子配方顆粒提取率 （%）、DSSD、γ-SSD含量的主要因素依次為提取次數(shù)、提取時(shí)間、用水量，其中提取次數(shù)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有顯著影響，最佳工藝條件為B3C3A2，即加水量為10倍，提取3次，每次2 h。 結(jié)果見(jiàn)表2、3。

表2 L9（34）正交試驗(yàn)篩選五味子的提取工藝結(jié)果

表3 方差分析結(jié)果

2.6 驗(yàn)證試驗(yàn)情況

稱取北五味子50 g，共3份，按照最優(yōu)條件B3C3A2提取，真空減壓濃縮至80 ml，按“供試品溶液的制備”項(xiàng)下操作，測(cè)定峰面積，計(jì)算提取率、藥液中五味子甲素及五味子乙素的含量。結(jié)果顯示，驗(yàn)證結(jié)果與正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)預(yù)測(cè)結(jié)果基本接近，測(cè)得DSSD平均含量為0.024%，γ-SSD平均含量為0.049%，平均提取率為36.12%。即該提取工藝具有提取率穩(wěn)定性好、五味子甲素及五味子乙素得率高、操作簡(jiǎn)單且成本較低的特點(diǎn)，提示該提取工藝穩(wěn)定、可行。見(jiàn)表4。

表4 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果（%）

3 討論

北五味子[Schisandra chinensis （Turcz.） Baill.]別名為五味子，為木蘭科植物五味子屬多年生落葉木質(zhì)藤本植物的干燥成熟果實(shí)，因其果實(shí)甘、酸、辛、苦、咸五味俱全而得名[3]。北五味子主產(chǎn)于遼寧、黑龍江、吉林等地。有研究表明，其水提液具有延緩衰老的作用；而乙醇提取液則有安眠鎮(zhèn)靜作用；木酯素類具有保肝護(hù)肝作用，而且五味子制劑對(duì)動(dòng)物的長(zhǎng)期不良反應(yīng)少[4]，臨床多用于久咳虛喘、夢(mèng)遺滑精、遺尿、尿頻、久瀉不止、自汗、盜汗、津傷口渴、短氣脈虛、內(nèi)熱消渴、心悸失眠等[5]。

目前，為了使配方顆粒的功效及特性盡可能地與中藥湯劑接近，國(guó)內(nèi)大部分專家、學(xué)者都主張采用以水作為提取溶媒，所以在北五味子配方顆粒制備過(guò)程中，筆者也采納了這一個(gè)主張。由于北五味子提取液中五味子甲素、五味子乙素含量較低，這可能與用水作為溶媒有關(guān)，不同批次的北五味子原料中五味子甲素、五味子乙素含量有一定的差異，所以生產(chǎn)過(guò)程中工藝參數(shù)的控制及原料的選取應(yīng)給予足夠的重視。值得注意的是，由于南五味子中不含五味子乙素，所以本配方顆粒原料只能選用北五味子。結(jié)果顯示，其最佳工藝條件為加水量為10倍，提取3次，每次2 h。并測(cè)得DSSD平均含量為0.024%，γ-SSD平均含量為0.049%，平均提取率為36.12%。提示該提取工藝穩(wěn)定、可行。

[1]諸明娜.免煎中藥配方顆粒與傳統(tǒng)中藥飲片的比較[J].湖北中醫(yī)雜志,2004,26(11):55.

[2]國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.中藥配方顆粒管理暫行規(guī)定[S].2001.

[3]聶江力,裴毅,祖元?jiǎng)?北五味子果實(shí)超臨界CO2萃取工藝的研究[J].植物研究,2005,25(2):213-215.

[4]楊放,袁軍,付平.五味子的研究概況[J].華西藥學(xué)雜志,2003,18(6):438-440.

[5]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:44-45.